应用改进的免疫荧光组织化学染色法对水稻根尖细胞微管结构的观察

植物细胞微管在细胞形态建成中具有重要作用。它体积小,且结构始终处于动态变化之中,因此观察到清晰的微管形态有一定的困难。本实验以水稻根尖为材料,介绍了一种改进的植物细胞微管免疫荧光组织化学染色方法,用此方法可以观察到清晰、完整的植物微管形态,此法对观察其它植物细胞微管结构也具有指导作用。

胚胎脑片免疫荧光组织化学双重漂染技术在神经元发生研究中的应用

目的为更客观地观察胚胎脑神经祖细胞的增殖、分化和迁移,建立胚胎脑片免疫荧光组织化学双重漂染技术。方法灌流固定,取胚胎14天(E14)大鼠脑,低熔点琼脂糖包埋,振动切片机连续冠状切片,免疫荧光组织化学双重漂染,激光扫描共聚焦显微镜下观察。结果波形蛋白(Vimentin)和乙酰胆碱转移酶(ChAT)双阳性细胞呈黄色荧光,胞体位于脑室区,长突起呈放射状。ChAT阳性细胞呈红色荧光,除胞体位于脑室区,长突起呈放射状伸展外,可见皮层板区也有阳性细胞集聚。结论此项技术可直接观察到胚胎脑神经祖细胞和成神经细胞的完整形态,并通过免疫荧光组织化学方法鉴定其表型,从而阐明相互之间的关系。

人体内耳冰冻切片免疫组织化学染色技术探讨

目的通过对人内耳冰冻切片免疫组织化学染色制作过程中防脱片和抗原修复方法的探讨,寻找获得满意染色效果的最佳技术方法。方法取无已知耳科疾病的尸检颞骨标本,经取材、固定、脱钙、脱水、包埋后,行冰冻切片,-20℃冷冻保存。染色前的防脱片处理分为Ⅰ组(后固定组)、Ⅱ组(烤片组)和Ⅲ组(后固定联合烤片组)。处理后,每组再行抗原修复,分别分为A组(热修复组)、B组(酶消化组)和C组(Triton组)。应用间接荧光免疫组织化学技术检测WARP、NF200、CD68及IBA1这4种抗体在各组中的表达,激光共聚焦显微镜下观察,并对其脱片情况进行结果分析。结果在防脱片处理的3组中,Ⅲ组(后固定联合烤片组)的防脱片效果最佳,基本无脱片现象。抗原修复的3组中,A组和C组的抗原修复作用较为满意,B组修复作用不佳,且对组织的细胞结构产生了破坏作用。结论应用后固定联合烤片法防止脱片和应用热修复或Triton进行抗原修复在本研究中取得了良好的效果,适当的防脱片处理和抗原修复方法对提高内耳冰冻切片免疫组织化学染色的敏感性和制片质量起着至关重要的作用。

大白鼠心脏心房肽免疫荧光组织化学研究

心房肽是从心房组织中提取、分离、纯化的一类活性肽,它具有利尿、利钠等作用。我们利用免疫荧光组织化学方法,观察了大白鼠心脏壁内心房肽免疫荧光物质的定位和分布。注意到心房肽免疫荧光物质,广泛存在于心房肌细胞内,以核周肌浆部为丰富,亦可见于肌原纤维之间或肌膜下.

EgM9蛋白免疫犬肠系膜淋巴结中抗体的免疫荧光组织化学定位

以EgM蛋白免疫犬、EgM蛋白免疫后感染原头蚴犬及感染原头蚴犬3个组的肠系膜淋巴结为材料,用FITC标记羊抗犬IgG和羊抗兔IgG,分别采用一步法和三步法免疫荧光技术检测EgM蛋白免疫犬肠系膜淋巴结上的IgG和特异性IgG。结果显示,EgM蛋白免疫犬、EgM蛋白免疫后感染原头蚴犬的肠系膜淋巴结组织有清楚可见的荧光点,而感染原头蚴犬的肠系膜淋巴结荧光较弱。两种方法均证明,EgM蛋白免疫犬后在其肠系膜淋巴结中可以产生特异性抗体。

