烧伤患者金黄色葡萄球菌分离株细胞毒素、侵袭毒素及荚膜抗原基因研究

目的了解烧伤患者金黄色葡萄球菌分离株的细胞毒素、侵袭毒素和荚膜抗原基因携带状况,以指导临床更有效地治疗金黄色葡萄球菌感染。方法收集2013年7—12月宁波市第二医院烧伤病房创面及留置导管来源的金黄色葡萄球菌,通过Vitek-2compact全自动鉴定仪上机及葡萄球菌A蛋白PCR基因表达鉴定菌株,PCR方法分析10种细胞毒素基因(hla、hlb、hld、hlg、hlg-2、pvl、luk E、luk M、psm-mec、psm-α)、9种侵袭毒素基因(ssp、spl B、edin A、edin B、edin C、sak、hys A、lip、nuc)及2种荚膜抗原基因(cap5、cap8)。结果 20株金黄色葡萄球菌中细胞毒素基因hla检出率为85.0%;hlg-2检出率为80.0%;psm-α检出率为70.0%;luk E检出率为55.0%;pvl检出率为15.0%;hlb检出率为10.0%;hld、hlg、luk M、psm-mec基因未检出;侵袭毒素基因lip和nuc检出率为90.0%;spl B检出率为60.0%hys A检出率为20.0%;ssp、edin A、edin B、edin C、sak未检出,荚膜抗原基因cap5、cap8检出率分别为30.0%和70.0%。结论该研究中20株金黄色葡萄球菌细胞毒素基因与侵袭毒素基因高检出率可能与创面或伤口久治不愈相关。

禽多杀性巴氏杆菌保护性荚膜抗原基因的克隆及表达

提取禽源多杀性巴氏杆菌C48—1的染色体,用“鸟枪法”将酶解染色体DNA片段重组到pBR322质粒载体的Pst I酶切点上,再转化到大肠杆菌RRI中.经耐药表型筛选,在约5000个转化菌中,找出了887个具有重组质粒的细菌株,其一般细菌学性质与大肠杆菌RRI相同,构成了禽多杀性巴氏杆菌C48—1染色体DNA的不完全基因文库.分离提纯保护性荚膜抗原,制备抗血清,用^(125)I SPA固相放射免疫技术,从文库中选出13株阳性表达菌株,与用ELISA法复试结果吻合,其中10号和696号菌株表达较强.对10号和696号菌进行了动物试验,结果1次免疫小鼠分别获3/7、2/7的保护,2次免疫分别获6/11和5/11的保护,与之对照的阴性转化菌(119号)以及大肠杆菌(RRI)则无保护力(0/7、0/10).用快速细菌破碎法对13个阳性菌株进行了检测,其外源基因片段在0.5～5.4kb之间.对10号阳性菌免疫电镜观察,在细胞膜及细胞浆内均可见到高电子密度区,显示出外源基因表达的位置和程度.10号菌的重组质粒命名为PPM10,分子量约为5.16kb,用Pst I酶切PPM10,得到约4.3kb和0.86kb的两个片段,因此插入片段约0.86kb.进一步用内切酶分析,证明该插入片段上无Bam HI、Eco RI、Hind III和另外的Pst I酶切点.