荔枝蒂蛀虫海藻糖酶基因克隆及生物信息学分析

【目的】海藻糖酶(Trehalase,Tre)是昆虫体内海藻糖代谢的关键酶,通过专一性地将海藻糖分解为葡萄糖,在昆虫能量代谢和生长发育中发挥着重要的作用。旨在克隆荔枝蒂蛀虫(Conopomorpha sinensis Bradley)可溶型海藻糖酶基因(CsTre1)和膜结合型海藻糖酶基因(CsTre2),探讨其在荔枝蒂蛀虫不同发育阶段和不同组织中的表达模式,解析这2个基因及其酶蛋白的分子特征。【方法】利用荔枝蒂蛀虫转录组数据和RACE技术,克隆CsTre1和CsTre2的全长cDNA序列,并应用ORF Finder、ProtParam、SignalP 4.1、ProtScale、NetPhos2.0 Server和IQ-TREE等软件对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析CsTre1和CsTre2在荔枝蒂蛀虫不同发育阶段及成虫不同组织的mRNA表达模式。【结果】CsTre1的开放阅读框(ORF)长1701 bp,编码566个氨基酸,蛋白分子量为64.53 kD。CsTre2的ORF长1821 bp,编码606个氨基酸,蛋白分子量为69.08 kD。信号肽预测分析表明,CsTre1和CsTre2前端均有1个信号肽,其位置分别为1-16和1-17。蛋白二级结构分析结果显示,二者均主要由α-螺旋和无规则卷曲组成,CsTre1有24个Ser、15个Tyr、10个Thr可能成为蛋白激酶的结合位点,而CsTre2有27个Ser、10个Tyr、13个Thr可能成为蛋白激酶的结合位点。RT-qPCR结果显示,CsTre在荔枝蒂蛀虫的蛹和成虫期均有表达。在成虫期中,CsTre1的表达水平远高于CsTre2,且CsTre1在雄成虫第2 d和第5 d的表达水平陡然下降,在雌成虫中则保持稳定高表达。【结论】该研究成功克隆了荔枝蒂蛀虫的2个海藻糖酶基因,其分子特征及表达模式结果表明,CsTre1可能是荔枝蒂蛀虫主要调控海藻糖代谢的基因。研究结果可为阐明海藻糖酶基因的功能提供重要线索,为开展害虫防治策略的研究奠定基础。

氯虫苯甲酰胺防治荔枝蒂蛀虫应用潜力分析

为系统评价氯虫苯甲酰胺防治荔枝蒂蛀虫的应用潜力,采用浸卵法和药膜法测定氯虫苯甲酰胺对蒂蛀虫卵和成虫的生物活性,研究其对蒂蛀虫成虫寿命和繁殖力的影响,并开展田间防效试验。室内结果表明,氯虫苯甲酰胺对蒂蛀虫2日龄卵的LC_(50)为10.650 mg/L,杀卵活性显著高于高效氯氟氰菊酯,但低于除虫脲;对成虫24 h的LC_(50)为145.856 mg/L,与高效氯氟氰菊酯相当。氯虫苯甲酰胺LC_(10)和LC_(30)剂量对荔枝蒂蛀虫雄蛾寿命和子一代卵孵化率影响较小,但可有效降低雌蛾寿命和产卵量。在蒂蛀虫处于成虫产卵盛期至卵孵化期时施药1次,药后14 d调查发现,200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂1500、3000倍液处理区防效达95.29%,4500倍液处理区的防效为84.71%,这3个处理区的防效均显著高于200 g/L除虫脲悬浮剂1000倍液和25 g/L高效氯氟氰菊酯乳油500倍液的防效。氯虫苯甲酰胺是一种对防治荔枝蒂蛀虫有较大应用价值的药剂。

