荧光免疫层析技术原理及其在病原微生物检测中的研究进展

荧光免疫层析技术是近年来开发的一种新型免疫检测技术,以荧光微球为标记物,既保留了传统胶体金试纸条检测速度快、价格便宜、操作简单、携带方便等优点,又通过荧光技术提高了检测的灵敏度。荧光免疫层析技术对实验设备、资源的要求低,特别适合在条件有限的实验室及野外开展动物疾病快速诊断。本文详细介绍了荧光免疫层析技术的原理及其在病毒、细菌、寄生虫等病原检测方面的应用研究,以期为病原微生物现场快速诊断技术的开发提供参考。

时间分辨荧光免疫层析技术在PRRS检测中的应用

采用荧光免疫层析技术,以时间分辨荧光微球作为标记物,研制出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)荧光微球抗体检测试纸。对检测试纸的敏感性、特异性、重复性及符合率进行了试验研究。结果表明,研制出的猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光微球抗体检测试纸灵敏度高、特异性好,与IDEXX公司酶免试剂盒比较,符合率可达到92.5%。适用于临床样本的快速检测.

荧光免疫层析技术在毛发样本吗啡检测中的应用

为有效解决检测时间窗口期偏短、检测灵敏度和准确性不高、血液和尿液等检材采集不够便捷等困扰毒品现场快速检验领域的国际性难题和关键技术,应用荧光免疫层析技术并配合专用的快速分析仪器检测毛发检材中微量吗啡,在检出率不小于90%的前提下,在进样量为80μL时,对浓度为2 ng/mL的吗啡毛发样品进行采样分析,检测限应小于等于0.16 ng/mg,可有效地排除非特异荧光的干扰,极大地提高分析灵敏度和准确度。研究结果表明,此技术符合毒品相关阳性检测临界浓度标准,与以往血液、尿液和唾液等生物检材的快速检测技术相比,具有检测时间窗口期可长达半年、检测灵敏度和准确性更高、毛发检材采集更便捷等优点,是一种可广泛用于阿片类药物及其他毒品的初筛检测的有效方法。论文对荧光免疫层析技术应用于毛发样本中的吗啡检测的相关技术及操作进行介绍,以期为相关毒品检测提供参考。

基于荧光免疫层析法建立甲型流感病毒快速检测技术的研究

目的基于荧光免疫层析技术平台,针对甲型流感病毒抗原,开发甲型流感病毒快速诊断试剂。方法利用荧光微球标记甲型流感病毒单克隆抗体、生物素标记甲型流感病毒单克隆抗体以及包被亲和素和羊抗鼠IgG多克隆抗体的检测卡,构建甲型流感病毒检测体系。通过原料评价、校准曲线、空白限、准确度、线性范围、重复性、热稳定性及临床比对,验证试剂诊断性能。结果本研究得到的荧光免疫层析试剂具有准确度高、检测范围宽、重复性和热稳定性好等优点,其正确率及敏感率均明显高于经典的胶体金试剂。结论本研究应用将为国境口岸或医院的甲型流感病毒快速筛查提供方便、快捷、灵敏的技术手段。

食品检测中现代检测技术的应用与分析

食品安全问题是社会各界关注的焦点话题,食品检测是保障食品安全和公众健康的重要手段,发挥着至关重要的作用。现代检测技术具有灵敏度高、精准度高、检测效率高等特点,在食品检测领域有着良好的发展前景。本文详细分析了光谱技术、超声波技术、基因芯片技术及荧光免疫层析技术等现代检测技术在食品检测中的应用,旨在全面推广现代检测技术,进一步提升食品检测水平,保障食品安全。

背景荧光猝灭-免疫层析法检测牛奶中卡那霉素的方法建立

目的建立基于背景荧光猝灭-免疫层析技术快速定量检测牛奶中卡那霉素的方法。方法根据卡那霉素抗原和抗体的活性,筛选出卡那霉素抗原和抗体在检测系统中最佳的比例浓度,按照筛选出的最佳检测系统比例进行牛奶样品中卡那霉素浓度测定及完成方法学验证。结果以最佳方法测定牛奶中卡那霉素的浓度,其测定范围为0.2319~60.01μg·L^-1,最低检测限为0.2003μg·L^-1;牛奶样品中高、中、低卡那霉素测定的平均加标回收率分别为98.9%、102.3%、95.9%,RSD为2.36%、4.89%、1.41%。牛奶样品采用本法与国标方法的检测结果无显著性差异(P>0.05)。结论本方法可以确定为一种的检测牛奶中卡那霉素的专属性强、灵敏度高、简便、快速、准确的的新方法。

两种β2-受体激动剂荧光免疫快速检测试纸条的制备及评价

目的:探索一种同时对莱克多巴胺(RAC)、沙丁胺醇(SAL)两种常见瘦肉精进行快速检测的荧光免疫试纸条的制备方法并评估其性能。方法:用荧光染料直接标记抗体,制备检测猪尿中RAC和SAL的试纸条,对试纸条的检出限、重复性进行评估。结果:RAC和SAL的检测限均可达到1 ng·mL^(-1);RAC和SAL重复性检测中变异系数(CV)小于15%。结论:试验中可用于猪尿中RAC和SAL快速检测的试纸条,具有制备简单、灵敏度高的特点,便于规模化生产。