NF1基因表达产物在大鼠脑的分布-免疫荧光组化法

用免疫荧光组织化学方法观察了 NF1基因表达产物神经纤维素在正常成年大鼠脑中的分布 ,结果如下 :(1)大脑皮质中神经纤维素阳性细胞最为密集 ;其次 ,在海马结构、丘脑前核群、丘脑内侧核群、丘脑板内核群、丘脑中线核群及下丘脑室周核、室旁核中神经纤维素阳性细胞也较密集 ;在杏仁核、下丘脑前区、下丘脑外侧区、下丘脑后区以及隔外侧核、隔内侧核、尾壳核、屏状核、苍白球、三叉神经脊束核等部位 ,也可见到数量不等的神经纤维素阳性细胞稀疏分布。 (2 )神经纤维素免疫阳性反应产物除了分布于神经细胞胞质外 ,在细胞核也有分布。 (3 )结合抗星形胶质细胞特异性酶 (胶质纤维酸性蛋白 )免疫组化反应 。

卵泡刺激素及其受体在大鼠肝的免疫荧光定位

目的：观察卵泡刺激素（FSH）及其受体（FSHR）在大鼠肝中免疫组织化学定位,为FSH能否参与肝代谢功能的调节提供形态学依据.方法：应用免疫荧光组织化学显色,在激光扫描共焦显微镜下观察FSH在大鼠肝脏中的分布结果.结果：FSH和FSHR免疫反应阳性物质分布在大鼠肝细胞的细胞质,不同部位的肝细胞FSH及其受体免疫反应强度存在差别.结论：FSH及其受体存在于大鼠肝部分细胞中,不同部位的肝细胞对FSH受体表达水平存在差异.肝中的部分细胞共同存在FSH及其受体,FSH可能通过旁分泌或自分泌的途径对肝功能起调节作用.

免疫荧光双标对肝细胞癌及癌旁异型增生肝细胞Ki-67与AMACR和RAS表达的定位分析

目的对肝细胞癌(hepato celluar carcinoma,HCC)及其癌旁异型增生肝细胞Ki-67与α-甲酰基-辅酶A消旋酶(alpha-methylacyl-coenzyme A racemase,AMACR)和RAS表达进行定位分析,探讨AMACR的表达在HCC发生中的意义。方法 90例人HCC、90例癌旁肝组织制作组织芯片,以20例正常肝组织对照。用免疫荧光双标法,通过激光共聚焦显微镜,分析AMACR在肝细胞癌和癌旁异型增生肝细胞的表达与Ki-67、癌基因蛋白RAS表达的原位定位关系。结果 HCC组织中AMACR的表达显著高于癌旁肝组织,而且在HCC组织中AMACR的表达多呈弥漫性分布;HCC组织中显示Ki-67标记指数比癌旁组织高。结论 AMACR可能参与RAS信号在肝细胞异型增生和HCC早期发生的信号机制。

大鼠限制性体位窒息模型中膈肌Fn和HSP70的免疫荧光组化观察

目的观察Fn和HSP70在限制性体位窒息死亡的大鼠膈肌中的表达情况,进一步探讨限制性体位窒息死亡的机理。方法分组建立限制性体位窒息死亡大鼠模型,采用免疫荧光组织化学方法研究大鼠膈肌的Fn和HSP70的表达情况,并将荧光照片进行灰度值分析,比较抗原在不同组别间的表达差异。结果在Fn检测中,限制性体位窒息死亡组大鼠的膈肌肌内膜上有明亮荧光,肌纤维间隙的荧光强度明显大于对照组。在HSP70检测中,肌纤维内的荧光强度随着体位性限制程度的加重而明显增加。结论采用免疫荧光组织化学检测膈肌Fn和HSP70抗原的表达,对判断限制性体位窒息死亡者膈肌的损伤是一种有意义的手段。

化学发光免疫分析技术和量子点免疫荧光组织化学检测新型冠状病毒特异性抗体及其应用评价

目的分别采用化学发光免疫分析技术(chemiluminescence immunoassay,CLIA)和量子点免疫荧光组织化学(quantum dot-based immunohistochemistry,QD-IHC)检测新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)特异性抗体免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)和免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG),比较并探讨其在新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)诊断、预防及控制中的应用价值。方法对234例COVID-19确诊、疑似和排除组患者分别用CLIA和QD-IHC法进行抗体检测,并进行统计分析。结果(1)两种方法检测SARS-CoV-2抗体在COVID-19患者中灵敏度、特异度和准确度较高,能满足临床需要。与核酸检测相比较,两种方法的一致性高。(2)SARS-CoV-2抗体与COVID-19的严重程度有一定的相关性。(3)间断观察9例确诊组患者发现,1例SARS-CoV-2抗体于发病100天内转阴;3例患者于100~180天内转阴。结论抗体检测能提高COVID-19患者的确诊率,适合作为COVID-19的初筛及疑似病例的辅助诊断,对于疾病的严重程度、转归、流行病学调查和疫苗应用的有效周期具有重要意义,CLIA优于QD-IHC法。

