三种逆行示踪工具标记小鼠前扣带回皮质传入核团的比较

目的:通过对小鼠前扣带回皮层(ACC)立体定位注射重组腺相关病毒(rAAV2⁃retro)、荧光乳胶微球(retrobeads)及狂犬病毒(RV)的方法,比较三种逆行示踪工具对ACC上游传入核团的标记效果。方法:将rAAV2⁃retro⁃hSyn⁃EGFP⁃P2A⁃Cre⁃WPRE⁃hGH⁃PA、retrobeads(Red)等量混合后注射到小鼠ACC脑区,待病毒表达3周后灌注取脑、切片观察。另外将rAAV2/9⁃EF1α⁃DIO⁃oRVG(19G)、rAAV2/9⁃EF1α⁃DIO⁃NLS⁃mCherry⁃P2A⁃TVA⁃T2A⁃RVG、rAAV2/9⁃CaMKIIα⁃Cre混合后注射到小鼠ACC脑区,待病毒表达2周后将RV⁃EnvA⁃ΔG⁃EGFP注射到相同部位,1周后灌注取脑、切片观察,比较三种策略标记到ACC上游传入核团的神经元数量及形态。结果:retrobeads标记到的核团最多,但无法标记神经元形态及树突结构;RV标记到的核团数量次之,胞体及树突结构标记完整,而且可以观察到清晰的树突棘;rAAV2⁃retro标记到的核团最少,能标记到树突,但无法标记树突棘。三者在内侧眶皮层、腹侧眶皮层、视皮层等区域均能够高效标记。其中,RV在丘脑腹前核和腹外侧核标记效率高于其他两种工具。结论:ACC接受脑内的广泛投射,而三种逆行示踪剂在标记效率和标记神经元结构完整性上各有优劣。

人成纤维细胞胶原吞噬与非胶原吞噬亚群分离及差异基因的筛选

目的:探讨建立新的分离人成纤维细胞胶原吞噬亚群(CPSF)和成纤维细胞非胶原吞噬亚群(n CPSF)的方法,并筛选两者差异表达基因。方法:根据CPSF和n CPSF吞噬功能的差异,联合应用胶原包被的异硫氰酸荧光乳胶微球(COL-FITC-LB)吞噬技术和流式细胞分离技术分离二者,并通过生物芯片技术和real-time PCR筛选、验证两者差异表达基因,寻找CPSF和n CPSF具有特征性的分子标志物。结果:成功分离CPSF和n CPSF,并对其基因差异性分析,得到17个差异表达基因。与n CPSF比较,CPSF中有12个基因表达上调,5个表达下调。对其中与胶原吞噬功能可能相关的3个基因进行验证,即纤溶酶原激活物受体相关蛋白(urokinase plasminogen activator receptor-associated protein,u PARAP)、细胞色素b-245,β多肽(cytochrome b-245,beta polypeptide,CYBB)和同源物1(Hook homolog 1,HOOK1),CPSF中u PARAP表达量为n CPSF的2 788倍;CPSF中CYBB表达量为n CPSF的0.85倍;CPSF中HOOK1表达量为n CPSF的1.96倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:建立了分离CPSF和n CPSF的新方法。CPSF和n CPSF最主要的差异表达基因是u PARA P,对成纤维细胞胶原吞噬功能具有重要影响,是治疗胶原代谢疾病新的候选靶分子之一。