草酸青霉Penicillium oxalicum菌体吸附活性染料的性能及微观过程

研究了草酸青霉(Penicillium oxalicum)在模拟染料废水中以边生长边吸附的方式对活性翠蓝KN-G,M-GB,K-GL,活性黑K-BR、活性艳蓝M-BR、活性红紫K-3R和活性深蓝K-R7种水溶性活性染料的脱色性能及吸附过程.结果显示,生长菌体对7种活性染料具有良好的脱色性能,染料初始浓度为200mg/L时,平均脱色率可达93.0%;染料初始浓度为400mg/L时,活性翠蓝KN-G和M-GB的脱色率仍达到了99.7%和99.9%.上清液的紫外光谱图及染料分子中铜离子浓度的检测结果表明,染料通过吸附方式从废水中去除.通过SEM,TEM观察发现,生长菌体在吸附过程中,菌丝发生肿胀膨大,细胞壁发生结构重组,厚度增加10～15倍.细胞壁的结构变化是生长菌体吸附染料的重要机制,为染料吸附提供位点和进入细胞内部的通道.

深海冷泉草酸青霉Penicillium oxalicum 13-37的化学成分研究

为了丰富深海冷泉天然产物结构多样性,本文对深海冷泉沉积物来源的草酸青霉Penicillium oxalicum13-37的次生代谢产物进行了研究,通过硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析、制备薄层层析、半制备高效液相色谱方法,从其发酵产物中分离得到11个单体化合物,分别为seco-blennolide B(1)、blennolide B(2)、citreorosein(3)、emodine(4)、isorhodoptilometrin(5)、aloe-emodin(6)、2-acetylemodin(7)、11-O-acetylaloeemodin(8)、phaseolorin I(9)、penitholabene(10)和paecilomycine A(11)。其中,化合物1为新化合物,化合物10和11为首次从深海冷泉草酸青霉中分离得到的萜类化合物,并首次对化合物10的单晶数据进行报道。此外,活性测试结果表明,化合物1对东海原甲藻和海洋卡盾藻、副溶血弧菌具有一定的抑制作用,对卤虫表现出微弱的毒性。

储藏小麦中草酸青霉的分离鉴定及其侵染防控

采用梯度稀释法从不同来源小麦中分离青霉菌株;采用经典形态学分类鉴定方法和ITS序列比对鉴定青霉菌株种属;采用琼脂稀释平板法测定香茅醇对青霉菌株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MFC);采用熏蒸法考察香茅醇对青霉侵染小麦的防控效果。结果发现:草酸青霉是储藏小麦中的优势青霉;香茅醇对草酸青霉菌丝生长的MIC、MFC均为0.1250μL/mL;当香茅醇含量为0.250μL/mL时,草酸青霉侵染的小麦储藏5 d均未发生霉变,表明香茅醇对青霉侵染小麦具有良好的防控效果。

草酸青霉菌Penicillium oxalicum IM-3对氯代吡啶烟碱类杀虫剂的代谢作用

从土壤中分离出1株可降解氯代吡啶烟碱类杀虫剂啶虫脒(AAP)的丝状真菌菌株IM-3,经形态观察和18S rDNA序列比对,IM-3菌株被鉴定为草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)。培养14 d,P.oxalicumIM-3在矿物盐培养基中可降解41.6%的啶虫脒、14.1%的吡虫啉(IMI),但不降解噻虫啉(THI)和烯啶虫胺(NIT)。HPLC和LC-MS/MS分析显示,啶虫脒降解途径为N-脱甲基生成IM2-1和氧化断裂氰基亚胺基生成IM1-3。

