草乌的研究进展及质量标志物预测

草乌药用价值极高,在中医、蒙医等领域具有悠久的用药历史,但因其中毒剂量和治疗剂量较为接近,治疗窗狭窄,其临床应用受到一定限制,因此全方位建立草乌的质量标准评价体系是十分必要的。从基源考证、化学成分和药理作用等几个方面对草乌的研究现状进行综述。基于中药质量标志物(Q-marker)理论,针对草乌活性毒性的药物特性,结合其化学成分、现代药理毒理活性研究等方面,推测乌头碱型二萜生物碱类和挥发油可作为其Q-marker,为草乌的质量评价研究提供科学依据。

草乌炮制研究概况

乌头类中药草乌是我国广泛使用的毒性药材,性热有大毒,归心、肝、脾、肾经,具有祛风散寒、温经止痛等功效。草乌毒性主要表现为可引发心律失常的心肌毒性,伴有心脏血管系统异常等问题,中毒严重时可导致死亡。因其毒性剧烈,乌头类药材生品不入药使用,需经炮制后入药。草乌炮制方法并无统一标准,差异表现在药材前期处理、蒸煮工艺、辅料选择等方面。本文对草乌毒性研究进展及炮制方法沿革进行归纳,为今后草乌的炮制方法等研究提供参考。

基于网络药理学和细胞实验探讨草乌治疗关节炎的作用机制

目的基于网络药理学和细胞实验探讨草乌治疗关节炎的作用机制。方法于TCMSP数据库筛选草乌的活性成分,PharmMapper、SwissTargetPrediction数据库获取成分靶点,OMIM、Drugbank、GeneCards数据库获得关节炎疾病靶点;通过STRING平台筛选成分和疾病交集靶点并进行PPI分析;通过Metascape平台对交集靶点进行GO和KEGG分析;利用Cytoscape软件进行可视化分析;通过AutoDockTools和PyMol软件进行分子对接和图像处理。通过细胞实验对网络药理学研究结果进行验证,利用PMA诱导THP-1细胞向巨噬细胞转变,通过LPS和ATP刺激巨噬细胞构建炎症模型,MTT法检测细胞毒活性,ELISA法测定促炎因子和MAPK8蛋白表达。结果共获得8种草乌活性成分、72个交集靶点,143条信号通路。草乌通过骨髓白细胞免疫反应和细胞外基质分解等生物过程,作用于MAPK8、PIK3CD、MTOR、MAPK14、AKR1C2、GSTP1等关键靶点,并可通过调控松弛素信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B信号通路、钙信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路等治疗关节炎。草乌8种活性成分与6个关键靶点均存在分子对接位点。草乌提取物能降低IL-6、TNF-α、IL-1β水平和MAPK8蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论草乌能通过多成分、多靶点、多通路、多机制治疗关节炎,其机制在于调节MAPK通路,抑制炎症因子,阻断炎症反应。

复方川草乌合剂镇痛抗炎作用的实验研究

目的:探究复方川草乌合剂对小鼠的肝肾毒性及其镇痛抗炎作用。方法:将48只雄性ICR小鼠随机分为正常组、模型组及复方川草乌合剂低(0.33 g/mL)、中(0.66 g/mL)、高(1.32 g/mL)剂量组与正常+复方川草乌合剂高剂量组,每组8只。正常组小鼠不造模,其余各组用完全弗氏佐剂(complete freund′s adjuvant,CFA)于小鼠足底皮下注射染毒造模,复方川草乌合剂各剂量组灌胃相应剂量复方川草乌合剂,正常组和模型组灌胃双蒸水。检测不同时间点各组小鼠机械刺激痛阈值和热辐射痛阈值;干预7天后观察各组小鼠肝脏及肾脏组织病理学变化情况;酶联免疫吸附试验检测各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷胱甘肽氨基转移酶(glutathione aminotransferase,AST)、直接胆红素(direct bilirubin,DB)、总胆红素(total bilirubin,TB)、肌酐(creatinine,CRE)、尿酸(uric acid,UA)、尿素氮(UREA)含量以及足组织中白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)含量。结果:与模型组比较,复方川草乌合剂以剂量依赖性提高CFA诱导小鼠的机械痛阈值和热辐射潜伏时间(P<0.05);正常组及正常+复方川草乌合剂高剂量组小鼠肝细胞呈放射状排列,未见明显异常,肝小叶结构清晰,肾小管整体结构完整;各组小鼠血清ALT、AST、DB、TB及CRE、UA、UREA含量比较差异均无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,复方川草乌合剂中、高剂量组小鼠足组织IL-1β含量降低(P<0.05)。结论:复方川草乌合剂对CFA致慢性炎症性疼痛小鼠具有镇痛抗炎作用,且无耐受性,无明显肝肾毒性。