牛布鲁氏菌抗体荧光快速检测试纸卡的研制

为研制一种快速检测牛布鲁氏菌抗体的便捷试纸卡,采用间接荧光免疫层析技术,以荧光微球为标记物,与兔抗牛IgG偶联,以布鲁氏菌脂多糖(LPS)抗原包被硝酸纤维素膜,通过反应条件优化,研制牛布鲁氏菌抗体荧光微球快速检测试纸卡。结果显示:该试纸卡灵敏度可达0.8 IU/mL,与牛口蹄疫病毒O型、牛口蹄疫病毒A型、牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒的抗体阳性血清均无交叉反应;对469份临床牛血清进行检测,同时与荧光偏振方法进行比较,发现两种方法的符合率为100%。结果表明,本次研制的牛布鲁氏菌抗体荧光微球检测试纸卡灵敏度高,特异性好,适用于临床样品的快速检测。本试纸卡的成功研制为牛布鲁氏菌病免疫效果评估和准确诊断提供了一种简便的血清学诊断方法。

四环素类药物时间分辨荧光层析检测试纸条的研制

本试验建立了一种检测四环素类药物的时间分辨荧光免疫层析技术,并在动物源性食品中对其检测性能进行了研究。实验结果显示,对猪肉、鸡肉等动物组织样品中四环素类药物的检测限为:四环素30μg/kg、金霉素60μg/kg、土霉素40μg/kg、强力霉素80μg/kg;对100ppb的磺胺二甲基嘧啶、恩诺沙星、氯霉素等药物无交叉反应,特异性较好;变异系数小于6%,精密度高;试纸条对高、低温不敏感,稳定性强。

赭曲霉毒素A时间分辩荧光定量检测体系适用性评价

目的验证赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)时间分辨荧光免疫定量检测体系对谷物中赭曲霉毒素A快速检测的适用性。方法该时间分辨荧光免疫定量检测体系包括时间分辨荧光免疫层析检测卡和时间分辩荧光定量检测仪。时间分辨荧光速测仪内置标准曲线,直接得出待测样品中赭曲霉毒素A的含量。对待测样品进行低、中、高3个浓度添加,每个浓度分为7份,由不同人员检测。同时,对实际阳性样品进行检测。结果对谷物做赭曲霉毒素A添加回收率实验,回收率在98%~113%之间;批内变异系数<15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光定量检测卡得出的数值,与质控样本标识的值没有显著性差异。结论时间分辨荧光定量检测系统检测快速、准确,稳定、检测设备小型化、联网可实现数据上传,适用于大批量谷物样品的快速检测和风险评估。

一种PIC荧光免疫层析检测方法的建立

[目的]建立一种PIC荧光免疫层析检测方法。[方法]以天然PIC为免疫原,使用快速免疫方案免疫BALB/C小鼠,利用常规单抗制备技术制备抗PIC单抗;以PIC、α2-AP、PLG为筛选源使用间接ELISA进行单克隆抗体筛选;通过Western Blot及间接ELISA对抗体的抗原识别表位及特异性进行鉴定;通过间接ELISA对抗体类型及亲和常数进行检测;通过双抗夹心法筛选出抗PIC抗体的最优配对,建立PIC的荧光免疫层析检测方法;对建立的方法进行灵敏度和精密度测试;使用65例临床样本初步评价与Sysmex试剂的相关性。[结果]获得了一对针对PIC新抗原的最优配对单抗B6A02和B6A23,抗体属于Ig G并对PIC有较高亲和力(亲和常数达到10-9),并使用B6A02和B6A23分别作为包被抗体和检测抗体制备PIC检测试剂,该试剂在40~40 000 ng/m L范围内呈良好的线性关系(R2=0.997);灵敏度为40 ng/m L;批间CV不高于5.47%;与Sysmex的PIC检测试剂相关性良好(R2=987)。[结论]使用针对PIC新抗原表位建立了PIC荧光免疫层析检测试剂,具有灵敏度高、精密度好、特异性强等特点,与Sysmex试剂检测结果符合率高。

背景荧光猝灭-免疫层析定量检测尿纤维连接蛋白及膀胱癌辅助诊断的应用

目的:采用基于背景荧光猝灭-免疫层析技术研制的尿纤维连接蛋白(Fn)定量检测卡,建立一种快速、简单、无创的定量检测膀胱癌肿瘤标记物的方法。方法:使用Fn定量检测卡,分别检测尿液样本膀胱癌组50例、健康人组100例、其他部位肿瘤组50例和良性泌尿系统疾病组14例,利用统计分析确定出膀胱癌患者cutoff值、灵敏度、特异度,对检测结果进行LSD-t多重比较显著性分析。结果:在Fn检测结果统计分析中,膀胱癌患者组与其他各组Fn值比较差异均有统计学意义(P<0.05),而其他各组之间两两比较差异均无统计学意义(P>0.05),ROC-Fn曲线中得出cut-off为324.05ng/ml,灵敏度为70.0%,特异度为99.9%。结论:Fn检测卡能定量检测尿液中Fn含量,有较高的专属性,检测速度快,有望成为膀胱癌辅助诊疗的新方法。