海洋来源真菌草酸青霉(Penicillium oxalicum)次级代谢产物的分离与鉴定

目的研究海洋来源真菌草酸青霉(Penicillium oxalicum)的次级代谢产物。方法采用重结晶、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、开放ODS柱色谱等方法进行分离纯化;根据理化性质及光谱数据确定化合物的结构。结果分离得到10个化合物,分别鉴定为N-acetyl-hydrazinobenzoic acid(1)、N-[2-cis-(4-hydroxyphenyl)ethenyl]formamide(2)、p-hydroxyphenylacetamide(3)、penipanoid A(4)、penipanoid C(5)、2-(4-hydroxybenzyl)quinazolin-4(3H)-one(6)、oxaline(7)、meleagrin(8)、(3R,4R)-3,4,8-trihydroxy-3,4-dihydro-1(2H)-naphthalenone(9)和(3R,4R)-3,4,6,8-tetrahydroxy-3,4-dihydro-1(2H)-naphthalenone(10)。结论化合物1为新天然产物,化合物9、10为首次从青霉属真菌中分离得到。

产三峡肽素的草酸青霉SG-4的全基因组测序

为充分解析草酸青霉SG-4的遗传信息,利用二代Illumina测序和三代PacBio测序相结合的方法对SG-4的全基因组进行测序,经过基因组组装、基因预测和功能注释后,对全基因组进行共线性分析和次级代谢产物合成基因簇预测。结果表明,草酸青霉SG-4基因组全长为31.17 Mb,GC含量为50.5%,包括线粒体基因组在内,共由9条基因支架(scaffold)组成,含有8430个蛋白质编码基因、175个tRNA和50个rRNA基因。与swiss-prot、Pfam、NR、GO和KEGG等数据库相比,COG数据库注释的基因数最多,可达7483个。共线性分析结果表明,SG-4与数据库中报道的其他草酸青霉的同源性有一定差异,且存在多处异位重排现象。通过生物信息学分析发现,SG-4基因组中有28个次级代谢产物生物合成基因簇,其中,14个基因簇的功能未见报道,将NRPS相关基因簇与转录组数据进行对应的同时,分析与三峡肽素合成趋势的相关性,得到9条基因簇,经前期实验验证其中有一条可能是负责三峡肽素合成的候选基因簇。研究丰富了草酸青霉的基因组信息,为全面了解草酸青霉的基因组信息、揭示三峡肽素的生物合成途径奠定基础。

苄星青霉素联合复方甘草酸苷片对梅毒治疗效果及不良反应分析

分析苄星青霉素结合复方甘草酸苷片治疗梅毒的效果。方法 选择2022年1月到2023年12月期间因梅毒到院内中西医结合科就诊的患者260例按治疗方法的不同分为单药(苄星青霉素)治疗的对照组、联合(苄星青霉素结合复方甘草酸苷片)治疗的实验组,对比疗效差异。结果 实验组病情缓解有效率、转阴率高于对照组,梅毒疹、扁平湿疹、玫瑰疹、硬下疳等症状缓解时间短于对照组,复发率、不良反应率低于对照组,差异显著(P<0.05)。结论 苄星青霉素结合复方甘草酸苷片治疗梅毒的效果确切。

苄星青霉素结合复方甘草酸苷片治疗梅毒的临床效果分析

研究分析梅毒采用苄星青霉素结合复方甘草酸苷片治疗的临床效果。方法 选取我院在2021年1月-2023年12月期间收治的40例梅毒患者按照随机抽签法分为观察组(n=20,采用苄星青霉素结合复方甘草酸苷片治疗)和对照组(n=20,采取苄星青霉素治疗)。结果 临床症状改善时间观察组短于对照组(P<0.05);观察组的治疗总有效率85.00%、RPR转阴率95.00%均要高于对照组55.00%、70.00%(χ2=4.286、4.329,P<0.05),观察组的不良反应总发生率5.00%低于对照组30.00%(χ2=4.329,P<0.05)。结论 在梅毒的临床治疗中,与单纯苄星青霉素作比较,结合复方甘草酸苷片的治疗优势更为明显,在增强疗效的同时,能够快速缓解临床症状,减少不良反应。