草乌致大鼠肝肾亚急性毒性的代谢组学研究

目的基于代谢组学技术分析和探讨草乌致大鼠肝肾亚急性毒性的生物标志物和可能的作用机制。方法以草乌为示例药物,以大鼠为研究对象,除正常组外,给药组灌胃相应溶液,连续给予28 d。通过代谢组学技术对采集的大鼠血清、肝、肾样本进行检测,用主成分分析结合偏最小二乘判别分析筛选肝肾亚急性毒性敏感标志物及代谢通路。结果代谢组学分析显示,与正常组比较,草乌组血清、肝、肾样本中分别鉴定得到34、23和30个差异代谢物,主要富集于ABC转运蛋白、精氨酸和脯氨酸代谢、癌症的中心碳代谢、烟酸和烟酰胺代谢等通路。结论初步认为草乌通过影响ABC转运蛋白、精氨酸和脯氨酸代谢、癌症的中心碳代谢等对肝肾造成损伤,亚精胺、羟脯氨酸、葡萄糖、L-亮氨酸和尿素可作为潜在的肝肾毒性敏感生物标志物。

制草乌肝毒性效应的代谢通路分析

目的基于代谢组学技术检测制草乌对大鼠肝功能指标及肝组织病理影响从而探究代谢通路分析。方法以制草乌为示例药物,以大鼠为研究对象,将大鼠按体重随机分成4组。根据预试验结果设定正常组、制草乌高剂量组、中剂量组、低剂量组。除正常组外,其余各给药组灌胃相应的药物溶液,1次/d,连续灌胃28 d,末次给药后收集血清样本,检测各组的血清生化指标及采用LC-MS非靶向代谢组学技术对血清内源性代谢产物变化进行分析。结果血清生化指标结果显示,与正常组比较,制草乌高剂量组ALT含量显著升高,有统计学意义(P<0.05);制草乌中和低剂量组指标差异无统计学意义(P>0.05);肝组织病理检测显示,正常组肝小叶结构清晰,肝细胞索和肝血窦大致呈放射状排列,肝细胞圆润、饱满,肝板排列规则、整齐。制草乌高剂量组肝细胞广泛水肿、空泡化、丧失结构完整性;制草乌中和低剂量组未见明显异常;从血清中共筛选出34个内源性差异代谢物,其中上调15个、下调19个,多数涉及烟酸和多种氨基酸代谢。结论明确制草乌具有一定的肝毒性;肝毒性机制主要与烟酰胺(NA)和1-甲基烟酰胺(MNA)代谢有关。

草乌幼苗形成期叶绿体发育的转录组分析

为确定草乌(Aconitum kusnezoffii Reichb.)苗期生长发育过程中的转录组特征,本研究利用Illumina测序对草乌从种子萌发到幼苗建成涉及到的四个时期(T1,T2,T3,T4)进行转录分析,挖掘草乌幼苗形成期叶绿体发育关键基因。结果显示,4个时期的6个差异分类检测到的差异基因数量依次为:16 379,28 155,16 100,34 368,38 250和44 568个。GO富集分析显示T3vsT4差异表达基因主要富集到对几丁质的反应,光合系统Ⅰ等。KEGG富集分析显示差异表达基因显著富集的通路主要是光合生物中的碳固定,植物激素信号转导等。草乌幼苗形成期叶绿体发育过程中,19个差异表达基因注释光信号调控叶绿体发育通路上,如GLK1/2,PIFs,HY5基因等。44个差异表达基因注释植物激素信号转导通路上,如AUX/IAA,ARF,DELLA基因等。本研究挖掘到一部分草乌幼苗形成期叶绿体发育相关基因,为进一步研究草乌生长发育相关分子机制提供理论基础。