食管鳞癌组织中TRIM28和p16的表达与临床病理因素的关系

目的研究三结构域蛋白家族28(TRIM 28)和p16基因在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达情况,并观察二者与患者临床病理因素的相关性。方法选取河北北方学院附属第一医院手术切除的ESCC患者肿瘤组织136例,并选取37例距肿瘤边缘5 cm以上的正常食管黏膜组织,用免疫组化SP法及对各个组织中TRIM28、p16蛋白的表达情况进行检测,并采用免疫荧光染色定位二者在ESCC中的表达部分,依据结果对它们与ESCC患者临床病理特征的相关性进行探究。结果 (1)TRIM28与p16在ESCC组织中的阳性率分别为91.2%(124/136)、32.4%(44/136),在正常食管黏膜组织中的阳性率分别为24%(9/37)、57%(21/37),差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)免疫荧光染色显示二者均主要定位于ESCC癌细胞的胞核中。(3)二者的表达情况均与ESCC的TNM分期、浸润程度、淋巴结转移相关。(4)TRIM28与p16在ESCC中的表达呈负相关(r=-0.284,P=0.001)。结论在ESCC发生发展过程中TRIM28及p16均可呈异常表达,协同检测二标记物可辅助ESCC诊断并指导临床治疗。

鸡和疣鼻栖鸭Ia-相关的恒定链交叉免疫原性研究

目的探索鸡和疣鼻栖鸭Ia-相关的恒定链(CIi和MDIi)的交叉免疫原性。方法用间接ELISA检测抗CIi小鼠血清与原核表达MDIi的反应性、抗MDIi小鼠血清与原核表达CIi的反应性;通过荧光免疫组织化学法鉴定抗CIi小鼠血清与疣鼻栖鸭脾组织MDIi的荧光反应强度、抗MDIi小鼠血清与鸡肝组织CIi的荧光反应强度。结果抗MDIi小鼠血清与原核表达CIi的反应滴度为1∶8000,抗CIi小鼠血清与原核表达MDIi的反应滴度为1∶16 000;采用抗MDIi小鼠血清、抗CIi小鼠血清进行免疫荧光组织化学染色,均能检测异种鸟类组织内的Ii抗原,但荧光染色强度均弱于同种鸟类Ii抗原组织的荧光反应强度。结论 CIi和MDIi具有交叉免疫原性,CIi和MDIi的序列保守性是形成共同抗原表位的分子基础,从免疫学角度揭示了鸟类Ii的高度保守性。

MMP14在胰腺癌中的表达及其与肿瘤免疫微环境特征的相关性研究

目的·探究基质金属蛋白酶14(matrix metalloproteinase 14,MMP14)在胰腺癌组织中的表达及其与临床特征的相关性,并分析其与胰腺癌肿瘤免疫微环境特征的相关性。方法·通过GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)数据平台分析MMP家族成员在30种常见肿瘤组织中的表达情况。通过R语言整合GTEx(Genotype-Tissue Expression)数据库中167例胰腺正常组织和TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库中178例胰腺癌组织及4例配对癌旁组织的转录组数据,比较MMP14在胰腺癌与正常组织及癌旁组织中的表达差异。使用GEPIA数据平台对不同MMP14表达水平胰腺癌患者进行生存分析。从TCGA数据库中下载178例胰腺癌患者的相关临床信息,应用Perl和R语言分析MMP14的表达与临床特征的相关性。应用R语言和GSEA v3.0进行京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析和基因本体论(Gene Ontology,GO)功能富集分析。采用CIBERSORT反卷积算法计算胰腺癌免疫微环境中各类免疫细胞亚群比例,分析MMP14的表达与各免疫细胞亚群比例的相关性。收集6例新鲜胰腺癌组织和配对癌旁组织,流式细胞术检测各类免疫细胞亚群;通过t-SNE降维与统计学分析,描述胰腺癌免疫微环境的特征。利用胰腺癌组织芯片进行多色荧光免疫组织化学实验,检测MMP14的表达与免疫细胞亚群的比例,验证生物信息学分析结果。结果·在生物信息学数据库中,与MMP家族其他成员相比,MMP14在多种肿瘤中高表达,且胰腺癌中MMP14的表达水平高于其他肿瘤;MMP14在胰腺癌中表达水平显著高于胰腺正常组织和癌旁组织(P=0.000),TNM分期Ⅱ期肿瘤MMP14表达水平显著高于Ⅰ期(P=0.012),病理组织学分级G2和G3期肿瘤MMP14显著高于G1期(均P=0.000)。MMP14低表达组患者生存预后显著优于高表达组(P=0.033)。KEGG和GO分析结果显示MMP14主要富集在胰腺癌和免疫相关通路。MMP14的表达水平与CD8+T细胞、单核细胞的比例呈负相关(均P<0.05),与巨噬细胞的比例呈正相关(P=0.000)。流式细胞实验结果提示胰腺癌肿瘤微环境呈现免疫抑制性。多色荧光免疫组织化学实验结果显示,MMP14在肿瘤组织中表达水平显著高于癌旁组织(P=0.000),TNM分期较晚及病理组织学分级较高的肿瘤MMP14的表达水平也相对较高(均P<0.05)。在MMP14高表达的肿瘤组织中,CD8+T细胞比例降低(P=0.001),巨噬细胞比例升高(P=0.000),与生物信息学分析结果一致。结论·与正常胰腺组织和癌旁组织相比,MMP14在胰腺癌中的表达显著升高且与患者不良预后相关;MMP14高表达的胰腺癌组织中CD8+T细胞比例降低,巨噬细胞比例升高;高表达MMP14的胰腺癌肿瘤微环境呈现高度免疫抑制性。

