蒙古鼠兔和草原鼠兔脊柱胸廓和肩带骨的比较研究

本文对比研究了20只蒙古鼠兔草原鼠兔的骨骼标本,其结果如下:蒙古鼠兔(Ochotonapallasi)胸椎16—18块,草原鼠兔(Ochotona daurica)全是18块。颈椎长度前者短于后者。蒙古鼠兔肋骨17对,草原鼠兔16对。胸椎长度前者大于后者。前者的胸廊后口横径是背腹径的2.5倍,而后者仅1.7倍。前者锁骨长度大于后者。

草原鼠兔在新疆分布区与栖息地的初步研究

据本次调查所知,草原鼠兔在新疆境内分布区仅限于塔尔巴哈台山东段中哈边境线（中国一测）的北坡和加依尔山东麓卡因地,此外在乌尔哈夏尔山西南的玛依塔斯和东北部的吉浪特尔等山地草原.草原鼠兔是挖洞穴栖居的鼠兔,其洞口多挖在土层较松软圆柏丛下或被圆柏灌木丛完全覆盖的一些小型岩石块之间的缝隙做洞道.栖息地为海拔1 500～1 800m的山地草甸,山地草原中以主秆较细、呈匍伏式生长圆柏为主的灌丛草甸.

新疆加依尔山发现草原鼠兔

2008年9月4日,我们在进行鼠类调查时于新疆克拉玛依区加依尔山克孜勒乌赞一带的新疆圆柏灌丛中捕获2只鼠兔标本,经鉴定为草原鼠兔(Ochotona pusilla)。

黄兔尾鼠和草原兔尾鼠两种酯酶同工酶的比较分析

利用聚丙烯酰胺盘状电泳分析了新疆北部两种害鼠——黄兔尾鼠和草原兔尾鼠的α-酯酶和β-酯酶同工酶。共检查了肝脏、心脏、肌肉、肾脏、胃、肺、脑和横膈8种组织。结果表明,在同种动物中,两种酯酶同工酶具明显的组织特异性,并且部分酶带有重叠现象;在不同动物中,两种酯酶同工酶具种间特异性。不同动物中酯酶同工酶的特异性可能与其生活的特殊生态环境相适应。

正常草原兔尾鼠的血象

草原兔尾鼠是一种新开发的实验动物。本文首次报道了在人工驯养和繁殖条件下，测定了１１９只该鼠正常血象值及血细胞大小。血象结果，性别间、不同采血时间亦无显著性差异；不同年龄组，仅血小板值有显著性差异，高年龄组稍有增加。

封闭群草原兔尾鼠肝脏和胰腺的组织学观察

首次对封闭群草原兔尾鼠的肝脏、胰腺进行了组织学观察 ,结果表明 :1.草原兔尾鼠的肝脏纤维组织极少 ,肝小叶间界限不明显 ;部分中央静脉周围可见少量毛细胆管 ;门管区较少 ,分布不均匀 ,其静脉形状不规则、腔大 ,胆管及动脉则较小。 2 .胰腺分叶清晰 ,腺泡细胞较大 ,胞浆多呈嗜酸染色 ;小叶中部腺泡着色较深 ,外侧腺泡着色较浅 ;胰岛大小不等 ,细胞排列呈不规则索状 ,光镜下未见特殊改变。

草原兔尾鼠卵透明带3基因重组腺病毒载体的构建及表达

目的:探索制备免疫不育疫苗的新途径,获得草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)重组腺病毒减毒活疫苗。方法:将LZP3基因亚克隆到穿梭质粒pShuttle-CMV上,采用细菌内同源重组"两步转化法"构建携带LZP3基因的重组腺病毒载体。获得的重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞,包装成病毒颗粒。PCR鉴定重组腺病毒,继而用鉴定正确的重组腺病毒感染HeLa细胞,并以RT-PCR、Western blot检测LZP3的转录和表达。结果:成功构建了携带LZP3基因的重组腺病毒pAd-LZP3载体,其转染293细胞后包装出重组病毒,PCR证实LZP3基因已整合至腺病毒基因组中,病毒的滴度可达1.2×1010pfu/L。RT-PCR和Western blot检测表明RAd-LZP3感染的HeLa细胞中LZP3基因能够有效转录和表达。结论:制备的RAd-LZP3可成功表达LZP3基因,为后续开展RAd-LZP3免疫动物的研究奠定了基础。