不同程度制草乌生物碱含量对大鼠迷走神经动作电位和心电图的影响

目的比较不同炮制程度的制草乌生物碱含量及对SD大鼠心电图、颈部迷走神经动作电位的影响,建立生草乌及其炮制品的毒性评价方法。方法采用HPLC测定生草乌及泡煮30 min、不泡煮4 h、泡煮4 h、泡煮8 h的制草乌中苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱6个生物碱成分的含量;SD大鼠舌下引流分别给予草乌生品及4种炮制品,记录给药前后大鼠迷走神经动作电位及心电图,对生物碱含量与迷走神经放电面积和心率进行相关性分析。结果4种制草乌双酯型生物碱含量为:泡煮30 min>不泡煮4 h>泡煮4 h>泡煮8 h;单酯型生物碱含量为:不泡煮4 h>泡煮30 min>泡煮4 h>泡煮8 h。与给药前比较,大鼠舌下给予不同炮制品后迷走神经放电幅度增加,心率升高,心律失常程度增加,且随炮制程度而变化;相关性分析显示,迷走神经放电面积与双酯型生物碱和总生物碱含量有明显相关性。结论大鼠舌下引流给药后迷走神经动作电位和心电图可反映草乌麻舌程度,可为草乌“麻舌感”的研究提供参考。

草乌甲素4种皮肤屏障模型家兔在体透皮吸收对比研究

目的对比研究草乌甲素凝胶贴在正常家兔正常皮肤、正常家兔破损皮肤、病理损伤正常皮肤、病理损伤破损皮肤4种皮肤屏障模型在体透皮吸收。方法采用肌肉注射50%甘油的方法获得病理损伤模型家兔,采用1号砂纸包裹木棒轻轻摩擦皮肤表面至变为浅红的方法制备破损皮肤。4种皮肤屏障模型经皮给予草乌甲素凝胶贴,正常皮肤于给药后1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、8 h、10 h采血,破损皮肤于给药后1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h、8 h、10 h、12 h、24 h、36 h采血,HPLC-MS/MS检测4种模型家兔草乌甲素给药后不同时间点血浆药物浓度,采用DAS 3.2.0计算药代参数,SPSS 23.0进行组间药代参数统计。结果AUC(0-t)、AUC(0-∞)、Cmax 3个药代参数在4种皮肤屏障模型家兔的变化趋势一致,大小分别为:正常家兔破损皮肤>病理损伤破损皮肤>病理损伤正常皮肤>正常家兔正常皮肤。皮肤外环境不同对草乌甲素透过率产生较大影响,破损皮肤透过率明显高于正常皮肤(P<0.05);单纯病理损伤(内伤),皮肤状态一致,草乌甲素的吸收、消除的程度和速度均无明显影响(P>0.05);模拟外伤所致正常家兔破损皮肤、内外伤的病理损伤破损皮肤与正常家兔正常皮肤相比,草乌甲素吸收程度大幅提高、消除能力明显降低(P<0.05)。结论皮肤角质层的屏障功能是草乌甲素透皮吸收的主要限制因素,外伤或内外伤状态下,可能导致草乌甲素在体内蓄积,影响用药安全。在进行经皮给药制剂试验研究时,应同时进行正常和模拟外伤所致的破损皮肤或内外伤的病理损伤破损皮肤模型对比研究,模拟临床肌肉、皮肤受到内外伤的情况下透皮吸收,将有助于更加全面准确地评价经皮给药制剂药效、药代和毒理特性。