红景天对慢性高原心脏病大鼠心肺组织中内皮抑素和血管内皮细胞生长因子受体表达的影响

目的探讨内皮抑素和VEGF受体与慢性高原心脏病发病的关系以及红景天治疗高原心脏病的机理。方法建立慢性高原心脏病大鼠模型,分为对照组、吸烟运动刺激组、拟高原心脏病组和治疗组。利用免疫荧光组织化学和半定量RT-PCR方法检测内皮抑素和VEGF受体的表达水平。结果刺激组心肺组织与对照组相比,VEGF受体表达水平升高,而内皮抑素下降。治疗组与拟高原心脏病组相比VEGF受体表达水平降低,而内皮抑素升高。结论慢性高原心脏病发病与内皮细胞损伤密切相关,红景天可以减少内皮细胞损伤。

Nogo-66受体在大鼠神经组织中的表达

目的观察Nogo-66受体(NgR)蛋白在脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经的表达。方法采用免疫荧光组织化学-激光共聚焦显微镜观察9只正常SD大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经及坐骨神经中NgR蛋白表达。结果9只大鼠脑、脊髓、视网膜、视神经切片中NgR蛋白均表达阳性,荧光染色位于神经元及其突起。9只大鼠坐骨神经切片中NgR蛋白均表达阴性。结论在大鼠中枢神经系统神经元中NgR广泛分布,而在周围神经坐骨神经则无NgR表达,提示NgR的阳性表达与中枢神经系统再生能力低下密切相关。

蛋白磷酸酶PP-1c在不同倍性鱼6种组织中的分化表达模式

以异源四倍体鲫鲤及其二倍体父/母本(湘江野鲤/红鲫)和子代三倍体湘云鲫等为实验材料,运用W estern-blotting技术及荧光免疫组织化学技术等实验手段,分析了PP-1的催化亚基在上述不同倍性鱼体内的表达模式:蛋白水平检测发现PP-1c在不同倍性鱼的大脑、心脏、肌肉、肾脏、肝脏和性腺6种主要器官组织中均有表达,且不同的组织中显示了明显的差异表达模式,而PP-1c在这4种不同鱼的肌肉组织中的表达差异更显著,其中在异源四倍体鲫鲤中表达最低,在父/母本红鲫中的表达水平相对较高,子代三倍体湘云鲫中的表达最高,这种差异性可能从生化的角度说明了子代与父母本之间的变异性。免疫荧光组化实验结果显示,从整体水平来看,4种不同鱼的同一组织中,PP-1c的表达模式是非常相似的,这可能从蛋白和细胞的水平说明了异源四倍体鲫鲤与其二倍体父/母本及子代三倍体湘云鲫之间的遗传相似性。但对于同一组织的不同细胞的具体表达部位是有差异的,具有细胞特异性。

AQP4与Kir4.1在大鼠眼内组织的共表达

目的:探讨AQP4与Kir4.1在大鼠眼内的定位分布及二者的共表达.方法:用免疫组织化学及激光扫描共聚焦显微技术检测AQP4与Kir4.1在大鼠眼内的分布.结果:免疫荧光显示,AQP4与Kir4.1在大鼠视网膜和睫状体内的分布形式相似;免疫荧光双标显示,AQP4与Kir4.1在视网膜Mller细胞及睫状突无色素上皮细胞的顶膜面及基底膜面呈重叠分布.结论:AQP4与Kir4.1在大鼠视网膜Mller细胞及睫状突无色素上皮细胞共表达,提示二者可能具有协同作用,参与房水的产生以及视网膜内水、K+运输平衡的调节.

