时间分辨荧光免疫法检测胎盘生长因子的方法建立及性能评价

目的建立检测胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)的时间分辨荧光免疫分析法(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA),并对其性能进行评价。方法利用捕获PLGF单克隆抗体包被微孔板,铕标记检测PLGF单克隆抗体,建立一种双抗体夹心TRFIA定量测定孕妇血清中的PLGF浓度。对该方法的检测低限、生物检测限、功能灵敏度、精密度、线性、干扰试验、交叉反应试验和HOOK效应等性能指标进行评价。选择125例孕期在9~40周,无溶血、黄疸和脂血的孕妇血清剩余样本,用于方法学比对研究,比对试验结果的相关性采用线性回归分析。结果该方法的捕获抗体包被浓度为7.0μg/ml,铕标记物使用工作稀释度为1:500,样本最适反应时间为90 min,检测低限为1.00 pg/ml,生物检测限为8.00 pg/ml,功能灵敏度为10.00 pg/ml,批内CV和批间CV均在5.00%以内,线性范围为9.00~10500.00 pg/ml,分别在低浓度和高浓度质控品中添加有干扰物质的16种干扰样本与基础样本检测结果的相对偏倚在-3.49%~2.20%内;检测5000 pg/ml糖基化PLGF-1,5000 pg/ml糖基化PLGF-2,5000 pg/ml未糖基化PLGF-3,10000 pg/ml未糖基化血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)/PLGF-1异二聚体,50000pg/ml糖基化VEGF165和40000 pg/ml可溶性FMS样酪氨酸激酶-1,交叉反应率分别为41.82%,27.86%,19.68%,0.042%,0.063%和0.0045%;检测样品PLGF浓度高达115000 pg/ml时仍未出现HOOK效应;样本PLGF浓度在5.74~4197.00 pg/ml间,与电化学发光法(electrochemiluminescence,ECL)检测结果的线性回归方程为Y=1.0709X-30.192,(r=0.9806,tr=55.42,P<0.05)。结论该方法灵敏度高、精密度好、线性范围宽、抗干扰能力强、特异度好、检测范围宽,与参比方法检测结果的相关性良好,可以满足临床需要。

顺序注射可更新表面固相荧光免疫法测定人血清中免疫球蛋白G

建立了采用芯片式微型流通池的测定人血清中免疫球蛋白G(IgG)的顺序注射可更新表面非均相荧光免疫分析法。将羊抗人IgG抗体固定于包被有蛋白A的SepharoseCL 4B凝胶微珠 ,然后制备成固相抗体。用标记FITC的抗人IgG抗体作为第二抗体。固相抗体、血清试样和荧光标记第二抗体由顺序注射系统注入芯片式微型流通池 ,并在其中进行免疫反应生成夹心式抗体 抗原荧光复合物。荧光分光光度计通过光纤与流通池耦合测定截留于流通池中的抗体 抗原复合物荧光强度。一次测定完成后 ,微珠即被排出流通池。流通池经缓冲液清洗后即可进行下一次测定。体系经优化后 ,检出限为 0 .1mg/LIgG ,分析速率达到11次 /h。3.9mg/LIgG的日内和日间精密度 (RSD)分别为 1.7%和 5 .2 % ;校正曲线的线性范围为 0 .3～ 7.0mg/LIgG。所建立的方法已成功地应用于人血清中IgG的测定。

应用间接荧光免疫法测定细胞核中特异CMV病毒早期抗体(PENA)方法的建立

目的 介绍一种敏感、稳定、快速、简便的实验室检测CMV的方法。方法 对 5 0 8例病人应用间接荧光免疫法测定细胞核中的特异病毒早期抗体 (PENA)。结果 强阳性 2 5 2例 ,阳性率5 0 .6 0 % ;弱阳性 81例 ,阳性率 16 .2 7%。结论 该方法操作简便 ,可对CMV感染进行早期测定及诊断 ,同时具有敏感性和稳定性 。

时间分辨荧光免疫法定量检测AFP试剂盒临床应用研究

对自制AFP时间分辨荧光免疫法(TRFIA)试剂盒进行研究,为临床应用评价提供科学依据。收集血清标本450份,分别以化学发光免疫分析(CLIA)和RIA为对照,用AutoDELFIATMhAFP试剂盒为复核试验,测定血样,获取实验数据并计算“真实性”和“可靠性”。结果表明,CLIA及RIA为对照试验,其阳性符合率分别为99.0%和97.4%,阴性符合率分别为97.2%和94.1%,检验均无显著性差异(P>0.05)。本试剂盒的定量测定值与CLIA比较接近,相关系数为0.994,与RIA为0.917,两者相关性好(P<0.01)。本试剂盒检测性能能满足临床应用的需要。