UPLC-QTOF/MS结合网络药理学探讨诃子与草乌配伍“异病同治”类风湿性关节炎和痛风性关节炎作用机制

目的:探讨诃子与草乌配伍“异病同治”类风湿性关节炎(RA)和痛风性关节炎(GA)的作用机制。方法:采用数据挖掘技术找出治疗“图赖”病的核心药物组合(诃子-草乌),并使用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法(UPLC-QTOF/MS)检测大鼠灌胃诃子与草乌配伍药物后的入血成分;运用PubChem、Swiss Target Prediction、GeneCards、OMIM、DisGeNET、Metascape等多个数据库检索诃子与草乌化学成分对应靶点、RA和GA的疾病靶点,以及代谢通路等信息,利用Cytoscape3.8.2软件构建成分-靶点-通路-疾病网络,并利用分子对接方法证实诃子与草乌的主要成分与关键靶点之间的高亲合力。结果:诃子与草乌入血成分相应靶点与RA靶点交集后得到323个交集靶点、与GA靶点交集后得到24个交集靶点,两者共有靶点24个,主要有肿瘤坏死因子(TNF)、肿瘤蛋白p53(TP53)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)和信号转导和转录激活因子3(STAT3),与十八碳四烯酸、绢酸、5-(3-羟基-4-乙酰氧基-1-丁基)-2,2'-联噻吩、灵芝酸H等有紧密联系,涉及通路有TNF信号通路、破骨细胞分化通路、癌症通路等。分子对接结果显示灵芝酸H和TNF、5-(3-羟基-4-乙酰氧基-1-丁基)-2,2'-联噻吩和MMP-9有强烈对接活性。结论:蒙古族药诃子与草乌配伍治疗RA和GA具有多靶点效应,可能通过炎症反应的调节、细胞对生物刺激的反应、对细菌源分子的反应、磷酸盐代谢的正调控和对激素的反应等通路发挥“异病同治”作用。

基于UPLC-Q-Exactive MS技术的蒙药烘草乌含药血清成分鉴定

目的本研究旨在应用高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Exactive MS)技术,全面鉴定蒙药烘草乌的含药血清成分。方法通过UPLC-MS技术对蒙药烘草乌含药血清进行主要成分鉴定。采用MSDIAL软件进行峰对齐、保留时间校正和提取峰面积,最终鉴定成分。结果共得到蒙药烘草乌含药血清46种差异化学成分。结论通过运用UPLC-Q-Exactive MS技术,能够快速、系统地分析鉴定蒙药烘草乌的成分,这为蒙药烘草乌在临床应用和药物作用研究方面提供了参考依据。

草乌化学成分、药理作用、毒性及蒙医学毒性控制方法概述

草乌所含的特征性成分二萜类生物碱是其主要毒性成分也是有效成分,具有抗炎、镇痛、抑菌、抗病毒、强心、抗肿瘤、局部麻醉等药理活性的同时也存在各种毒性作用。故传统医药通常通过炮制或配伍,降低其毒性,保障临床用药安全。作为中医药的重要组成部分蒙医药在这方面优势更为突出。

Plackett-Burman设计结合Box-Behnken响应面法筛选草乌甲素纳米乳凝胶贴膏的处方

目的优化草乌甲素纳米乳凝胶贴膏基质的处方。方法在Plackett-Burman设计、最陡爬坡实验的基础上,以甘油、酒石酸、纯化水用量作为变量,以初黏力、持黏力、感官评价的综合评分为评价指标,用Box-Behnken响应面法优化草乌甲素纳米乳凝胶贴膏基质的处方。结果最优处方为甘油用量40.877 g,酒石酸用量0.294 g,纯化水用量42.491 g,综合评分为94.937分。结论建立的方法稳定、可靠、预测性能优良,此方法可用于优化草乌甲素纳米乳凝胶贴膏基质的处方。