荔枝蒂蛀虫不同地理种群遗传多样性初步研究

【目的】明确荔枝蒂蛀虫(Conopomorpha sinensis Bradley)不同地理种群的遗传结构特征、遗传多样性水平及分子变异情况,为其起源和演化研究提供科学证据,为不同区域的荔枝蒂蛀虫防治提供参考信息。【方法】选用我国南方5个产区的荔枝蒂蛀虫为材料,利用GBS(Genotyping-by-sequencing)技术对样本进行基因分型,再利用SAMTOOLS软件鉴定单核苷酸多态性(SNP)位点,根据SNP基因分型结果构建系统进化树,并进行主成分分析。【结果】利用GBS技术对5个地区荔枝蒂蛀虫进行测序,共获得高质量有效数据27.39 Gb(平均每个样本5.48 Gb)、高质量SNP位点11767个。系统进化树分析表明,四川泸州种群单独聚为一支,与其他4个种群亲缘关系较远。主成分分析结果显示,5个地区荔枝蒂蛀虫可划分为2个类群,四川泸州种群单独为一簇,明显区分于其他4个种群。主成分分析和系统进化树分析均表明不同地理来源的荔枝蒂蛀虫在遗传水平上存在明显差异。种群遗传多样性分析结果表明,5个种群观测杂合度(Ho)为0.2099~0.2531、期望杂合度(He)为0.1937~0.2203、核苷酸多样性(π)为0.2495~0.2748,表明5个荔枝蒂蛀虫种群的遗传多样性水平较低。AMOVA分析结果表明,荔枝蒂蛀虫种群间的遗传变异(0.87%)小于种群内(99.13%),表明变异主要来源于种群内而不是种群间。【结论】不同地区的荔枝蒂蛀虫种群遗传多样性水平较低,其中,四川泸州种群遗传分化程度较高,与其他4个种群亲缘关系较远。

植物源甘油酯对荔枝蒂蛀虫的防控效果评价

荔枝蒂蛀虫(Conopomorphasinensis)是危害荔枝和龙眼的重要害虫之一。目前,主要通过使用化学农药来防治荔枝蒂蛀虫,这种防治方法存在环境污染、增加害虫的抗药性等问题。因此,寻找新型防控措施防治荔枝蒂蛀虫,是近年来的研究热点之一。植物源甘油酯是一种新开发的农用喷洒油,其杀虫效果与矿物油乳剂相当,且害虫不易产生抗药性。本研究采用喷雾法测定植物源甘油酯对荔枝蒂蛀虫卵、蛹及成虫的触杀及产卵拒避作用,并对其田间防控效果进行评价。结果表明:植物源甘油酯对蒂蛀虫的卵、蛹和成虫均有一定的触杀作用,在植物源甘油酯浓度为4.55 g/L时,对1日龄卵的孵化抑制率达40%以上,蛹羽化率在20%以下,成虫死亡率可达100%,且对雌虫产卵具有一定的拒避作用。此外,田间试验结果表明,使用浓度为4.55 g/L植物源甘油酯后果园内荔枝蛀果率显著降低,与农药混配可使农药使用量减半,且蛀果率降至1%。以上结果表明,植物源甘油酯可用于果园荔枝蒂蛀虫的防控,同时能够降低果园化学农药的使用,显著提高荔枝蒂蛀虫的防治效果,为荔枝产业的健康可持续发展提供研究基础。

