荚膜唾液酸缺失对2型猪链球菌与人单核细胞相互作用的影响

目的本研究以人单核细胞THP-1为靶细胞,研究荚膜唾液酸成分对2型猪链球菌与人单核细胞相互作用的影响。方法透射电镜定性比较野生株及敲除株与人单核细胞相互作用并观察细菌的超微结构;通过涂板计数定量测定比较细胞对细菌的内吞及细菌在细胞内的存活情况;ELISA法检测野生株及敲除株刺激人单核细胞分泌炎症因子的水平。结果猪链球菌唾液酸突变株与人单核细胞间相互作用,在黏附、内吞及胞内存活方面与野生株相比均有显著的差异;野生株对人单核细胞杀伤的抵御能力显著强于唾液酸缺失突变株;唾液酸突变株能更加快速的刺激人单核细胞分泌IL-8,且分泌水平要高于野生株,但对IL-6的分泌无影响。结论荚膜唾液酸在2型猪链球菌致病过程中发挥着重要作用,为进一步探讨荚膜唾液酸参与2型猪链球菌强致病性调控奠定了基础。

尼罗罗非鱼无乳链球菌荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系

为了解尼罗罗非鱼无乳链球菌(GBS)荚膜多糖合成基因的表达及其与荚膜唾液酸含量、菌株致病性的关系,本实验克隆了尼罗罗非鱼荚膜多糖合成基因cps E、cps K和neu A,通过q RT-PCR方法分析了这3个基因在不同培养温度下表达水平的变化,同时通过比色法测定了不同培养温度下GBS荚膜唾液酸含量的变化,通过人工感染实验分析了不同水温条件下GBS对罗非鱼的致病性。结果显示,cps E、cps K和neu A编码的氨基酸序列均具有保守的与荚膜多糖合成相关的酶活性位点,Cps E、Neu A与已知鱼源GBS(Ia和Ib型)和人源GBS(Ia、Ib和II^IX型)相应序列的同源性均达到97%以上,而Cps K与鱼源、人源的序列同源性则分别为56%~100%和27%~100%。在不同培养温度下GBS cps K和neu A基因表达水平的变化与荚膜唾液酸含量的变化一致;在较高温度(28和34°C)下培养的GBS荚膜唾液酸含量及菌株攻毒后罗非鱼的死亡率均随温度的升高而递增,而在22°C下培养的GBS唾液酸含量最高,攻毒后罗非鱼的死亡率却最低。本研究结果表明,GBS Cps K和Neu A在GBS荚膜多糖的唾液酸化中起重要作用,较低温度下GBS荚膜唾液酸的高含量有助于其在宿主体内的潜伏,而较高水温条件下细菌的强致病性可能还与除荚膜唾液酸外的某些重要的毒力因子的表达有关。

荚膜唾液酸对猪链球菌激活巨噬细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路影响的研究

【目的】探索猪链球菌2型感染后单核/巨噬细胞启动信号转导通路机制,探讨荚膜唾液酸对细菌激活巨噬细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路的影响。【方法】以小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为研究对象,采用RT-PCR、Western blotting、免疫荧光和ELISA法分别检测猪链球菌2型野毒株、唾液酸缺失突变株、唾液酸回复突变株感染后不同时间点巨噬细胞TLR2 mRNA转录水平、AKT磷酸化水平、NF-κB激活程度以及前炎症因子TNF-α分泌水平;再分别用TLR2阻断剂和PI-3K抑制剂预处理巨噬细胞,检测上述分子的表达水平。【结果】唾液酸缺失株可选择性的活化信号转导通路途径。RT-PCR结果表明,缺失株TLR2 mRNA表达水平自1 h开始升高,1.5 h达高峰后有所下降;Westernblotting显示,缺失株TLR2蛋白表达水平7 h达高峰,9 h下降;p-AKT水平1.5 5 h持续稳定在高峰水平,7 h后开始下降;免疫荧光可见15 min NF-κB激活-核转运程度较高;ELISA结果显示,10 h之后TNF-α的水平显著高于野生株和回复株。使用TLR2阻断剂和PI-3K抑制剂,三菌株通路活化程度均明显受抑制。【结论】荚膜唾液酸可抑制宿主免疫细胞TLR2-AKT-NF-κB信号通路的激活,藉此参与细菌逃避宿主的免疫防御作用。