红树林真菌草酸青霉(092007)的环二肽类成分

目的研究海南文昌红树林真菌草酸青霉(Penicillium oxalicum)的代谢产物,寻找新的抗肿瘤活性化合物。方法利用硅胶、Sephadex LH-20、ODS柱色谱及制备型高效液相色谱等方法进行分离,通过化合物的理化性质及各种波谱技术鉴定它们的结构,采用MTT法评价化合物体外细胞毒活性。结果从真菌菌丝体的丙酮提取物中分离得到6个环二肽类化合物,鉴定其结构分别为:环(苯丙-异亮)二肽[cyclo-(Phe-Ile)](1)、环(苯丙-缬)二肽[cyclo-(Phe-Val)](2)、环(异亮-亮)二肽[cyclo-(Ile-Leu)](3)、环(缬-缬)二肽[cyclo-(Val-Val)](4)、环(脯-缬)二肽[cyclo-(Pro-Val)](5)、环(脯-甘)二肽[cyclo-(Pro-Gly)](6)。体外活性表明:化合物1、3和5在50μg.mL-1下对肝癌细胞HepG-Ⅱ的抑制率分别为31%、32%、17%,对前列腺癌细胞LNCaP抑制率分别为50%、43%、53%。结论这些化合物均为首次从该属真菌的代谢产物中分离得到,其中化合物2、3和5具有一定的细胞毒活性。

草酸青霉BZH-2002果胶酶系的纯化及其诱导抗病作用

采用超滤浓缩、亲和层析、阳离子交换柱层析、SephadexG-100凝胶过滤层析等步骤,由草酸青霉菌果胶酶发酵液最终分离得到3个电泳纯的内切聚半乳糖醛酸酶主要组分P-1、P-2和P-3.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得各组分的分子量(Mr)均为41×103.上述果胶酶组分稀释成不同浓度后分别喷雾处理供试黄瓜,表明3个组分均能不程度地诱导黄瓜对黑星病抗性的提高,在酶活力200UmL-1条件下,3个组分的诱导效果分别为35.18%、57.11%和38.83%,而且3个组分在试验浓度下对病菌孢子萌发和芽管生长均没有影响.

生物农药草酸青霉水剂对玉米小斑病的防治效果

通过对20％草酸青霉水剂助剂用量的影响、助剂对药效的影响、pH值对制剂贮存稳定性的影响试验，筛选出20％草酸青霉水剂的最佳配方。室内及田间药效试验表明：20％草酸青霉水剂对玉米小斑病有良好的防治效果，室内处理剂量为稀释100倍液，田间处理剂量为稀释50倍液，对玉米小斑病的防效在88％～90．6％，且对供试作物安全。

外源草酸对猕猴桃采后果实扩展青霉生长及展青霉素积累的影响

【目的】探究外源草酸对扩展青霉(Penicillium expansum)生长和展青霉素积累的效应,以及草酸处理对猕猴桃采后果实接种P.expansum后病害及展青霉素积累的影响。【方法】通过体外试验,研究不同浓度草酸对P.expansum孢子萌发、菌丝生长和展青霉素积累的调控;同时以美味猕猴桃‘布鲁诺’(Actinidia deliciosa‘Bruno’)为材料,研究采后50 mmol·L-1草酸浸泡处理对果实采后损伤接种P.expansum后病害发展及展青霉素积累的影响。【结果】当PDB或PDA培养基内含1~10 mmol·L-1草酸时,p H无论中和与否,均对扩展青霉孢子萌发、菌落扩展和展青霉素积累有显著抑制作用。同时,采后50 mmol·L-1草酸浸泡处理显著抑制了猕猴桃果实损伤接种P.expansum后病斑的扩大,而且显著降低腐烂果肉中展青霉素含量。【结论】外源草酸能有效抑制P.expansum孢子萌发和生长,采后草酸处理能抑制猕猴桃果实青霉病害的发展、降低展青霉素的累积,从而降低猕猴桃果实采后腐烂,提高果实贮藏性。