荔枝蒂蛀虫幼虫龄数及各发育阶段在不同温度下的发育历期

【目的】荔枝蒂蛀虫Conopomorpha sinensis Bradley是荔枝龙眼上的主要害虫,以幼虫蛀果为害。本研究旨在明确荔枝蒂蛀虫幼虫龄数及不同温度下各虫态和各龄幼虫的发育历期,为该虫发生规律、预测预报和防控技术研究提供基础生物学数据。【方法】定期收集处于不同发育时期的荔枝蒂蛀虫幼虫,测量幼虫头壳宽度,对其进行频次分析,Crosby指数验证和曲线回归分析,以确定幼虫龄数。通过室内群体饲养的方法,测定了17~38℃区间8个温度梯度下荔枝蒂蛀虫各虫态和各龄幼虫的发育历期,并采用线性日度模型对其发育速率与温度的关系进行回归分析。【结果】根据荔枝蒂蛀虫幼虫头壳宽度频次分布图,其头壳宽度的频次分布可明显分为5个区域,说明其幼虫分5个龄期,符合Dyar定律。1-5龄幼虫的头壳宽度分别为:0.092~0.120,0.140~0.206,0.217~0.319,0.356~0.523和0.582~0.728 mm。温度对荔枝蒂蛀虫卵、各龄幼虫和蛹的发育历期有明显影响,其发育历期均随温度的升高而缩短,其发育速率均与温度呈显著正相关,并符合线性回归模型。在20~32℃,荔枝蒂蛀虫可完成世代发育;在17℃时,该虫只能发育至3龄幼虫;在35℃时,蛹多不能羽化;在38℃时,卵多不能孵化。在20~32℃,其世代历期为41.16~19.34 d,蛹期为12.74~5.38 d,而产卵前期为4.75~4.22 d,温度对产卵前期无明显影响。在20~35℃,荔枝蒂蛀虫幼虫可正常发育,其1龄幼虫龄期为4.50~1.17 d,2龄幼虫期为2.09~1.40 d,3龄幼虫期为2.84~1.00 d,4龄幼虫期为3.41~1.18 d,5龄幼虫期为3.00~1.37 d,预蛹期为2.41~0.69 d。在17~35℃,荔枝蒂蛀虫卵可正常孵化,其卵期为7.73~2.09 d。【结论】荔枝蒂蛀虫幼虫分5个龄期,不同于前人所报道的4个龄期。在20~32℃温度范围内,卵、各龄幼虫和蛹的发育历期均随温度升高而缩短。本研究结果有助于荔枝蒂蛀虫预测预报方案的制定和实施。

荔枝蒂蛀虫发生规律及生活习性观察研究

对广州荔枝园中的荔枝蒂蛀虫(Conopomorpha sinensis Bladley)在挂果时段的发生高峰期再进行多次预测观察。同时,还模拟地下喷药对蒂蛀虫的控制试验,观测了幼虫的爬行距离,以及不同喷药处理与相邻果园的蒂蛀虫危害程度比较。研究发现:蒂蛀虫在果期都会危害果实,目前测定蒂蛀虫高峰期的方法还不够完善,或者说蒂蛀虫在某些年份或某些果园中没有明显的高峰期。文章讨论了这些现象的可能原因和蒂蛀虫的防治对策。

不同光环境对荔枝蒂蛀虫产卵的影响及田间防效调查

【目的】研究不同光环境对荔枝蒂蛀虫产卵的影响,为荔枝蒂蛀虫的绿色防控提供技术支撑。【方法】依据广西南宁市日出日落时间及荔枝蒂蛀虫常住地光照强度,在室内条件下研究6个光照时长及8个光照强度处理对荔枝蒂蛀虫产卵的影响;在荔枝收获前一个月开始果园夜晚亮灯,调查荔枝落地果及树上果的蛀果率变化。【结果】室内试验结果显示,全亮(24 h光照)条件下荔枝蒂蛀虫产卵前期为10.67 d,显著长于其他处理(2.00~4.67 d)(P<0.05,下同),卵期为1.33 d,显著短于其他处理(9.67~12.33 d),每雌产卵量为0.47粒/头,显著低于常规处理(136.33粒/头);在6:00-19:00光照强度500 lx、19:00-次日6:00光照强度10~900 lx时,荔枝蒂蛀虫产卵量为每雌0~0.47粒/头,显著低于常规处理(136.33粒/头)。田间试验结果表明,夜晚光照强度为70~130 lx和2~70 lx时的荔枝蒂蛀虫平均蛀果率分别为2.91%和3.65%,均显著低于常规处理(25.87%)。【结论】在荔枝收获前一个月开始果园挂灯,每日19:00-次日6:00光照强度2~70 lx的光环境可有效抑制荔枝蒂蛀虫产卵,进而极大降低荔枝蒂蛀虫蛀果率,可作为荔枝蒂蛀虫绿色防控技术大面积推广应用。