时间分辨荧光免疫法定量检测乙肝病毒血清标志物的临床意义

目的探讨时间分辨荧光免疫法用于定量检测乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义。方法采用时间分辨荧光免疫法(TRFIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)同时对196例患者HBV血清标本进行5项指标检测。结果 TRFIA法检测患者标本乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)的阳性率分别为59.7%、24.5%、25.5%、29.1%、78.6%。ELISA法检测患者标本HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb的阳性率分别为52.1%、18.4%、21.4%、23.5%、67.9%。TRFIA法检测的阳性率均显著高于ELISA法(P<0.05)。结论 TRFIA法测定乙肝病毒血清标志物的相对灵敏度高,的可为临床疗效观察及乙肝疫苗的接种提供科学依据。

纳米均相时间分辨荧光免疫法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法的建立

目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术(AlphaLISA)建立间接竞争DON定量检测方法。方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果:该方法的灵敏度为0.007ng/mL,检测范围为0.007～100ng/mL,批内批间变异系数均<5%。不同样品添加回收实验:玉米、小麦、啤酒回收率分别为84%～110%、67%～100%、74%～100%。结论:DON-AlphaLISA是目前DON检测中最灵敏的方法之一,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景。

时间分辨荧光免疫法测定乙型肝炎病毒标志物

我国是乙型肝炎病毒（HBV）的高感染国家,乙肝病毒感染是常见的感染性疾病之一,而乙肝的预防、诊断和疗效等方面大部分都依赖HBV五项血清学指标的测定[1,2]。近年来常用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定HBV-M,确定是否感染乙肝,检查急慢性HBV复制状态及评价抗病毒疗效。

时间分辨荧光免疫法检测乙型肝炎病毒标志物的效果评价

目的评价时间分辨荧光免疫法检测乙型肝炎病毒标志物的效果。方法用时间分辨荧光免疫法(TRFIA)和酶联免疫吸附试验法(ELISA)两种方法分别对330例疑为乙肝的血清标本进行检测,并进行对比分析。结果两组的乙型肝炎病毒标志物的符合率分别为:乙型肝炎表面抗原(HBsAg)96.0%、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)95.3%、乙型肝炎e抗原(HBeAg)95.4%、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)93.0%、乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)83.4%,经配对卡方检验P<0.05,差异有统计学意义(TRFIA法的阳性预示值比率高于ELISA法)。结论 TR-FIA法检测乙型肝炎病毒标志物准确度高、特异性好、可定量等优点,具有良好的应用价值。

应用荧光免疫法检测生殖道沙眼衣原体及加德纳细菌

应用荧光免疫法检测生殖道沙眼衣原体及加德纳细菌刘彦平，张玉芳，赵淑兰，邵嘉会８０年代以来我国性病发病率逐年增加，其中沙眼衣原体、阴道加德纳细菌已成为性传播疾病的主要病原体，引起了国内外学者的关注。我们应用单克隆抗体荧光染色技术对６６例妇科患者进行了检...

时间分辨荧光免疫法检测食品中黄曲霉毒素B_1的含量

目的建立高灵敏度的时间分辨免疫法检测黄曲霉毒素B_1的含量。方法通过双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合稀土元素Eu^(3+)标记抗AFB_1的单克隆抗体,以AFB_1-OVA为固相抗原,优化反应条件,建立直接竞争时间分辨免疫检测方法。结果优化条件后,方法灵敏度为0.02μg/L,IC_(50)为0.73μg/L,线性检测范围为0.01~30μg/L,大米、花生、黄豆和干果样品回收率在91%~104%之间,检测结果准确;与结构类似物AFB_2、AFG_1、AFG_2、AFM_1的交叉反应率分别为17.3%、4.49%、2.37%和0.73%。结论本方法灵敏度高、特异性强、检测快速,可以满足实际样品的检测需求。

时间分辨荧光免疫法人巨细胞病毒IgG抗体定量测定试剂盒的研制

目的建立人巨细胞病毒IgG(HCMV IgG)抗体时间分辨荧光免疫法(TrFIA)并研制其试剂盒。方法采用HCMV pp150+pp52+pp65抗原作为包被抗原,铕标记羊抗人IgG作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主的增强液,应用间接TrFIA法测定HCMV IgG抗体,将自制试剂盒与同类试剂盒进行方法学比对试验,比对定量结果的等效性采用线性回归分析。结果自制HCMV IgG抗体试剂盒的最低检测限、重复性、阴性参考品符合率、阳性参考品符合率均能达到国家检定标准;检测标化的企业校准品,其实测值与理论值相对偏差均在±20.0%以内;在2.0 RU/mL^256.0 RU/mL范围内,线性相关系数不低于0.9900;于37℃恒温箱放置6天后,检测性能无明显改变;临床研究评价一致程度百分比达99.4%,1020例临床样本定量结果的线性回归方程为Y=0.9594X+0.3252,r=0.9918。结论自制试剂盒测定HCMV IgG抗体灵敏度高、特异性强、精密度好、准确度高、线性范围宽;与同类检测结果相关性好,能满足临床需要。

