种子类中药材油脂过氧化值的荧光半定量检测

该文基于油脂中的过氧化物与9-十八烯基碘化胺(OAmI)发生氧化还原反应,以及OAmI中的碘离子易与铯铅溴钙钛矿纳米晶(CsPbBr3 NCs)中的溴离子发生卤素交换并引起CsPbBr3 NCs荧光发射波长及荧光颜色改变的原理,建立了一种利用荧光发射波长移动检测富含油脂的种子类中药材过氧化值(PON)的方法,并根据钙钛矿纳米晶颜色变化初步制作了荧光半定量比色卡。结果表明,对比国家标准方法,该荧光发射波长移动法检测PON的相对误差在10%左右;通过颜色变化,可快速判断中药材油脂的氧化程度,实现苦杏仁、桃仁等种子类中药材油脂氧化程度的荧光半定量检测。

用荧光半定量RT-PCR检测蚊溴氰菊酯抗性

目的:建立蚊对菊酯类杀虫剂抗性的PCR检测方法。方法:应用荧光半定量RT鄄PCR,检测经SSH结合cDNA芯片分离鉴定的淡色库蚊对溴氰菊酯抗性相关基因NYD鄄Tr在抗性品系与敏感品系中的表达水平。结果:经荧光半定量RT鄄PCR检测,NYD鄄Tr进入指数期的循环数抗性品系早于敏感品系,抗性品系组比敏感品系组先进入指数增长期。结论:以NYD鄄Tr作为靶基因,荧光半定量RT鄄PCR可区分淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系与敏感品系,亦即可检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性。

荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应检测大鼠死后肾mRNA

目的探讨荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应(fluorescencesemi-quantitativereversetranscrip-tase-polymerasechainreaction,RT-PCR)技术检测大鼠死后不同时间肾3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA含量变化对死亡时间(postmorteminterval,PMI)推断的应用价值。方法28只大鼠断颈处死后置于20℃温控系统内,利用荧光标记半定量RT-PCR技术检测大鼠肾GAPDHmRNA在死后48h内相对表达量的变化情况。结果在死后即刻至40h内大鼠肾均可检测出GAPDHmRNA,且其扩增产物呈规律性下降。结论荧光半定量RT-PCR技术检测大鼠死后肾GAPDHmRNA含量变化对PMI推断具有一定的应用价值。

荧光半定量法检测肺炎支原体DNA的临床意义

目的 探讨荧光半定量技术检测肺炎支原体DNA(MP DNA)在诊断小儿呼吸道支原体感染的临床价值。方法 运用荧光半定量PCR技术检测呼吸道感染患儿咽拭子MP DNA ,并与临床治疗和诊断结果进行相关分析。结果 对 96 8例肺部感染的住院患儿进行了咽拭子MP DNA的检测 ,30 7例 (31.7% )阳性。 185例临床诊断为支原体肺炎。临床诊断符合率为 6 0 .2 6 % ;相关分析表明 :MP DNA半定量的结果与临床诊断呈正相关 ,r =0 .98。结论 荧光半定量PCR法检测咽拭子MP DNA是一种快速、简便、易行、比较敏感的方法。且荧光半定量结果与临床诊断符合率呈正相关关系。

实时荧光半定量MSP检测肺癌组织CDH1甲基化水平实验条件的探讨

目的探讨实时荧光半定量MSP检测肺癌组织中CDH1DNA甲基化水平的最适实验条件。方法通过改变实时荧光半定量MSP反应条件,探讨MSP反应体系最适浓度和反应条件。结果检测CDH1DNA甲基化实时荧光半定量MSP反应体系为dATP,dCTP和dGTP200μmol/L,dUTP400μmol/L,MgCl23.0mmol/L,引物600nmol/L,热启动TaqDNA聚合酶0.04U/μl,模板3μl,DMSO2.5,1×SYBGREEN染料,1×反应缓冲液,总体系25μl。反应条件为95℃预变性12min,95℃15s、退火温度1min(其中62℃2个循环、60℃3个循环和58℃45个循环)、69℃10s,循环次数50。结论改进和建立了CDH1DNA甲基化水平的相对定量检测方法。