荔枝蒂蛀虫的产卵选择性研究

【目的】荔枝蒂蛀虫是荔枝、龙眼上的主要害虫,深入认识其产卵选择机制,对于该虫的有效控制有重要意义。【方法】通过产卵选择试验,测定荔枝蒂蛀虫对荔枝果实、产卵介质表面纹理结构、颜色、形状和大小以及荔枝嫩叶和老叶等的产卵选择。【结果】荔枝果实可吸引荔枝蒂蛀虫产卵,即使在无法接触果实的情况下,成虫也可在产卵介质上产卵,其落卵量与直接产于果实上的落卵量无显著差异。但将荔枝果实密封包裹或烘制成果干后,则未观察到成虫在上面产卵。可见,荔枝果实吸引荔枝蒂蛀虫产卵的活性物质主要存在于其气味中。荔枝蒂蛀虫对产卵介质的表面纹理结构有选择性,成虫在200~400目(0.038~0.075 mm)筛网表面产卵较多,在复印纸、80目(0.18 mm)和100目(0.15mm)筛网表面产卵较少,该虫偏好在表面具有细小缝隙的产卵介质上产卵,表面过于光滑或缝隙过大均会减少其落卵量。但当荔枝果实被密封包裹后,即使表面纹理结构适合,成虫也不产卵。荔枝蒂蛀虫对产卵介质颜色、形状和大小均无显著的选择性。此外,荔枝蒂蛀虫可在装有荔枝嫩叶和老叶的产卵介质上产卵,其落卵量与装有荔枝果实的产卵介质上的落卵量无显著差异,说明荔枝叶片和果实一样,均可吸引成虫产卵。【结论】荔枝果实、嫩叶和老叶均可吸引荔枝蒂蛀虫产卵,该虫对产卵介质表面纹理结构有选择性。荔枝叶片表面光滑,可能是荔枝蒂蛀虫在自然条件下较少选择在叶片上产卵的重要原因。

荔枝蒂蛀虫发生期的预测预报

应用逐日查蛹羽化进度法和虫蛹分级预报法对荔枝蒂蛀虫 Conopomorpha sinensis Bradley的发生期进行了预测预报,应用系统调查的方法观察荔枝蒂蛀虫在田间实际发生的情况,结果表明,所预测的发生期与实际的发生期结果相一致,2种测报方法均能准确预测荔枝蒂蛀虫的发生.

荔枝蒂蛀虫生物防治研究进展

对荔枝蒂蛀虫的各项生物防治技术作了较全面的评述。生物源农药是目前生产上使用最多的生物防治措施,在今后很长时间内也仍是主角;中华微刺盲蝽等捕食性天敌有望通过工厂化生产进行大量繁殖和释放,而寄生性天敌由于人工扩繁难、寄生率低等问题目前还难以实现大规模应用;使用信息素对荔枝蒂蛀虫种群数量影响不大,但可应用于测报。

荔枝蒂蛀虫(Conopomorpha sinensis Bradley)的饲养及其实验种群生命表

荔枝蒂蛀虫(Conopomorpha sinensis Bradley)是影响荔枝生产及出口的重要害虫。由于其具有钻蛀为害的习性,其生态学研究薄弱。以荔枝果核、龙眼果核为饲料,在室内成功饲养了连续3个世代的荔枝蒂蛀虫。并编制了荔枝蒂蛀虫实验种群的特定时间生命表和特定年龄生命表。特定时间生命表参数为:第一世代R0(I)=2.0503,rm=0.0230;第二世代R0(I)=7.5067,rm=0.0538;第三世代R0(I)=0.3104,rm=0.0321。特定年龄生命表参数为:第一世代R0(I)=2.0594,rm=0.0217;第二世代R0(I)=7.5261,rm=0.0559;第三世代R0(I)=0.3114,rm=0.0333。研究了两类生命表参数之间的关系,并进行了相应的换算论证。通过R0≈I的关系,在本例中,两种生命表之间的参数是可以进行换算的。生殖力表不同于特定时间生命表,它丢失了幼期累计存活率而使R0失真。

