荔枝核提取物干预非酒精性脂肪肝病的网络药理学分析及验证

目的:运用网络药理学的方法,研究荔枝核提取物(Lychee kernel extract,LKE)干预非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用及分析潜在机制。方法:通过中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)获取荔枝核的成分和作用靶点,通过疾病靶点数据Genecard获取NAFLD的疾病靶点,然后取交集,通过Cytoscape获取通路-靶点互作网络图,利用微生信网站进行GO生物过程分析和KEGG通路富集分析。建立饮食诱导的肥胖(diet-induced obsisity,DIO)小鼠NAFLD动物模型并用LKE灌胃给药。HE染色观察肝脏脂质变化;试剂盒检测TG、TC、ALT、AST含量。结果:获得荔枝核潜在活性成分18个,与NAFLD疾病交集靶点52个,关键靶点为INS、TNF、HSP90AA1,通过KEGG通路富集筛选得到信号通路20条,主要为癌症通路(pathways in cancer)、动脉粥样硬化通路(Fluid shear stress and atherosclerosis)、糖尿病并发症的信号通路(AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications);模型组小鼠肝脏病变严重,给药组小鼠肝脏病变相对于模型组明显减轻,给药组小鼠血清转氨酶也明显降低,接近正常组,给药组血脂代谢也趋于正常组,且差异均具有显著性(P<0.05)。结论:荔枝核可能通过作用于INS、TNF、HSP90AA1等靶点,调节脂质和动脉粥样硬化通路等起到治疗NAFLD的作用。

荔枝核提取物体外抗病毒活性及其机制研究

目的:研究荔枝核提取物(LSE)的体外抗病毒活性,并初步研究其抗病毒的作用机制。方法:采用细胞病变效应(CPE)减少法和MTT法检测LSE对柯萨奇B3病毒(CoxB3)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1和HSV-2)的体外抗病毒活性,并通过观察直接杀病毒作用、对宿主细胞的保护作用、抑制病毒吸附作用以及在病毒感染后不同时间加入实验,对LSE抑制HSV-1的作用机制进行探讨。结果:LSE有一定的细胞毒性,它不能抑制CoxB3在宿主细胞内的增殖,但对RSV、HSV-1和HSV-2表现出明显的浓度依赖性抗病毒活性,其IC50值分别为32.3,27.9和20.4μg/mL。该提取物预培养Vero细胞后不能保护细胞免受HSV-1感染,但它对HSV-1有直接的灭活作用。LSE可影响HSV-1对Vero细胞的吸附,当浓度为31.3μg/mL时对病毒吸附的抑制率为51。LSE对HSV-1在细胞内的增殖表现出很强的抑制活性。结论:LSE具有较强的体外抗RSV和HSV活性,它对HSV的抑制作用可能通过多种方式和途径实现。

荔枝核活性成分分析及其提取物抗氧化性能研究

对不同荔枝核样品采用香草醛-高氯酸比色法测定荔枝核总皂甙含量,用硝酸铝-亚硝酸钠比色法测定总黄酮含量,用蒽酮-硫酸法测定多糖成分的含量;结果表明:不同荔枝核样品中总皂甙含量在1.30%～1.40%之间,总黄酮含量在5.78%～6.80%之间;多糖2.85%～3.34%之间。以芦丁为对照,从对不同体系产生的超氧阴离子自由基、羟自由基和DPPH自由基的清除能力及脂质过氧化的抑制活性等方面研究荔枝核提取物的抗氧化活性。结果显示:荔枝核提取物质量浓度为0.8mg/ml时,对超氧阴离子自由基的清除率达92.96%,超过同质量浓度的芦丁;质量浓度为0.5mg/ml时,对羟自由基的清除率达85.56%,略低于相应对照。荔枝核提取物对脂质过氧化的抑制率随浓度的增加而增大,质量浓度为0.5mg/ml时,抑制率达52.56%,稍低于相应对照。妃子笑荔枝核提取物质量浓度为1mg/ml时,其清除DPPH自由基的能力超过同质量浓度的芦丁。