双向发酵对草乌中乌头碱类成分含量影响及菌质抗炎镇痛作用的初步研究

目的观察中药草乌被10种药用真菌(菌株代号为A、Q、V、D、E、F、H、SW、O①、い)发酵后,乌头碱、中乌头碱、次乌头碱含量变化及HPLC指纹图谱的差异及发酵菌质镇痛、抗炎方面的作用。方法将草乌作为"药性基质",控制一定条件,草乌被药用真菌双向固体发酵,并以草乌中的主要成分乌头碱、中乌头碱和次乌头碱为分析对象,分析草乌菌质中乌头碱类成分含量变化;并利用扭体痛证模型、耳廓肿胀模型试验研究草乌菌质各组(发酵空白组,草乌+O①组,草乌+A组,草乌+V组,草乌+F组)的药效。结果草乌+V,草乌+A菌质中乌头碱、中乌头碱及次乌头碱含量与生药材比较有明显的降低,且有新的成分产生;与发酵空白组比较,草乌+A组、草乌+V组对抑制化学刺激所致的小鼠疼痛反应有显著性差异(P<0.05)。结论双向发酵后部分"药性菌质"中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱含量明显降低,镇痛作用增强,提示双向发酵是生物技术在中医药领域中运用的有益尝试。

彝药云南红药胶囊中毒性药味制黄草乌的质量控制研究

目的:探索云南红药胶囊中毒性药味制黄草乌的质量控制方法,为制定质量标准提供依据。方法:采用显微鉴别方法筛选制剂中具专属性的显微特征,采用HPLC法对制黄草乌中滇乌碱进行限量检查。使用Eclipse Plus C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-缓冲盐溶液(水-三乙胺-磷酸比例为600∶2∶1)(40∶60)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1),检测波长260 nm,柱温30℃。结果:制黄草乌的石细胞特征具较强专属性。HPLC法测定时,滇乌碱进样量在12.24~367.18 ng范围内呈良好线性关系(r>0.9998),平均回收率为93.2%,RSD=1.96%(n=6)。15批次样品中滇乌碱的量均小于拟定限度。结论:石细胞特征可用于鉴别制黄草乌,滇乌碱限量检查方法分离效果好,可为复方制剂云南红药胶囊中制黄草乌的控制提供依据。

草乌甲素杂质——滇乌碱的制备与应用

[目的]提供了一种草乌甲素杂质——滇乌碱的制备方法,探究了滇乌碱作为杂质对照品应用的可行性。[方法]采用核磁共振波谱、质谱等进行结构确认,采用高效液相色谱进行纯度测定及质量控制研究。[结果]通过结构确认及纯度测定证实了制备得到的白色固体为滇乌碱,且纯度为99.51%,收率为58.1%。草乌甲素及杂质滇乌碱溶液在0.08μg/mL至1.0μg/mL质量浓度范围内线性良好且相对校正因子为0.95。[结论]制备出的滇乌碱可以作为对照品使用,在草乌甲素原料及制剂质量研究中,可以将滇乌碱当做已知杂质进行定位归属和精确控制,提高了草乌甲素药品质量,保证患者用药安全。

草乌甲素柱层析三元体系回收洗脱液快速调节及二次利用

目的:提供一种草乌甲素柱层析三元体系回收洗脱液快速调节的方法,适用于草乌甲素回收洗脱液的二次利用。方法:通过酸碱滴定法和密度比重法的联合运用,推导出简便的计算公式,按照操作方法测定未知量带入公式,即可准确调节草乌甲素柱层析回收液中三元溶剂的比例关系。结果:通过回收洗脱液(调节后)各组分比例关系验证及洗脱效果验证,说明按照上述方法调节后的回收液能达到新配制的水平,可进行二次利用。结论:所提供的方法原理清晰,操作简单,实用性强,并且将数学计算运用到原料药研发工艺上,使过程控制更精确且可数字化,降低废液排放和生产成本。