鹅源草酸青霉F67产纤维素酶培养条件的优化

为了探索鹅源草酸青霉(Penicillium oxalicum Currie&Thom)F67产纤维素酶的最佳培养基组成(碳源、氮源)及发酵条件(接种量、温度、pH和发酵时间),试验以鹅源草酸青霉为研究菌株,采用液体发酵培养法,通过对C1酶活、CX酶活、β-葡萄糖苷酶活和滤纸酶活(FPA)的测定,研究了液体发酵培养基组成及发酵条件对其产纤维素酶活力的影响,并通过L9(34)正交试验筛选出了草酸青霉液体发酵产纤维素酶不同组分的最佳发酵条件。结果表明:(1)羧甲基纤维素钠(CMC-Na)可以强烈诱导草酸青霉产纤维素酶,C1酶、CX酶、β-葡萄糖苷酶和FPA酶活分别达到507.104U·mL-1、9.353U·mL-1、642.989U·mL-1和149.576U·mL-1(p<0.01);以硝酸铵为氮源时,CX酶活力最高,比基础组提高了1.342倍(p<0.01);而以尿素为氮源时,C1酶活、β-葡聚糖苷酶活和FPA最高,分别比基础组提高了1.212,0.285和2.055倍(p<0.01)。(2)CX酶活、C1酶活和β-葡聚糖苷酶活最高时的最适接种量分别为3%、7%和7%;发酵温度分别为30℃、28℃和30℃;培养基起始pH均为5.5;发酵时间分别为96h、72h和96h。

草酸青霉果胶酶分离纯化工艺及酶学性质研究

为了探索从鹅肠道分离的草酸青霉(Penicillium oxalicum)发酵生产果胶酶分离纯化新工艺,通过硫酸铵分级盐析、Sephacryl S-200分子筛柱层析、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析技术对其发酵产物进行分离纯化,得到果胶酶的主要组分半乳糖醛酸酶(PG)和果胶酯酶(PE),并分别对PG和PE的最适作用pH值、温度以及分子质量等酶学特性进行研究。结果表明:PG和PE纯化倍数分别为32.21和23.98,均达到电泳纯,分子质量分别为61.4kD和42.2kD。PG最适作用pH值为5.0,最适反应温度为40℃,pH值稳定范围为4.0～6.0,在30、40℃随着处理时间延长酶活力保持稳定。PE最适作用pH值为6.0,最适温度为50℃,pH值稳定范围为5.0～7.0;PE在30℃时的热稳定性较好,40℃时处理60min,酶活力变化不明显。

氯氰菊酯降解菌草酸青霉SSCL-5分离鉴定及降解特性

为解决土壤中残留的菊酯类农药问题,通过富集筛选法从70余份土壤中获得一株高效分解利用菊酯类农药的微生物菌株SSCL-5,该菌株可在含1000 mg/L的氯氰菊酯无机盐培养基中正常生长。经形态学及ITS测序鉴定,确定该菌为草酸青霉(Penicillium oxalicum),对多种高浓度菊酯类农药耐受。经紫外分光光度法及HPLC验证该菌株草酸青霉SSCL-5在无机盐培养基、28℃、180 r/min摇瓶培养24 h的条件下,对400 mg/L氯氰菊酯的降解率为97%。土壤室内试验证明该菌在土壤中,温度20-34℃、水分含量保藏40%-60%条件下,30 d可将土壤中400 mg/L的氯氰菊酯降解67.6%。