荔枝核提取物对HepG-2细胞生长抑制及凋亡诱导机制的探讨

目的:探讨荔枝核提取物成分L2.3对人肝癌细胞HepG-2的生长抑制作用及其分子机制。方法:MTT法测定样品对HepG-2细胞的增殖抑制,荧光染色观察细胞凋亡;比色法检测样品对HepG-2中caspase-3、caspase-8和caspase-9活性的影响,流式细胞仪检测并分析Fas蛋白表达的变化。结果:L2.3对HepG-2细胞表现出时间及剂量依赖性增殖抑制活性(P<0.05),其半数抑制质量浓度为43.0μg/mL;处理组细胞中出现致密浓染亮蓝色凋亡小体。较高质量浓度的L2.3处理细胞后,caspase-3、8、9的活性均呈时间依赖性增高(P<0.01),且Fas蛋白的表达也明显上调(P<0.05)。结论:荔枝核提取物L2.3对HepG-2细胞有体外增殖抑制活性,并介导caspase-3、caspase-8、caspase-9活性改变及Fas蛋白表达的上调,以此诱导细胞凋亡的发生。

荔枝核提取物对D-半乳糖诱致小鼠学习记忆障碍的影响及其机制

目的:探讨荔枝核提取物对学习记忆障碍的影响及其机制。方法:50只昆明种小鼠随机分为空白对照组、模型组、石杉碱甲组(0.4 mg/kg)及荔枝核提取物低(15 g/kg)、高(60 g/kg)剂量组。上述动物除空白对照组外,均皮下(sc)注射D-半乳糖(500 mg/kg)8 w,并于第5周起分别灌胃相应药物。采用水迷宫和自主活动仪测试小鼠学习和记忆能力,并测定血清糖基化终末产物(AGEs)及脑组织一氧化氮(NO)、乙酰胆碱(Ach)的含量和一氧化氮合酶(NOS)、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性。结果:荔枝核提取物能显著改善模型小鼠学习和记忆能力,减少血清糖基化产物(AGEs)含量,同时降低脑组织NO含量和NOS活性,对脑组织Ach含量、AchE的活性无明显影响。结论:荔枝核提取物具有改善D-半乳糖诱致小鼠学习记忆障碍的作用,其机制可能与抑制过多的AGEs和NO等对脑细胞损伤作用有关。

荔枝核提取物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝组织巨噬细胞移动抑制因子表达的影响

目的:观察荔枝核提取物对实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠的防护作用,以及对肝组织巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的影响。方法:35只Wistar大鼠随机分为对照组(5只)、模型组(10只)、低剂量(10只)和高剂量荔枝核提取物组(10只)。除对照组外,其余各组均以脂肪乳剂(添加脂肪肝诱导药物丙基硫氧嘧啶)灌胃,另外低、高剂量荔枝核提取物组大鼠以荔枝核提取物溶液(250mg/kg、500mg/kg)灌胃。第6周末处死全部大鼠,进行肝脏组织学和免疫组化检测,对MIF的表达进行评分,并测定血清Glucose、ALT、AST、TG、TC、HDL和LDL水平。结果:与模型组大鼠相比,荔枝核提取物组大鼠可见肝脏脂肪变性、炎症和坏死改善,肝组织MIF表达及血清Glucose、ALT、TG和LDL水平显著降低(P<0.01、P<0.05),血清HDL水平增高(P<0.05),且高剂量组Glucose、ALT、TG和LDL的降低显著优于低剂量组(P<0.05)。结论:荔枝核提取物可改善NASH大鼠肝脏脂肪变性、炎症、坏死和血糖、血脂代谢以及肝功能损害,并能降低肝脏MIF的表达。

荔枝核总皂甙提取物对糖尿病小鼠的降糖疗效观察

目的观察荔枝核总皂甙提取物对糖尿病小鼠降血糖作用。方法采用四氧嘧啶建立糖尿病小鼠模型。从荔枝核中提取总皂甙混合物。以荔枝核总皂甙提取物为试验药、优降糖和黄连素为对照药,糖尿病小鼠经灌胃连续给药3周后测定小鼠空腹血糖值,比较不同药物降血糖效果。结果荔枝核总皂甙提取物、优降糖和黄连素均能有效地降低糖尿病小鼠的血糖浓度(均P<0.05),其降糖率分别为59.57%、43.64%和43.93%。荔枝核总皂甙提取物用药组糖尿病小鼠的血糖浓度明显低于糖尿病对照小鼠(P<0.01)。荔枝核总皂甙提取物降血糖效果明显优于优降糖和黄连素(P<0.01)。结论荔枝核总皂甙提取物具有较强的降低糖尿病小鼠血糖功能,且其降血糖效果优于优降糖与黄连素。

荔枝核提取物清除亚硝酸盐的研究

采用对氨基苯磺酸-盐酸萘乙二胺分光光度法测定了荔枝核提取物对亚硝酸盐的清除作用,研究了影响荔枝核提取物清除亚硝酸盐的因素。结果表明:最佳清除条件为提取物浓度8%,反应时间10m in,反应温度80℃,pH=2。此条件下,荔枝核提取物对亚硝酸盐清除率为99.07%。

