草木樨状黄芪变异系中甲硫氨酸代谢相关cDNA的分子克隆及其在大肠杆菌中的表达

利用mRNA差异显示技术 differentialdisplay 从草木樨状黄芪耐甲硫氨酸变异系中分离到一差异cDNA片段,命名为tm03 360bp .mRNA杂交结果显示,该片段只在变异苗中表达,初步确定其与甲硫氨酸代谢相关.测序后在Genebank搜寻,未发现有同源序列.进一步分析表明,该cDNA克隆可编码完整的蛋白.在该基因片段两端分别合成含Hind 和BamH 酶切位点的引物,用PCR扩增后亚克隆到pRSETA表达载体,转化宿主菌JM109 DE3 ,经IPTG诱导表达了N′端含6个组氨酸的蛋白质,分子量约为14kD,为进一步研究该蛋白的结构和生物学功能奠定基础.