刍议活动性肺结核早期检验中半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法的应用研究

目的评估半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的应用效能。方法选取2022年9月—2023年9月于平邑县结核病防治所就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象,采用Xpert MTB/RIF技术、涂片抗酸染色法检验及简单法固体培养法同时检测90例疑似肺结核患者痰标本,对检测结果进行比较。结果以固体培养结果作为金标准,痰培养阳性率85.56%,阴性率14.44%。Xpert MTB/RIF阳性率84.44%、阴性率15.56%。涂片抗酸染色法检验阳性率48.88%、阴性率51.11%。Xpert MTB/RIF检验的灵敏度97.40%、准确度96.67%、阳性预测值98.68%以及阴性预测值85.71%均高于涂片抗酸染色法检验50.64%、52.22%、88.64%、17.39%,差异有统计学意义(χ^(2)=43.768、46.722、5.922、22.546,P均<0.05)。结论与涂片抗酸染色法相比,在活动性肺结核早期检验中采用半巢式全自动实时荧光定量PCR检测(Xpert MTB/RIF)的应用效能更高。

番茄环斑病毒半巢式荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为准确高效地检测出植物样品中的番茄环斑病毒,提高检疫效率,本研究结合了巢式PCR技术和实时荧光定量PCR技术,根据番茄环斑病毒外壳蛋白基因保守区序列设计了3条特异性引物和一条TaqMan探针,成功建立了半巢式荧光定量RT-PCR检测番茄环斑病毒的方法。该方法通过两轮实时荧光PCR扩增发现只有在番茄环斑病毒侵染的植物样品中出现荧光扩增曲线,而感染TRSV、SBMV、TSWV、PDV、BPMV的植物样品和健康叶片的c DNA及对照ddH2O未检测到荧光信号,表明该方法具有良好的特异性。根据梯度稀释法测得荧光扩增信号的最低浓度为498 ag/μL植物总RNA,说明该方法灵敏度较高,且重复性良好。两套引物探针的扩增效率对比试验结果表明第一套引物探针扩增效率小于第二套引物探针扩增效率。本研究建立的半巢式荧光定量RT-PCR检测番茄环斑病毒的方法具有特异性强、灵敏度高等特点,通过两轮实时荧光PCR检测相互验证,大大降低了假阳性结果的出现,是一种准确高效的检测方法。

荧光斑点试剂的两种方法测定干血斑G6PD活性的结果分析

目的探索通过上机用半定量荧光法代替定性的荧光斑点法,以测定新生儿筛查滤纸干血斑标本葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活性。方法按照《新生儿疾病筛查技术规范》的要求采集和保存滤纸干血斑标本,并于当天分别用定性的荧光斑点法和上机半定量荧光法测定G6PD活性,并采用我中心对G6PD的确诊方法进行验证。分别计算出两种方法的阳性预测值、阴性预测值、特异性和灵敏度以及粗一致率。结果本实验共测定278份滤纸干血斑标本,用荧光斑点法进行测定并统计得到其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:97.97%、96.62%、98.48%、95.56%;用半定量法进行测定,统计得到其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:97.04%、95.24%、98.01%、93.02%。两者比较,灵敏度都达到97%以上,特异度达95%以上,粗一致率达97.16%。结论用半定量荧光法检测滤纸为干血斑G6PD活性提供了新的检测方法,更有利于大批量的筛查标本检测工作。

非小细胞肺癌端粒酶催化亚单位的表达及其与c-myc基因的相关性

目的 研究端粒酶催化亚单位 (hTERT)在非小细胞肺癌的表达及其与c -myc基因的相关性 ,并探讨肺癌hTERT激活的可能调节机制。方法 应用荧光半定量逆转录聚合酶链反应方法 (RT -PCR)检测非小细胞肺癌组织hTERT及c-mycmRNA表达水平 ,对两者进行统计学相关分析。结果 5 1例非小细胞肺癌hTERT表达阳性率为 86 .3% ,明显高于癌旁正常肺组织和良性病变组织 (分别为 14 .3%和 2 7.3% )。hTERT的表达和肿瘤组织病理类型、分化程度、临床分期、肿块大小及淋巴结转移指标间未见明显相关性。相关分析显示hTERT与c-mycmRNA表达存在显著相关性 ,相关系数r =0 .6 33(P <0 .0 0 1)。结论hTERT对肺癌诊断具有潜在临床价值 ,hTERT的表达与c -myc表达存在显著相关性 ,进一步支持c -myc的过度表达可能是肺癌端粒酶激活和调节的机制之一。