大鼠视皮层组织型纤溶酶原激活剂、神经元周围网络与小清蛋白的发育性共表达关系及其与视皮层可塑性关键期的相关性

目的：探讨出生后的Long Evans大鼠视皮层组织型纤溶酶原激活剂（tPA）与小清蛋白（PV）、神经元周围网络（PNs）三者发育性共表达的关系及其与视皮层发育可塑性的相关性.方法：应用免疫荧光组织化学对生后3（关键期起始）、4（高峰）、5（后期）、7（终止）、9（成年）周龄的Long Evans大鼠视皮层分别进行tPA、NeuN、DAPI和tPA、PV、PNs三重标记以检测它们的表达随发育的时空关系.结果：tPA＋ PNs阳性细胞密度在4周龄显著增加达高峰,随后在9周龄显著减少,tPA＋PV和PV＋PNs阳性细胞密度在3周龄已达峰值并维持至4周龄,在5周龄显著减少至最低水平,随后显著增加至成年高水平;tPA＋PV/tPA和PV＋PNs/PNs比值在3周龄已达最大值,在5周龄显著降至最低,随后显著上升至成年水平;tPA＋ PV＋ PNs阳性细胞密度在可塑性关键期的高峰期即4周龄出现峰值.结论：PNs对PV的包绕随发育的变化可能是PNs参与关键期终止的结构基础;存在tPA＋ PV＋ PNs阳性细胞,此类神经元在可塑性高峰期富集提示它们可能与关键期可塑性的增强有关.

谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核内GFP阳性神经元的分布及与小白蛋白的共存

目的观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白（GAD67-GFP）基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核（Vc）浅层内，表达GFP的GABA能神经元的分布及其与小白蛋白（PV）的共存。方法分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合；GFP与神经元标记物——神经元核蛋白（NeuN）或PV免疫荧光染色相结合的双重标记方法，在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下进行观察。结果1．Vc浅层内90％以上的GFP阳性神经元同时表达GAD67 mRNA，而几乎所有表达GAD67 mRNA的阳性神经元都呈GFP阳性；2．GFP阳性神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层内，细胞较小，尤其在Ⅱ层内可见大量密集分布的GFP阳性细胞和突起。GFP阳性神经元分别占Ⅰ、Ⅱ层内NeuN阳性神经元总数的19．4％和24．3％；3．GFP／PV双标神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层，这些双标神经元大约占PV阳性神经元的62．4％，占GFP阳性神经元的12．8％。结论在Ｖc表达GFP的GABA能神经元主要密集分布于与外周伤害性信息传递关系密切的板层内，且大部分PV样阳性神经元属于GABA能神经元。

再次液氮冷冻保存对猪主动脉瓣膜细胞活性及组织结构的影响

目的 了解再次冷冻保存对主动脉瓣膜细胞活性及组织结构的影响 ,探讨液氮冷冻保存的主动脉瓣解冻后再次冷冻保存使用的可行性。 方法 将猪主动脉瓣叶在抗菌处理后按随机数字表法分成三组 ,每组 6个瓣叶 ,组 作对照 ,组 、组 控制降温速率降至 - 80℃后在液氮中保存 ,1个月后融化解冻。组 解冻并在室温下放置 15分钟后更换保存液 ,再次降温至 - 80℃后放入液氮中保存 ,2个月后再融化解冻。采用 XTT比色法测定各组瓣膜细胞活性 ,用免疫荧光组织化学染色、光学显微镜、透射电子显微镜行组织学检测。 结果 组 冷冻保存后瓣膜细胞活性下降到组 的 6 3.97% ,组织结构一定程度受损 ;组 瓣膜细胞活性下降至组 的 38.6 0 % ,组织结构损害也进一步加重。 结论 液氮冷冻保存的猪主动脉瓣一经解冻融化 ,不宜再次冷冻保存使用。