草乌在蒙药中的应用区别于中药的特色研究

目的:从草乌性能、炮制、应用、毒性及中毒解救等方面探讨草乌在蒙药中的应用区别于中药的特色研究。方法:检索国内外数据库中相关报道及古籍文献中有关草乌应用、炮制方法、毒性、中毒解救等相关的记载,总结草乌在蒙药中应用与中药中应用区别,探讨在蒙药中的应用特色。结果:草乌在蒙药及中药中应用性能、炮制、配伍规律、用法用量等方面均存在着一定的差异。结论:由于蒙医药理论与中医药理论有所不同,在用药方面也存在一定差异,尤其具有较强毒性的草乌类药物在临床上的应用具有明显的差异,本研究对比草乌在蒙药与中药中的应用,探讨了蒙药用草乌特色,为蒙医临床安全用草乌及为进一步研究草乌在蒙药中特色应用的独特安全性评价及风险控制措施提供参考。

不同炮制方法对中药饮片草乌临床效果的影响

目的 探讨不同炮制方法对中药饮片草乌临床效果的影响。方法 选取2022年1月—2023年1月焦作市中医院收治的180例跟骨骨质增生患者,分为观察组和对照组,各90例。两组均采用物理疗法及复方马钱子酊剂进行外敷,其中对照组草乌采用传统炮制法炮制,观察组草乌采用加压蒸制法炮制。比较两组患者治疗前后跟骨疼痛分级指数(PRI)、现有疼痛强度(PPI)、视觉模拟评分(VAS)、炎性因子水平(血清白介素-6 [IL-6]、超敏C反应蛋白[hs-CRP]及肿瘤坏死因子-α[TNF-α])及生活质量,另外评价两组治疗效果。结果 治疗后,两组PRI、PPI及VAS评分均较前降低,观察组低于对照组;治疗后两组IL-6、hs-CRP及TNF-α水平均较治疗前下降,观察组IL-6、hs-CRP及TNF-α水平低于对照组;治疗后两组GQOLI74量表各项评分均较治疗前升高,观察组各项评分高于对照组;观察组治疗总有效率为97.78%,高于对照组的88.89%(P<0.05)。结论 不同炮制方法对中药饮片草乌的临床治疗效果影响不同。加压蒸制法炮制草乌,配伍组方复方马钱子酊剂,能够有效缓解跟骨骨质增生患者疼痛症状,解除患者痛苦,降低炎性因子水平,提高治疗有效率及生活质量,值得临床推广。

草乌甲素片联合普瑞巴林胶囊治疗带状疱疹后遗神经痛疗效

目的:探讨草乌甲素片联合普瑞巴林胶囊治疗带状疱疹后遗神经痛的疗效。方法:选取2017年1月至2023年10月期间本院门诊接收的115例带状疱疹后遗神经痛患者,随机分为对照组(n=57)和观察组(n=58)。对照组采用普瑞巴林胶囊口服治疗,起始剂量为75mg·次-1,2次·d-1,治疗1w内,根据疗效及耐受性增加至150mg·次-1,2次·d-1;观察组在对照组基础上联合草乌甲素片口服治疗,1片·次-1,2次·d-1,2次服药间隔时间≥6 h,2组均治疗4 w。观察两组疗效,并于治疗前、治疗结束次日时采用匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh sleep quality index,PSQI)评估睡眠质量,采用酶联免疫吸附法测定炎症因子-C反应蛋白(Creactiveprotein,CRP)水平,统计并比较治疗期间不良反应发生情况,并通过微信或者电话的方式随访3 m,统计随访期间复发率。结果:治疗后,观察组治疗总有效率比对照组高(P<0.05)。治疗后,两组的PSQI评分均比治疗前显著降低,且观察组治疗后的PSQI评分低于对照组(P<0.05)。治疗结束后,两组的CRP水平均显著低于治疗前,且观察组的CRP水平显著低于对照组(P<0.05)。治疗期间,两组的不良反应发生率比较无显著差异(P>0.05)。随访3m期间,观察组复发率低于对照组(P<0.05)。结论:草乌甲素片联合普瑞巴林胶囊治疗带状疱疹后遗神经痛,缓解疼痛效果更佳,可提高睡眠质量,缓解炎症,且复发率低,安全性较高。