痰液标本不同检测方法对结核杆菌检测比较

目的比较不同检测方法检测痰液标本结核分支杆菌的检测效果,为检测方法的选择提供参考。方法 60份拟诊为肺结核患者的痰液标本分别用涂片抗酸染色法、结核分支杆菌培养法和荧光定量法(RT-PCR)检测,分析三种检测方法的检出率、检测时间及检测成本。结果 RT-PCR检出率为95.0%,菌培养法检出率为70.0%,染色法检出率为55.0%。RT-PCR检出率高于菌培养法及染色法;菌培养法检出率高于染色法,染色法检出时间低于菌培养法及RT-PCR法,且检测成本低于菌培养法及RT-PCR法;RT-PCR法检出时间低于菌培养法,但检出成本高于菌培养法。结论不同的检测方法痰液结核分支杆菌的检测效果存在差异,应依据临床用途选择应用。

CDH1基因甲基化水平与肺癌的相关性研究

目的探讨CDH1(cadherin 1)基因甲基化水平与肺癌及其病理类型之间的相关性.方法应用半定量荧光MSP检测50例肺癌患者的癌、癌旁和远癌肺组织及5例非肺癌对照肺组织标本中的CDH1甲基化的相对比值,并用免疫组化方法对部分结果进行验证.结果肺癌组织、癌旁组织、远癌组织以及非肺癌对照肺组织CDH1甲基化相对比值的中位数分别为0.272、0.227、0.119和0.000.癌组织和癌旁组织(P<0.05)、癌组织和远癌组织(P<0.05)、远癌组织和非肺癌对照肺组织(P<0.05)的CDH1启动子甲基化水平的差异均有统计学意义(P<0.05);癌组织、癌旁组织和远癌组织中的鳞癌、腺癌及腺鳞癌CDH1基因甲基化相对比值之间的差异均无统计学意义(P>0.05).免疫组化结果与半定量荧光MSP检测结果符合.结论CDH1基因甲基化水平与肺癌具有相关性,与肺癌的组织类型无相关性.CDH1异常甲基化和E-cad表达的减弱和缺失可能是肺癌发生和发展过程中的重要因素.

控制性超排卵明显降低小鼠卵母细胞水通道蛋白的表达

目的了解控制性超排卵(COH)对小鼠卵母细胞上表达水通道蛋白(AQP3)的影响。方法模拟人类超排卵周期,对小鼠进行超促排卵,按随机表顺序分为COH组和对照组,每组各10只ICR小鼠,用半定量实时荧光PCR方法检测小鼠MⅡ卵母细胞上AQP3mRNA的表达。结果卵母细胞膨胀实验显示,ICR小鼠卵母细胞上有AQP3的表达,用半定量实时荧光PCR方法检测时以β-肌动蛋白(β-actin)作为内参照,COH组和对照组ΔCT值分别是0·65±0·23和2·49±0·05,ΔΔCT值是1·84±0·18,两组比较P<0·001,具有统计学意义。结论控制性超排卵(COH)明显降低了ICR小鼠卵母细胞上AQP3mRNA的表达,这也可能是导致卵母细胞低冻融复苏率低的原因之一。