荔枝核提取物对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝功能的保护作用

目的观察荔枝核提取物对实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝功能的保护作用。方法 35只Wistar大鼠被随机分为对照组(5只)、模型组(10只)、小剂量(10只)和大剂量荔枝核提取物干预组(10只)。分别以250mg.kg-1和500mg.kg-1荔枝核提取物干预NASH大鼠6周。结果与对照组比,模型组大鼠血清GLU、ALT、AST、TG、TC和LDL水平均显著升高(P<0.05);与模型组比,小剂量荔枝核提取物干预组大鼠血清GLU、ALT、TG和LDL显著降低(P<0.05),而大剂量干预组动物效果更为明显。结论荔枝核提取物能改善NASH大鼠葡萄糖、脂质代谢和肝功能,具有较好的疗效。

荔枝核提取物对学习记忆障碍小鼠海马AGEs阳性细胞和Aβ阳性细胞表达的影响

目的:探讨荔枝核提取物对D-半乳糖诱致学习记忆障碍小鼠海马AGEs阳性细胞和Aβ阳性细胞表达的影响,并观测线粒体结构的变化。方法:50只昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型组、石杉碱甲组(0.4 mg/kg)及荔枝核提取物高、低(60、15 g/kg)剂量组,除正常对照组外,全部动物连续皮下注射D-半乳糖(500 mg/kg)8 w,第5周起灌胃相应药物。第8周末测血清糖基化终末产物(AGEs)含量,免疫组化测海马AGEs细胞和β-淀粉样蛋白(Aβ)细胞的表达,透射电镜检查海马细胞线粒体结构。结果:荔枝核提取物能降低模型动物血清AGEs水平,减少海马AGEs阳性细胞和Aβ阳性细胞的表达,并能抑制海马细胞线粒体的肿胀、空泡以及丢失。结论:荔枝核提取物可抑制D-半乳糖诱致小鼠海马组织AGEs阳性细胞和Aβ阳性细胞的表达,并对线粒体具有保护作用,可能与抑制糖基化和氧化应激反应有关。

不同工艺的荔枝核提取物抗氧化活性的比较

分别采用回流提取、热浸提取、微波辅助提取法分离荔枝核活性成分,测定了不同工艺制备的荔枝核提取物抑制油脂氧化以及清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的抗氧化活性.结果表明,荔枝核提取物具有较强的抗氧化活性,能够有效地抑制油脂氧化;不同工艺的提取物对油脂抗氧化作用的排序为微波提取物>热浸提取物>回流提取物.与此同时,荔枝核提取物能够有效地清除羟基自由基,其中微波提取物的半清除率质量浓度(EC50)约为0.76 g/L,热浸提取物的EC50约为0.94 g/L,回流提取物的EC50约为2.0 g/L.此外,荔枝核提取物对超氧阴离子自由基也有一定的清除效果.

荔枝核活性成分及其提取物抑菌活性分析

为给荔枝副产品的增值利用提供理论依据,对不同荔枝核样品采用香草醛-高氯酸比色法测定了荔枝核总皂苷含量,用硝酸铝-亚硝酸钠比色法测定了总黄酮含量,用蒽酮-硫酸法测定了多糖的含量,分别采用纸碟法和菌丝生长速率法测定了荔枝核提取物对细菌和真菌抑菌圈的大小,并采用混平板稀释法测定了其最小抑菌浓度。结果表明:不同荔枝核样品中总皂苷含量在1.30%～1.40%之间,总黄酮含量在5.78%～6.80%之间,多糖含量在2.85%～3.34%之间。不同品种荔枝核提取物具有不同抑菌活性。妃子笑荔枝核的抑菌活性强于其它品种,其甲醇提取物对细菌的最小抑菌浓度在1～2mg/mL之间。

荔枝核提取物改善D-半乳糖诱致小鼠学习记忆障碍与体内抗氧化作用的关系

目的观察荔枝核提取物对D-半乳糖诱致小鼠学习记忆障碍的改善作用,并探讨其改善作用与脑内抗氧化作用的关系。方法 50只昆明种小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、石杉碱甲组(0.4mg/(kg.d))、荔枝核提取物低(15g/(kg.d))和高(60g/(kg.d))剂量组。上述动物除空白对照组外,皮下(sc)注射D-半乳糖(500mg/(kg.d))8周,并于第5周起分别灌胃相应药物。采用水迷宫和自主活动仪测试小鼠学习和记忆能力及自主活动情况,并取血测定MDA含量和SOD及GSH-Px的活力。结果荔枝核提取物可明显改善模型小鼠的学习和记忆能力,并提高血清GSH-PX和SOD的活力。结论荔枝核提取物具有改善D-半乳糖诱致小鼠学习记忆障碍的作用,其作用可能与其提高机体抗氧化能力有关。