夜晚光照影响荔枝蒂蛀虫生活习性的观察

为了探索广州市天河区罗通山脚龙眼果园荔枝蒂蛀虫危害特别轻的原因,采用荔枝落地果在室内开放式饲养荔枝蒂蛀虫,研究荔枝蒂蛀虫对夜晚光照的反应变化,观察到蒂蛀虫在不同虫期都对夜晚光照有异常的反应:幼虫推迟了脱果爬行成茧的时间;蛹延后羽化;成虫的活动减少或时间规律紊乱;部分成虫长睡不醒;成虫蛰伏高度总体降低;生存率低于对照等。试验结果表明:荔枝蒂蛀虫没有"趋光性"。讨论了利用夜晚人工光照等物理防治方法来建立果园新的生态平衡,辅助控制或减轻荔枝蒂蛀虫危害的可能性。

湿度对荔枝蒂蛀虫生长发育的影响初探

通过人工控制养虫环境的湿度,初步探讨了荔枝蒂蛀虫幼虫、蛹在不同湿度环境下的生存情况,观察到荔枝蒂蛀虫在幼虫脱果爬行成茧期、蛹期都受到湿度的强烈影响,发现荔枝蒂蛀虫具有"厌湿性",即养虫环境的湿度越高,蒂蛀虫幼虫和蛹的死亡率就越高,提出了在挂果期持续保持地面潮湿、辅助控制荔枝蒂蛀虫危害的可能性,讨论了其他可能具有"厌湿性"的昆虫,如桔小实蝇等是否可以通过持久保湿土壤,从而减轻害虫危害的设想。

几种农药对荔枝蒂蛀虫卵和成虫的触杀作用及田间药效

【目的】筛选对荔枝蒂蛀虫卵和成虫有高效触杀作用的药剂,为荔枝蒂蛀虫防治提供科学依据。【方法】分别采用浸渍法和药膜法进行不同药剂对荔枝蒂蛀虫卵和成虫的室内毒效测定,筛选出高效药剂后进行田间药效试验;田间药效试验按常规方法进行。【结果】3.2%甲维盐·氯氰2000倍、44%氯氰·丙溴磷1000倍、4.5%高效氯氰菊酯1000倍、48%乐斯本1000倍、52.25%农地乐1000倍、40%丙溴磷1000倍、20%三唑磷1000倍7种药剂处理对荔枝蒂蛀虫成虫的12h触杀死亡率均为100.00%,对卵的触杀效果除40%丙溴磷和20%三唑磷外均为100.00%。田间药效试验所用的7种药剂共13个处理中,防治效果在80.00%以上的有12个,90.00%以上的有8个。【结论】13%高氯·唑磷乳油、22%毒死蜱·氯氰乳油、4.5%高效氯氰菊酯乳油、5%氯氰菊酯乳油、48%乐斯本乳油、40%毒死蜱乳油6种药剂对荔枝蒂蛀虫有很好的防治效果,可供生产中大面积防治时使用;3.2%甲维盐·氯氰微乳剂、44%氯氰·丙溴磷乳油、52.25%农地乐乳油亦可作为果园防治的备选用药。

寄主植物对荔枝蒂蛀虫产卵的引诱作用

试验观察荔枝蒂蛀虫Conopomorpha sinensisBradley对寄主植物品种、器官及器官部位的产卵选择性规律。结果表明,与老梢相比,荔枝蒂蛀虫明显倾向于选择嫩梢产卵;4个荔枝品种果枝中以妃子笑上落卵数最多,在淮枝、糯米糍荔枝果实上较少,桂味荔枝上最少;不同的荔枝品种果实气味引诱雌虫产卵的能力不同,其中妃子笑引诱力最强,淮枝、糯米糍引诱力较低,桂味最低;在同一荔枝果实不同部位的落卵量,以果皮上、下两部分较大,全果明显低于果皮上部,而荔枝肉和荔枝核上没有落卵。