比较单独消化法及分步消化法培养新生大鼠原代软骨细胞的生物学特性

背景:原代软骨细胞体外培养是研究骨骼生长的重要方法之一。目前原代软骨细胞的分离方法主要有单独消化法和分步消化法,但两种方法对软骨细胞生物学性能的影响尚不清楚。目的:比较两种方法对新生大鼠软骨细胞生物学性能的影响,为软骨发育的程序化研究提供实验基础。方法:无菌条件下取出新生SD大鼠关节软骨,分别采用Ⅱ型胶原蛋白酶单独消化法、胰蛋白酶和Ⅱ型胶原蛋白酶分步消化法分离软骨细胞,并进行体外培养。光学显微镜下观察软骨细的形态,CCK-8法检测软骨细胞的增殖活性,半定量免疫荧光分析软骨细胞的Ⅱ型胶原蛋白表达。结果与结论:(1)单独消化法和分步消化法都可以得到大量软骨细胞,但分步消化法较单独消化法所得软骨细胞的纯度更高;(2)光学显微镜下观察,两种方法消化所得细胞在形态学上无明显差异;(3)单独消化法所得细胞生长速度更快;(4)免疫荧光半定量分析显示两种方法所得软骨细胞Ⅱ型胶原蛋白表达一致;(5)以上结果表明,分步消化法更适于新生大鼠原代软骨细胞的分离培养。

宏基因组二代测序在结核性胸膜炎中的诊断价值

目前结核病疫情仍未得到有效控制,其中印度、印度尼西亚、中国是新发结核最多的3个国家[1],约1/3的结核杆菌感染表现为结核性胸膜炎[2]。我国结核性胸膜炎引起的胸腔积液约占胸腔积液所有类型的45%~55%[3]。结核性胸膜炎确诊主要依赖胸膜或胸腔积液病原学检查结果和病理表现[4⁃5],胸腔穿刺及胸腔镜下病理活检阳性率分别为54%~63%和66%[6],但临床实践中胸膜活检操作难度大、对医师及设备要求高,限制了胸膜活检的应用。而由于胸腔积液的少菌性,病原学检查结果常为阴性,阳性率仅为15%~46%[7],且耗时长。目前临床诊断主要综合临床表现和胸腔积液细胞学及生化检查结果,本文就结核性胸膜炎患者的临床资料进行前瞻性分析,探索宏基因组二代测序(mNGS)在结核性胸膜炎中的诊断价值。

超声造影引导下粗针活检联合XpertMTB/RIF检测在周围型肺结核诊断中的应用价值

目的:评估超声造影引导下粗针活检联合半巢式全自动实时荧光定量核酸扩增检测技术(XpertMTB/RIF)在周围型肺结核诊断中的应用价值。方法:回顾性分析2016年6月至2018年6月浙江省中西医结合医院结核科疑似周围型肺结核的71例住院患者,所有患者肺部肿块均经超声造影引导下穿刺活检,穿刺组织标本分别进行常规病理检查、XpertMTB/RIF检测及结核分枝杆菌(MTB)培养,以“肺结核诊断和治疗指南”为诊断金标准,比较3种检测方法诊断周围型肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确性。并计算受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC),采用t检验比较3种诊断方法的诊断效能差异。以药敏试验为诊断结核标准,评估XpertMTB/RIF方法检验利福平耐药的准确性。结果:71例患者诊断为周围型肺结核40例(结核组),非周围型肺结核患者31例(非结核组)。非结核组包括肺部恶性肿瘤10例,肺部良性肿瘤1例,间质性肺炎14例,胞内分枝杆菌肺炎3例,真菌性肺炎3例。常规病理、XpertMTB/RIF检测及MTB培养3种检测方法的诊断敏感度分别为80.0%、92.5%、12.5%,特异度分别为90.3%、100%、100%,阳性预测值分别为91.4%、100%、100%,阴性预测值分别为77.8%、91.2%、47.0%,准确性分别为84.5%、95.8%、50.7%。XpertMTB/RIF的诊断敏感度高于常规病理检查及MTB培养,差异具有统计学意义(χ2=33.632、5.976,P均<0.05)。ROC曲线分析显示常规病理、XpertMTB/RIF检测及MTB培养3种检查方法AUC分别为0.814、0.963、0.563,XpertMTB/RIF的诊断效能优于常规病理检查及MTB培养,AUC比较,差异具有统计学意义(t=7.579、2.303,P均<0.05)。结论:超声造影引导下粗针活检联合XpertMTB/RIF检测技术能快速、准确地对周围型肺结核进行诊断,相对于常规病理检查、MTB培养具有较高的诊断效能。