荔枝核提取物对D-半乳糖诱发小鼠学习记忆损伤的保护机制

目的探讨荔枝核提取物（Litchi Seed Aqueous Extracts，LSAE）对D-半乳糖诱发小鼠学习记忆障碍的改善作用及其机制。方法50只KM小鼠随机分为空白组、模型组、石杉碱甲组（HU，0．4mg·kg^-1·d^-1）、LSAE低剂量（15g·kg^-1·d^-1）和高剂量（60g·kg^-1·d^-1）剂量组。上述动物除空白组外，均连续8周皮下（sc）注射D．半乳糖（500mg·kg^-1·d^-1），并于第5周起分别灌胃相应药物。采用Morris水迷宫测试小鼠学习和记忆能力，用流式细胞仪测小鼠脑组织线粒体膜电位，采用RT—PCR方法测凋亡基因bcl-2mRNA、baxmRNA及B淀粉样前体蛋白（β-APP）mRNA的表达。结果LSAE可明显改善模型小鼠的学习和记忆能力，提高脑细胞线粒体膜电位，增强抗凋亡基因bcl-2mRNA表达，降低促凋亡基因baxmRNA含量，同时下调脑组织B-APPmRNA的表达。结论LSAE具有改善D-半乳糖诱发小鼠学习记忆障碍的作用，其作用机制可能与其提高脑细胞内线粒体膜电位，抑制细胞凋亡和下调淀粉样前体蛋白D—APP的表达有关。

利用血清miRNAs表达谱分析荔枝核提取物降低db/db小鼠血糖的可能机制

目的:利用血清miRNAs表达谱初步分析荔枝核提取物降低db/db小鼠血糖的可能机制。方法:荔枝核提取物连续灌胃治疗12周,追踪观察其对db/db小鼠体质量、空腹血糖、糖耐量和胰岛素耐量等的影响,并利用血清miRNAs芯片初步分析血清中miRNAs的改变,然后通过Real-time PCR确定组织中相关基因的表达改变。结果:db/db小鼠荔枝核处理组与未处理组相比,体质量、摄食量均无明显改变(P>0.05);但饮水量在灌胃6周时明显减少(P<0.05);空腹血糖值明显下降(P<0.05)。血清miRNAs芯片结果显示db/db小鼠荔枝核处理组miRNAs表达谱出现明显改变,其中均来自于Sfmbt2第10内含子的mmu-miR-297a-3p、mmu-miR-669f-5p、mmu-miR-467d-3p、mmu-miR-466c-5p表达一致性下降;并且Sfmbt2在肝脏组织中表达出现明显下降,为未处理组的64.4%,Sfmbt2在肌肉组织中表达无明显改变。结论:荔枝核灌胃治疗可明显降低db/db小鼠的空腹血糖水平;可改变血清中miRNAs的表达量及肝脏中Sfmbt2的表达量;考虑荔枝核提取物对db/db小鼠的降糖作用可能与miRNAs及Sfmbt2参与的机制有关。

荔枝核提取物对2型糖尿病大鼠认知障碍的改善

目的研究荔枝核提取物对2型糖尿病(T2DM)大鼠认知障碍的改善,并初步探讨其机制。方法高脂高糖高蛋白饲养大鼠8周后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ,27 mg/kg)制备2型糖尿病大鼠模型;Morris水迷宫测大鼠的学习和记忆能力;血糖仪测血糖;ELISA检测试剂盒测定造模T2DM大鼠血清胰岛素含有量。放射免疫法测大鼠海马组织和血清中β-淀粉样蛋白(Aβ)含有量;HE及免疫组化染色(SABC法),光镜观察大鼠海马神经元损伤及Tau蛋白的表达情况,软件计算Tau表达的积分光密度值(IOD)。结果成功制备T2DM大鼠模型。0.69、1.39和2.78 g/kg荔枝核提取物(低、中、高剂量)组与模型组相比,其大鼠的逃避潜伏期时间均减少(P<0.05,P<0.01),大鼠在平台象限所停留的时间均延长(P<0.05),高剂量组大鼠跨越平台的次数增多,在平台象限游程百分比增加(P<0.05);与模型组相比,各剂量组均可降低海马Aβ含有量以及血清Aβ和胰岛素含有量(P<0.01)。光镜下,模型组大鼠海马神经元排列疏松且不规则,胞浆核固缩;各剂量组可不同程度改善神经元的受损情况。T2DM认知障碍大鼠海马神经元胞浆出现大量的棕黄色沉积颗粒,高、中剂量组可减少胞浆棕褐色颗粒沉积。结论荔枝核提取物可明显改善T2DM大鼠认知障碍。其机制可能与其改善胰岛素抵抗,减轻高胰岛素血症所致的海马神经元损伤、Aβ沉积及Tau蛋白异常磷酸化有关。