荔枝蒂蛀虫对寄主植物提取物的触角电位反应

测定了荔枝蒂蛀虫Conopom orpha sinensisB rad ley交配前后的雌雄虫对荔枝果肉、荔枝果皮的水蒸气提取物、荔枝嫩梢和龙眼嫩梢的正已烷提取物的触角电生理活性.结果表明,荔枝蒂蛀虫的触角电生理活性随提取物种类不同和该虫的交配前后的不同而差异显著,交配前的荔枝蒂蛀虫对各提取物的反应差异不显著,而交配后荔枝皮提取物对雌虫的活性最大;荔枝皮和嫩梢的提取物体积混合比不同,触角的电生理活性也不同,以荔枝皮和荔枝嫩梢的提取物按体积比4∶2混合后活性最大;在不同时间段,触角电生理活性变化明显,在23时到凌晨1时之间呈现高峰期.

印楝素乳油对荔枝蒂蛀虫种群的控制作用

利用生命表的方法和干扰作用控制指数评价了印楝素乳油对荔枝蒂蛀虫Conopomorpha sinensisBradley种群的控制作用,结果表明:0.3%印楝素乳油对荔枝蒂蛀虫成虫显著的产卵忌避作用是其对该种群控制的主要机理。在室内,0.3%印楝素乳油在6 mL/L和3 mL/L的浓度处理下,对荔枝蒂蛀虫成虫产卵的忌避率分别为89.3%和86.3%。田间的试验结果表明,在印楝素乳油浓度为6 mL/L和和3 mL/L的处理区中,荔枝蒂蛀虫的种群趋势指数分别为1.23和1.45,显著低于对照区的种群趋势指数11.60,干扰作用控制指数分别为0.106和0.112。这2个浓度的印楝素乳油对荔枝蒂蛀虫种群的控制效果分别可达89.4%和87.5%。

不同环境龙眼园中荔枝蒂蛀虫危害调查

初步调查了荔枝蒂蛀虫在不同环境龙眼园的危害情况,调查结果表明:荔枝蒂蛀虫受果园湿度和夜晚光照的强烈影响,地面环境湿度高的、夜晚路灯光照的果园,蒂蛀虫危害时间推迟且危害率低。指出荔枝蒂蛀虫具有"惰光性"和"厌湿性",并提出了在龙眼开花坐果期利用地面保(加)湿或夜晚人工光照等物理防治措施来辅助控制荔枝蒂蛀虫危害的可能性。

妃子笑荔枝上荔枝蒂蛀虫实验种群生命表的组建

通过田间笼罩、排除天敌等生物因子的作用,建立了荔枝蒂蛀虫实验种群生命表.分析结果表明,荔枝蒂蛀虫产卵期可持续11d.荔枝蒂蛀虫雌虫产卵量因幼虫取食寄主器官不同而不同,以妃子笑果实为食的可产卵160余粒,以嫩梢为食的仅产卵99粒,且卵孵化率较低,果期、梢期分别为80%和81%.果期幼虫死亡主要是生理性和钻蛀荔枝果皮过程死亡所致,死亡率在10%以下.蛹期不羽化率均较高,果期、梢期分别为15%和33%.在妃子笑果期和梢期,荔枝蒂蛀虫实验种群趋势指数分别为43 68和25 12.

21种植物提取物对荔枝蒂蛀虫产卵的影响

于室内测定了21种植物提取物对荔枝蒂蛀虫成虫产卵的影响。结果表明,有3种植物提取物的产卵忌避率在70%以上,分别是灵香草82.0%、枫杨74.4%、地黄连71.7%。对灵香草乙醇提取物进行萃取分离,得5个分离组分,进一步的活性测定结果表明,活性成分主要存在于氯仿萃取部分和脂溶性部分,其产卵忌避率分别为93.7%和91.8%,说明灵香草氯仿萃取部分的产卵忌避活性最高。