日粮添加鹅源草酸青霉产果胶酶对改善肉鸡生产性能的消化生理与免疫学机制的研究

【目的】探索鹅源草酸青霉产果胶酶的作用机理,确定其添加效果与使用方法;同时,为果胶酶的推广应用提供理论依据和技术支撑。【方法】选用1日龄同批孵化、健康肉鸡240只,随机分成4个处理组。1组为对照组,饲喂正常水平的基础日粮;2组在基础日粮的基础上添加0.249%的果胶酶;3组添加0.168%纤维素酶;4组添加0.15%由果胶酶和纤维素酶按1﹕1配合而成的复合酶。【结果】果胶酶组肉鸡。显著提高对磷(P)、粗纤维(CF)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、蛋氨酸(Met)、赖氨酸(Lys)、胱氨酸(Cys)、苏氨酸(Thr)和异亮氨酸(Ile)的利用率(P<0.05),极显著提高粗蛋白(CP)的利用率(P<0.01);显著提高果胶酶组28日龄时十二指肠、胰腺的淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶活性以及空肠的脂肪酶活性(P<0.05),极显著提高胃蛋白酶活性(P<0.01),显著提高49日龄时胰腺的淀粉酶及脂肪酶和胰蛋白酶活性、十二指肠的淀粉酶和胰蛋白酶活性和空肠的脂肪酶和胃蛋白酶活性(P<0.05);显著提高空肠的绒毛高度、降低肠壁厚度(P<0.05);果胶酶组显著降低49日龄的尿酸、尿素氮水平(P<0.05);显著提高的血糖水平(P<0.05);显著降低盲肠大肠杆菌、沙门氏菌数量(P<0.05);显著提高乳酸杆菌和双歧杆菌数量(P<0.05);显著提高49日龄时的新城疫抗体效价(P<0.05)。【结论】日粮中添加鹅源草酸青霉产果胶酶能提高肉鸡的生产性能和养分利用率,改善肠道形态结构、消化酶活性和微生态环境。

鹅源草酸青霉CBHⅠ基因克隆及真核表达载体构建

【目的】鹅源草酸青霉F67(Penicillium oxalicum Currie & Thom)纤维素酶二糖水解酶(cellobiohydrolase,CBHⅠ)基因克隆并构建真核表达载体,为该菌株分子特性的进一步研究及构建高效纤维素分解菌奠定基础。【方法】首先通过兼并PCR法扩增CBHⅠ基因片段,然后利用改良热不对称交错PCR(TAIL-PCR)技术克隆CBHⅠ基因5′端和3′端侧翼序列,最后采用RT-PCR法扩增鹅源草酸青霉F67CBHⅠ基因序列全长,并对该基因进行生物信息学分析,构建pPIC9K真核表达载体。【结果】分别扩增到鹅源草酸青霉F67纤维素酶CBHⅠ基因片段A(EU574736)、5′端序列B1(EU603295)、3′端序列B2(EU652768)及全长基因C(EU727171),并成功构建真核表达载体pPIC9K-CBHⅠ;生物信息学分析表明,该基因蛋白序列与微紫青霉氨基酸序列同源性最高,达76%,前26个氨基酸为信号肽序列,疏水性可达2.63,由催化功能域、衔接区和真菌性纤维素结合域构成,其三级结构主要为β-sheet。【结论】鹅源草酸青霉纤维素酶CBHⅠ基因全长序列的克隆进一步丰富了丝状真菌的生物信息学资源;其真核表达载体的构建为将该菌株进一步在真核宿主中表达,从而获得高效工程菌株奠定了基础。

鹅源草酸青霉产果胶酶的发酵条件研究

为了确定鹅源草酸青霉产果胶酶发酵的最佳培养基组成及发酵条件,以鹅源草酸青霉为研究菌株,通过聚半乳糖醛酸酶(PG)、果胶裂解酶(PL)、果胶酯酶(PE)的测定,研究了培养基组成(碳源、氮源、无机盐)及不同发酵条件(接种量、温度、pH和发酵时间)对草酸青霉产果胶酶活力的影响,并通过L9(34)正交试验确定草酸青霉发酵生产果胶酶不同组分的最佳培养基组成。结果表明:(1)以葡萄糖为碳源可以诱导PG、PL、PE产生(p<0.001),每15g基础培养基中葡萄糖的最适添加量分别为:1.2g,1.5g,1.5g;(NH4)2SO4对PG、PE、PL产生有明显刺激作用(p<0.001),每15g基础培养基适宜添加量分别为:0.6g,1.5g,0.3g;磷酸二氢钾(KH2PO4)对PG活力有明显的提高作用(p<0.001),MgSO4和KH2PO3对PL有极显著影响(p<0.001)。(2)PG、PL、PE最佳接种量每15g分别1.5mL、2mL和1.5mL培养基装量,最佳培养温度分别为32,30,32℃,培养基最佳初始pH值分别为5.0,4.0,4.5;最佳发酵时间分别为60h,72h和84h。

