用新生隐球菌荚膜相关蛋白10基因mRNA水平评估抗真菌药物疗效

目的定量检测新生隐球菌(Cryptococcus neoformans,CN)的荚膜相关蛋白10(capsule associated protein 10,CAP10)基因mRNA,探索将其用于隐球菌性脑膜炎抗真菌药物疗效评估的可行性。方法构建重组质粒标准品pGEMT-Easy-CAP10并制作标准曲线;建立荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)反应体系并对其进行评价。利用建立的FQ-PCR体系检测11例氟康唑联用5-氟胞嘧啶治疗、9例两性霉素B联用5-氟胞嘧啶治疗患者治疗前后脑脊液(CSF)CAP10 mRNA拷贝数的变化,并结合临床资料进行分析。结果建立的FQ-PCR体系适合于CAP10 mRNA拷贝数的测定。两性霉素B联合5-氟胞嘧啶治疗组CAP10 mRNA的拷贝数的log值治疗前为3.43±0.84,治疗后下降为2.35±0.85(P<0.05);氟康唑联合5-氟胞嘧啶治疗组治疗前为2.65±1.24,治疗后下降为1.84±1.07(P<0.05)。2组患者临床症状均明显改善。结论构建的新生隐球菌CAP10 mRNA的FQ-PCR定量检测体系适合于脑脊液标本的检测,为新生隐球菌感染患者抗真菌药物疗效的判断提供了新的依据。

新型隐球菌Cap10蛋白的重组表达及多克隆抗体制备

目的:重组表达新型隐球菌Cap10蛋白并制备特异抗体,为新型隐球菌的检测和诊断提供特异抗原和抗体。方法:选择CAP10基因开放阅读框架(ORF)抗原表位集中、保守性高的片段,经过大肠杆菌偏嗜的密码子优化后进行基因合成,将目的片段克隆至原核表达载体pQE30中构建重组蛋白表达载体pQE30-CAP10并鉴定,IPTG诱导重组蛋白在M15中表达,并用SDS-PAGE和Western blot鉴定;镍柱纯化后,免疫家兔制备抗血清。结果:在大肠杆菌中成功表达Cap10,其纯度大于95%;二免后家兔血清抗体效价达到200万以上。结论:获得了高纯度的Cap10蛋白及高效价的多克隆抗体,为新型隐球菌的检测和致病机制研究奠定了基础。

CARMA蛋白家族与疾病关系的研究进展

含半胱天冬酶募集结构域的膜相关鸟苷酸激酶蛋白(CARMA),属于膜相关鸟苷酸激酶家族成员。CARMA蛋白家族有三个成员,分别是CARMA1、CARMA2和CARMA3。CARMA蛋白家族三个成员均可通过与B细胞淋巴瘤10(BCL10)、黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤基因1(MALT1)组成CARMA1-BCL10-MALT1(CBM)复合体参与人核转录因子κB(NF-κB)的激活过程,从而发挥其生物学功能,广泛参与各种人类疾病的发生、发展过程。