荔枝核皂甙提取物对小鼠糖异生作用和血脂代谢的影响

目的研究荔枝核皂甙提取物对小鼠糖异生作用和血脂代谢的影响。方法取雄性昆明种小鼠20只,随机分为对照组和实验组,实验组每天以荔枝核皂甙提取物灌胃,对照组每天以生理盐水灌胃,连续灌胃3 w后,测定小鼠血糖、甘油三脂、胆固醇、肝糖元等生化指标。结果实验组糖异生具有明显的抑制作用,抑制率为13.19%;肝糖元含量明显升高,血清甘油三脂、胆固醇的水平明显降低(P<0.05)。结论荔枝核皂甙提取物对正常小鼠有调节血糖和血脂的作用。

荔枝核提取物的制备及急性毒性实验

目的:制备荔枝核提取物,观察其急性毒性,为临床安全用药提供依据。方法:分别采用醇提法和水提法制备荔枝核提取物;采用最大灌胃给药量法,分别观察荔枝核醇提取物和水提取物的急性毒性。结果:醇提法荔枝核提取物收得率是17.3%,水提法荔枝核提取物收得率是20.6%;荔枝核醇提物经口给药的最大给药量是182g/kg(原生药),水提物经口给药的最大给药量是87g/kg(原生药)。结论:醇提法和水提法荔枝核提取物收得率均较好;根据中药急性毒性分级标准,在本实验条件下,荔枝核醇和水提取物属无毒性提取物。

荔枝核提取液对糖尿病小鼠模型血糖、血脂等相关指标的干预效应

目的:观察荔枝核提取液对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖、血脂、脑蛋白、脑匀浆谷胱甘肽过氧化物酶、氧自由基含量的影响。方法:实验于2005-04/05在广西右江民族医学院生化教研室实验室完成,本实验室为广西高校重点实验室。①选用健康小白鼠40只,选用10只为正常对照组。对其余30只小鼠进行造模:用四氧嘧啶按200mg/kg剂量用蒸馏水溶解后作一次性腹腔注射,注射后第3天空腹血糖升高稳定后并达8.10mmol/L以上为造模成功,随机将造模成功的小鼠24只分为3个组:荔枝核提取液高、低剂量治疗组,模型组,每组8只。高剂量荔枝核提取液治疗组:每只荔枝核提取液0.3mL灌胃;低剂量荔枝核提取液治疗组用荔枝核提取液0.1mL荔枝核提取液加0.2mL蒸馏水灌胃;1次/d,连续4d。模型组和正常对照组用0.3mL蒸馏水灌胃,1次/d,连续4d。②在造模前、造模后3d,治疗后2,4d各用邻甲苯胺微量法测定空腹血糖。治疗4d后采用GPO-POD酶法测定三酰甘油,采用COD-CE-PAP酶法测定总胆固醇,采用沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇,采用双缩脲法测定脑蛋白,用酶促反应的速度表示脑匀浆谷胱甘肽过氧化物酶的活力,采用α-萘胺法测定脑匀浆氧自由基含量。③计量资料差异比较采用方差分析。结果:四氧嘧啶腹腔注射后有2只小鼠死亡,造模失败4只,最终34只进入结果分析。①空腹血糖:造模前各组小鼠无明显差异(P>0.05);治疗4d后,荔枝核提取液低剂量治疗组和荔枝核提取液高剂量治疗组明显低于模型组(P<0.05),与正常对照组相近(P>0.05)。②治疗4d后血脂:各组三酰甘油差异不明显(P>0.05),荔枝核提取液高剂量治疗组血清高密度脂蛋白胆固醇水平明显高于模型组和荔枝核提取液低剂量治疗组(P<0.05,0.01)。③治疗4d后脑匀浆生化指标:正常对照组、荔枝核提取液高、低剂量治疗组脑谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于模型组(P<0.05),脑氧自由基含量低于模型组(P<0.05)。结论:①荔枝核提取液具有降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖水平,调节血脂紊乱状况功能。②荔枝核提取液具有促进氧自由基的清除,增加机体抗氧化能力的作用。