绿色木霉和草酸青霉对Hg^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)和Pb^(2+)的耐性和吸附特征

【目的】通过对已筛选出的耐较高浓度重金属的绿色木霉和草酸青霉菌株进行Hg^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)和Pb^(2+)耐受性和吸附性试验,为其应用于土壤修复提供科学参考。【方法】通过测定重金属离子对菌株的生长抑制率和半致死浓度(EC_(50))评价真菌重金属耐性;将一定质量的菌丝球添加到已知浓度的重金属离子溶液中,测试菌株对重金属的吸附速率和吸附量,并对吸附过程进行函数拟合,分析其重金属吸附特征。【结果】2株菌株生物量随重金属浓度增加而降低,其过程分2个阶段,在金属离子浓度较低(0~200 mg·L^(-1))时,生物量下降不明显或略有上升,当重金属离子浓度大于某个临界值(400 mg·L^(-1)左右)时,生物量下降迅速;Hg^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)和Pb^(2+)对菌株lys2015f1的EC_(50)值分别是158.07、464.02、229.33和209.59 mg·L^(-1),对菌株lys2015f5的EC_(50)值分别是580.47、572.88、231.85、2 284.01 mg·L^(-1),因此,菌株lys2015f1对重金属耐受程度为Zn^(2+)>Cu^(2+)>Pb^(2+)>Hg^(2+),菌株lys2015f5对重金属耐受程度为Pb^(2+)>Hg^(2+)>Zn^(2+)>Cu^(2+)。菌株的吸附过程更加拟合准二级吸附动力学模型,由模型速率常数k_2可知,2株菌株吸附重金属速率排序变化一致,均为Pb^(2+)>Hg^(2+)>Cu^(2+)>Zn^(2+),菌株lys2015f1通过模型得到的理论Hg^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)和Pb^(2+)最大吸附量分别是37.12、14.63、16.62和107.31 mg·g^(-1),菌株lys2015f5理论最大吸附量47.12、16.50、25.78和201.22 mg·g^(-1);吸附的限速步骤是由化学反应控制的,在同等条件下,2株菌株对4种重金属吸附速率排序均为Hg^(2+)>Cu^(2+)>Zn^(2+)>Pb^(2+)。【结论】绿色木霉和草酸青霉菌株具有较高的重金属耐性和较好的吸附性,现有研究也表明其在生物防治、植物促生、土壤有机物降解等方面具有较好效果,因此2株菌株具有较好的重金属修复应用潜力。

提高展青霉(Penicillium patulum)产灰黄霉素效价的诱变育种研究

为进一步筛选高产灰黄霉素的工业生产菌株,分别对前期采用紫外线-氯化锂(UV-LiCl)、半导体激光(LD laser)及CO2激光(CO2laser)对展青霉FS80-1复合诱变获得三株高产菌株进行液体发酵和固体培养比较。结果表明,通过UV-LiCl复合诱变获得突变菌株GM120-43的液体发酵产灰黄霉素效价11 982μg/mL,比出发菌株提高37.52%,固体培养效价为89 496μg/g(干重),比出发菌株提高80.04%。;半导体激光诱变获得突变株LD100-1的液体发酵效价9 440μg/mL,固体培养效价119 766μg/g干重,比出发菌株FS80-1提高了140%;两个突变株的生物学特性均发生不同程度的变化,突菌株GM120-43适合于液体发酵生产,突变株LD100-1适合于固体发酵培养。