年龄和性别因素对封闭群草原兔尾鼠正常血液生化指标的影响

目的 探讨性别和年龄因素对封闭群草原兔尾鼠正常血液生化指标的影响。方法 利用雅培(AEROSET)全自动血液生化测定仪对雄性组、雌性组、1月龄 2月龄组和 2 4月龄组封闭群草原兔尾鼠的 2 3项血液正常生化指标进行了测定。结果 两年龄组各指标间以及两性别组各指标间均无统计学差异。结论 本实验中封闭群草原兔尾鼠的性别因素和年龄 (1月龄 - 2月龄年龄段和 2 4月龄年龄段 )因素对测定的 2 3项正常血液生化指标没有显著影响。

草原兔尾鼠心电图的分析

本文采用标准双极导联（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）、加压单极肢导联（ａＶＲ、ａＶＬ、ａＶＦ）和单极胸导联（Ｖａ、Ｖｂ、Ｖｃ），对经１０％乌拉坦麻醉状态下的１１９只成体草原兔尾鼠进行心电图测定，同时对２０只昆明系小白鼠作为对照比较。结果表明，草原兔尾鼠的平均心率为５５８．５４±５４．５９次／ｍｉｎ，均为窦性心率，额面心电轴平均５９．６１±１２．６３度。ＰＤ－Ｒ、ＱＲＳ波、Ｑ－Ｔ、Ｐ波平均间期分别为３８．２９±６．４８、１２．７０±０．４６、２７．６２±７．３７、１２．３４±４．０９毫秒。Ｐ波和Ｔ波的方向与主波Ｒ波一致。在Ⅰ、Ⅱ、ⅢａＶＬ、ａＶＦ和Ｖａ导联为正，在ａＶＲ导联均为负向。无典型的Ｓ－Ｔ段，ＱＲＳ波群与Ｔ波部分重叠，Ｑ－Ｔ间期较短。

分子佐剂C3d增强草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗的免疫应答

为增强免疫不育的效果,探讨分子佐剂C3d对草原兔尾鼠透明带3(LaguruslagurusZonaPellucida3,LZP3)基因免疫的调节作用。构建了含3个拷贝C3d的lzp3基因真核细胞表达质粒pcDNA3-LZP3-C3d3(pcD-LC),以不含C3d的质粒pcDNA3-LZP3(pcD-L)为对照,体外转染HeLa细胞,RT-PCR和Westernblot分别检测到lzp3mRNA和蛋白的表达。对NIH雌性小鼠肌肉进行基因免疫注射,ELISA结果表明pcD-LC免疫诱导的特异性抗LZP3-IgG水平明显高于pcD-L对照组(P<0.05),且有长期免疫应答效应;MTT结果显示pcD-LC能够诱导淋巴细胞增殖活性的提高。抗生育实验表明pcD-LC免疫组显著降低窝产仔数(P<0.05),且卵巢切片正常。研究结果证实C3d能够增强lzp3DNA疫苗的特异性免疫应答并达到抗生育效果,为DNA疫苗控制草原兔尾鼠的深入研究提供了基础。

优化密码子提高草原兔尾鼠ZP3融合蛋白的原核表达

目的:探讨提高草原兔尾鼠(Lagurus lagurus)卵透明带3(LZP3)基因在原核细胞中表达的水平。方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP3基因上3个稀有的密码子簇,将LZP3基因中7个稀有的密码子更换成大肠杆菌(E.coli)最常用的相应密码子。将获得的LZP3突变基因(LZP3m)插入pGEX4T-1中,构建重组表达载体。以重组体转化E.coliBL21(DE3)菌株进行表达。结果:LZP3m基因的表达量比野生型LZP3基因明显提高。结论:通过密码子优化,能显著提高LZP3基因在原核细胞中的表达水平。

草原兔尾鼠和昆明白小鼠卵透明带3 DNA疫苗免疫不育效果的研究

为探讨不同种类小鼠卵透明带3(zp_3)的免疫不育效果,并筛选高效且具有物种特异性的DNA抗生育疫苗,本研究选择草原兔尾鼠卵透明带3(Lzp_3)和昆明白小鼠卵透明带3(Mzp_3)构建不同的DNA抗生育疫苗表达载体,pcDNA3-mzp_3(pcD-M)、pcDNA3-lzp_3(pcD-L)、pcDNA3-aat- comp-mzp_3(pcD-ACM)和pcDNA3-aat-comp-lzp_3(pcD-ACL)分别免疫NIH小白鼠。研究中用水动力转染技术取代传统的Hela细胞真核转染检测小鼠体内真核表达情况,结果表明四种质粒均能在小鼠肝脏中进行表达:ELISA图示表明重组质粒均能使小鼠激发较高水平的特异性抗体;抗生育结果表明四种DNA疫苗均具有免疫不育的效果(P<0.05),其中pcDNA3-aat-comp-mzp_3(pcD-ACM)的免疫效果最好(P<0.01);卵巢病理切片H.E染色结果显示pcD-M和pcD-L组卵巢结构与对照小鼠区别不大,而pcD-ACL和pcD-ACM组卵巢结构发生病理性变化。结果初步说明草原兔尾鼠和昆明白小鼠卵透明带3对NIH小白鼠均有抗生育效果,但不具有物种特异性。