流式荧光免疫法检测多肿瘤标志物的方法学评价

目的评价流式荧光免疫法在多肿瘤标志物定量测定中的可靠性。方法用流式荧光免疫法对试剂盒精密度、线性、携带污染率、抗干扰性等指标进行评价,同时将Luminex^TM-100与Bio-Ekon SerozymeⅠ的结果进行比较。结果本方法化学性能的评价表明,批内变异系数（CV）均〈10%,批间CV均〈14%。线性良好（r〉0.99）。携带污染率均〈0.5%。血红蛋白（Hb）、胆红素（Bil）、三酰甘油（TG）对测定结果无显著干扰（P〉0.05）。与Bio-Ekon SerozymeⅠ内分泌定量分析仪及配套试剂相关性良好（r〉0.975）。对506名年龄在24-84岁健康体检人员标本用本方法进行多肿瘤标志物测定,正常参考值分别为甲胎蛋白（AFP）〈15 ng/mL、糖类抗原125（CA125）〈35 U/mL、癌胚抗原（CEA）〈5 ng/mL、糖类抗原199（CA199）〈35 U/mL、前列腺特异抗原（PSA）〈4 ng/mL。结论本方法测定结果准确、可靠且操作简便、快速,适宜于临床检测推广。

时间分辨荧光免疫法定量检测HBV标志物的临床意义

目的 定量检测乙型肝炎血清标志物 (HBVM) ,了解其与荧光定量PCR(FQ -PCR)检测HBVDNA的关系及其临床意义。方法 采用时间分辨荧光免疫 (TRF)分析法和FQ -PCR技术 ,分别检测大三阳和小三阳共 6 90份乙型肝炎血清HBVDNA和HBVM含量。结果 在不同浓度HBeAg和HBeAb的标本中有不同比例的不同浓度HBVDNA的检出率 ,显示出e系统和HBVDNA在定量检测上有较好的一致性。结论 TRF是目前较好的定量检测HBVM的新技术 ,在乙肝患者传染性大小判断、疗效观察及预后判断等方面同FQ -PCR一样也将具有较大的临床指导价值。

酶联免疫吸附法和时间分辨荧光免疫法在检测乙型病毒性肝炎中的效果比较

目的分析比较ELISA法和TRFIA法在检测乙型肝炎患者血清学标志物的灵敏性。方法以2011年5月至2012年1月期间来我院就诊的74例乙肝患者为研究对象。分别采用两种检测方法对患者血清学标志物进行检测，并对检出结果进行统计分析。结果TRFIA法对乙肝患者血清标志物检测的阳性率明显高于ELISA法（P〈0．05）。结论与ELISA相比，TRFIA法对乙肝血清学标志物的检测更为灵敏，临床上值得推广。

时间分辨荧光免疫法在新生儿先天性甲状腺功能减退中的检测分析

目的分析时间分辨荧光免疫法(TRFIA)对新生儿先天性甲状腺功能减退(CH)的检测评估效果。方法采用TRFIA和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种方法对新生儿足跟血促甲状腺激素进行检测。结果 TRFIA法的检出率为1/1642,ELISA法的检出率为1/3796,TRFIA法的检出率明显优于ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05);TRFIA的99%百分位值为8.81μU/ml,ELISA为12.64μU/ml,TRFIA的室内质控、内质控C1血片CV值为4.88%～10.61%、s0.61～1.81。结论 TRFIA法作为新生儿CH的筛查方法是可靠的,具有检测质量稳定、敏感度高的特点,值得在临床上加以推广和应用。

用间接荧光免疫法快速检测牙周袋内牙龈类杆菌

本试验选择成年牙周炎致病菌—产黑色素类杆菌群中牙龈类杆菌为指示菌,用牙龈类杆菌47A—1参考株制备标准抗血清,并和羊抗兔IgG荧光抗体,直接与牙周龈下菌斑标本涂片进行间接荧光反应,计数一个视野荧光反应阳性的牙龈类杆菌的菌数(三个视野平均值)。全过程只需1.5～2小时。用此法检查了90例健康人,75例牙龈炎及70例牙周炎患者。

芯片式流通池用于顺序注射可更新表面荧光免疫法测定人血清中的IgG

采用芯片式流通池作为非均相免疫反应和原位固相荧光检测的场所,用双岔光纤将芯片式流通池与荧光光度计耦联,以双抗夹心式非均相免疫反应的模式,研究建立了测定人血清中IgG的顺序注射可更新表面非均相免疫分析新方法.