口服草原兔尾鼠卵透明带3纳米乳剂DNA疫苗免疫效果研究

用免疫不育疫苗控制有害动物的数量成为动物种群数量控制的一个有效措施,对于大多数动物来说,口服饵料发送系统是最好的选择。但是口服疫苗容易产生耐受,且生物利用度低,利用多聚物包裹口服疫苗是一种打破口服耐受,提高其生物利用度的新途径。本文以纳米乳剂作为草原兔尾鼠卵透明带3(Lugurus zone pellucida 3,LZP3)DNA疫苗的发送载体,探讨通过口服途径增强小鼠的免疫效果和抗生育率。用纳米乳剂包裹lzp3DNA疫苗后,采用强阴离子交换色谱法测定纳米乳剂的包封率,将制备好的质粒纳米乳剂lzp3 DNA疫苗通过口服饵料免疫小鼠,检测到免疫后小鼠的体内产生了特异性的抗LZP3的IgG和IgA。对免疫后小鼠进行抗生育实验,分析生育后免疫小鼠的卵巢病理切片。研究结果表明,用质粒纳米乳剂lzp3 DNA疫苗通过口服途径免疫,在小鼠的血清和粘液中检测到了特异性的抗LZP3的IgG和IgA,同时也产生了相应的抗生育作用,表明纳米乳剂作为口服不育疫苗的发送载体是可行的,为草原兔尾鼠鼠害的防治提供了理论基础。

草原兔尾鼠卵透明带3(ZP3)cDNA保守序列的克隆与序列分析

根据 Gene Bank数据库中 5种啮齿目动物卵透明带 3 (ZP3 ) c DNA的序列 ,利用 DNAMAN和 NIH NCBI BLAST同源性分析程序设计了特异性引物。从 6周龄的未孕雌性的草原兔尾鼠卵巢中用柱离心法得到总 RNA,利用反转录技术得到 c DNA,通过特异性引物进行 PCR扩增草原兔尾鼠的 ZP3 c DNA保守序列。将扩增产物连接到 p MD1 8- T载体上 ,通过蓝白斑筛选得到阳性克隆 ,酶切鉴定后进行测序。将其与 Gene Bank中啮齿目动物 ZP3 c DNA进行同源性比较 ,获得了草原兔尾鼠 ZP3 c DNA的保守基因序列 ,与啮齿类同类基因比较 ,具有较高的同源性。

封闭群草原兔尾鼠正常血液生化指标的测定

利用雅培 (AEROSET)全自动血液生化测定仪对封闭群草原兔尾鼠 2 3项血液正常生化指标进行了测定。与昆明小鼠、BALB c nu小鼠、Wistar大鼠、人的正常值相比较 ,该种实验动物血液正常生化指标具有以下特点 :①总蛋白 (TPROT)、白蛋白 (ALB)、球蛋白 (GLOB)、总胆红素 (TBILI)、直接胆红素 (DBILI)、间接胆红素 (IBILI)、尿素氮 (UREA)、二氧化碳 (CO2 )、甘油三脂 (TG)、胆固醇 (CHOL)、钠 (Na)、氯 (Cl)、镁(Mg)、总钙 (TCA)的测定值 ,五者间无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;②封闭群草原兔尾鼠与昆明小鼠相比 ,谷草转氨酶 (AST)、谷丙转氨酶 (ALT)、糖 (GLU)、钾 (K)、磷 (P3 + )存在显著性差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;③封闭群草原兔尾鼠与BALB c nu小鼠相比 ,谷草转氨酶 (AST)、谷丙转氨酶 (ALT)、碱性磷酸酶 (ALP)、糖 (GLU)测定值 ,存在显著性差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;④封闭群草原兔尾鼠与Wistar大鼠相比 ,谷草转氨酶、谷丙转氨酶、钾、糖测定值 ,存在显著性差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 ) ;⑤封闭群草原兔尾鼠与人相比 ,谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶 (LDH)、肌肝 (CREAT)、尿酸 (UA)、钾 (K)存在显著性差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结果表明

封闭群草原兔尾鼠正常血液生化指标的测定及部分器官的组织学观察

利用雅培 ( AEROSET)全自动血液生化测定仪对封闭群草原兔尾鼠 2 3项血液正常生化指标进行了测定 ,并与昆明小鼠、人的正常值进行了比较 ,同时探讨了年龄、性别因素对封闭群草原兔尾鼠血液正常生化指标的影响。另外 ,对封闭群草原兔尾鼠的心脏、肝脏、肾脏、肺、脾脏进行了组织学观察。结果如下 :( 1)该种新开发的实验动物血液正常生化指标与昆明小鼠、人的正常值相比较具有以下特点 :1总蛋白 ( TPROT)、白蛋白 ( AL B)、球蛋白 ( GL OB)、总胆红素 ( TBIL I)、直接胆红素 ( DBIL I)、间接胆红素 ( IBIL I)、尿素氮 ( UREA)、二氧化碳 ( CO2 )、甘油三脂 ( TG)、胆固醇( CHOL )、钠 ( Na)、氯 ( Cl)、镁 ( Mg)、总钙 ( TCA)的测定值 ,三者间无显著性差异 ( P>0 .0 5 )。 2封闭群草原兔尾鼠与昆明小鼠相比 ,谷草转氨酶 ( AST)、谷丙转氨酶 ( AL T)、糖 ( GL U)、钾 ( K)、磷 ( P3+)存在显著性差异 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。 3封闭群草原兔尾鼠与人相比 ,谷草转氨酶 ( AST)、谷丙转氨酶 ( AL T)、碱性磷酸酶 ( AL P)、乳酸脱氢酶( L DH)、肌酐 ( CREAT)、尿酸 ( UA)、钾 ( K)存在显著性差异 ( P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。 ( 2 ) 2个年龄组各指标间以及 2个性别组各指标间均无统计学差异。 ( 3)封闭群草原兔?

草原兔尾鼠卵透明带3融合蛋白抗原的制备及免疫反应性

目的大量制备重组的草原兔尾鼠卵透明带3（Recombinant Lagurus lagurus zona pellucida 3, r-LZP3 ）融合蛋白，并检测其免疫反应性。方法经密码子优化的Lzp3基因在E.coli BL21（DE3）中以包涵体形式表达融合蛋白，表达产物经洗涤、纯化、溶解、复性后，用Western blot、ELISA和抗生育试验鉴定免疫反应性。结果得到纯度达93％的r-LZP3蛋白。Western blot显示表达产物与LZP3小鼠抗血清出现特异性反应条带。ELISA表明免疫小鼠血清中LZP3抗体滴度达1：45000以上。抗生育试验表明r-LZP3蛋白免疫小鼠的避孕率为25％，平均每胎产仔数减少4-5只。结论已获得了大量具有显著免疫活性的r-LZP3蛋白，为控制草原兔尾鼠鼠害的研究提供了重要的抗原。

草原兔尾鼠卵透明带3在Pichia pastoris酵母中的分泌表达

本研究通过酵母Pichiapastoris系统表达草原兔尾鼠卵透明带 3(lZP3)蛋白 ,获得控制害鼠生育研究的抗原物质。根据本实验室克隆获得的lZP3基因序列设计引物 ,并分别在 5’引物和 3’引物中引入了EcoRI和XbaI酶切位点。经PCR扩增 ,将lZP3克隆至穿梭质粒pSuperY上 ,获得的重组穿梭质粒pSuperY -lZP3经线性化后 ,采用电激法将重组穿梭质粒转入酵母SMD116 8菌株中 ,Zeocin+筛选阳性克隆 ,经小瓶发酵后 ,取上清作SDS -PAGE和Western -blot检测 ,结果表明lZP3在酵母中得到了成功表达 ,表达产物的分子量约为 5 5kD 。

草原兔尾鼠ZP3基因密码子优化及其在酵母中的表达

目的:提高草原兔尾鼠(L agurus lagurus)卵透明带3(LZP 3)基因在酵母细胞中表达的水平.方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP 3基因上6个稀有的密码子簇,将LZP 3基因中11个稀有的密码子更换成毕赤酵母(P ich ia Pastoris)最常用的相应密码子.将获得的LZP 3突变基因(LZP 3m)插入pGAPZαA中,构建穿梭表达载体.以重组体转化P ich ia Pastoris SM D 1168菌株进行表达.结果:LZP 3m基因的表达量比野生型LZP 3基因明显提高.结论:通过密码子优化,能显著提高LZP 3基因在酵母细胞中的表达水平.

用草原兔尾鼠复制内脏利什曼病模型初探

给草原兔尾鼠经腹腔接种婴儿利什曼原虫前鞭毛体，５个月后剖杀动物作病理组织学检查，发现动物的脾、肝、骨髓、淋巴结、肾及输尿管内均有不同数量的利什曼原虫分布，有典型的内脏利什曼病病理损害。作者认为草原兔尾鼠是一种便于复制内脏利什曼病模型的动物。