荧光原位杂交技术在植物细胞遗传学和绘制基因图谱中的应用现状与展望

荧光原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法。其探针主要有染色体重复序列、总基因组 DNA、寡单拷贝序列和染色体涂色集中等 ,该技术在研究植物细胞遗传学、基因扩增、基因作图及植物进化和亲缘关系的鉴定上已广泛应用。

联合应用染色体G显带和间期荧光原位杂交技术检测急性早幼粒细胞白血病

目的 联合染色体G显带和间期荧光原位杂交技术 (interphasefluorescenceinsituhybridization ,I -FISH)对急性早幼粒细胞白血病 (acutepromyelocyticleukemia ,APL)患者进行早期诊断和治疗后微小残留病的监测 ,同时对两种方法的灵敏度进行比较。方法 应用染色体G显带技术和I -FISH对 2 0例APL患者进行遗传学检测 ,包括 13例初诊患者和 8例治疗后获完全缓解的患者 (其中有初诊中的 1例 )。结果 ① 13例初诊病例中 ,9例染色体G显带检测t( 15 ;17)阳性 ,2例阴性 ,2例因分裂相缺乏无法分析结果 ,阳性检出率为 9/13 ( 69 2 %) ;I -FISH检测PML/RARa融合基因 13例为阳性 ,阳性检出率为 13 /13 ( 10 0 %) ,细胞阳性率为 76%～ 10 0 %,平均 91 3 %。② 8例治疗后血液学获完全缓解病例 ,染色体G显带后核型分析 6例正常 ,2例无分裂相可供分析 ;I -FISH检测 7例均为阴性 ,1例阳性。结论 联合运用染色体G显带和I

免疫组织化学法双色银染原位杂交与荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER-2基因状态的应用

目的:比较免疫组织化学法(IHC)、双色银染原位杂交(DISH)、荧光原位杂交技术(FISH)对乳腺癌HER-2基因状态的应用效果。方法:回顾性的选取2017年1月至2019年12月我院收治的180例乳腺癌患者作为研究对象,均为女性、单侧,取组织标本行IHC、DISH、FISH检查HER-2。结果:180例患者中各检测方式对HER-2基因的检查效果:IHC检查HER-2表达阴性118例、HER-2表达阳性49例,可疑阳性13例;DISH检查HER-2基因扩增56例、无扩增107例、不确定17例;FISH检查HER-2扩增54例、无扩增107例、不确定19例。各检测方式比较:DISH与IHC检查HER-2基因的Kappa值为0.788,一致性较好;FISH与IHC检查HER-2基因的Kappa值为0.784,一致性较好;DISH与FISH检查HER-2基因的Kappa值为0.939,一致性高。结论:IHC、DISH、FISH均可对乳腺癌患者的HER-2基因状态行评估,可以IHC作为筛查手段,若医疗资源许可应当结合DISH检查结果制定治疗方案。

应用双色荧光原位杂交技术检测克氏综合征

探讨用双色荧光原位杂交技术(dual colorfluorescenceinsituhybridization,D FISH)检测性染色体数目异常克氏综合征的应用价值,建立常规分裂期染色体和间期细胞FISH技术的实验方法。以Biotin标记的X染色体α 卫星DNA(pBamX7)探针和以Digoxigenin标记的Y染色体长臂末端重复序列(pY3.4)探针对19例克氏综合征标本同时进行外周血染色体及其间期细胞核的原位杂交,分别用Avidin FITC和Rhodamine FITC及其Anti avidin进行信号的检测与放大,DAPI复染。于OlympusAX 70型荧光显微镜下,分别通过WIB、WIG及其WU滤光镜观察杂交信号及其染色体或间期核背景,并统计外周血中期染色体及其间期细胞核的杂交信号颗粒数量。在显微镜下可见以Biotin标记的pBamX7探针显示2个绿色杂交信号,以Digoxigenin标记的pY3.4探针显示1个红色杂交信号,染色体或间期核背景经DAPI复染显示蓝色;18例出现XXY杂交信号的细胞,染色体及其间期细胞核杂交平均出现率分别为95.89%和95%,明显大于正常对照标准值2.75%,证实核型为47,XXY,与染色体检测的结果一致;其余1例染色体核型检测为嵌合体,XXY杂交信号细胞出现率为92%,同时检出6.7%的XY杂交信号细胞(>正常对照标准值4.17%)。用FISH技术检测性染色体数目异常克氏综合征具有快速、敏感度高、信号强、

荧光原位杂交技术在环境微生物生态学解析中的应用研究

近年来 ,诸多国家在环境微生物领域先后开展了分子生物学研究方法的建立和生物学评价工作。一些不依靠纯培养的微生物群落的分析方法已得到广泛应用和发展。荧光原位杂交 (FISH)技术 ,具有细胞在测定过程中不被破坏、形状不改变、特异性强、能够真实反映在自然环境下微生物的情况及分布等特点 ,在环境微生物群落探测分析中已逐渐被广泛应用。该技术利用带有荧光标记的特异性寡核苷酸探针 ,与细胞内相应的靶核糖体结合 ,能将微生物探测、鉴定到属和种的水平。运用于硝化细菌、除磷细菌和丝状微生物等废水处理中常见的特征性微生物种群和群落生态学研究中 ,颇为高效。该技术的应用避免了传统培养方法进行鉴定和计数的局限性 ,在环境微生物生态学解析中具有较高应用价值。

间期荧光原位杂交技术(FISH)在急性淋巴细胞性白血病(ALL)8号染色体三体检测中的应用

目的 探讨间期荧光原位杂交 (FISH)技术对于ALL三体 8检测的价值。方法 采用荧光素SpectrumRed直接标记 8号染色体着丝粒探针 ,检测了 5 9例ALL病例和 8例正常对照组骨髓细胞 ,并与细胞遗传学 (CG)结果相比较。结果 5 9例ALL病例中 ,8例FISH检测为三体 8阳性 ;CC检测仅 3例为阳性。结论 间期FISH对ALL三体 8检测有重要意义 ,是CG的重要补充。

急性早幼粒细胞白血病染色体易位联合R显带和间期荧光原位杂交技术分析

目的探讨荧光原位杂交(FISH)及常规细胞遗传学染色体核型分析技术对急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARa融合基因检测的灵敏度和特异度及其在临床中应用价值。方法选取51例APL患者,应用常规细胞遗传学染色体核型分析方法及FISH技术检测患者PML/RARa融合基因的表达情况。结果在进行常规染色体核型分析的51例患者中41例(80.4%)为t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常,其中38例(74.5%)为单纯t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常,3例(5.9%)为伴t(15;17)(q22;q21)易位的复杂核型异常;10例(19.6%)无t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常中1例(2.0%)为不伴t(15;17)(q22;q21)易位的复杂核型异常,1例(2.0%)为t(11;17)(q13;q21)易位的核型异常,3例(5.9%)为正常核型,5例(9.8%)未见分裂相。在进行FISH检测的51例患者标本中48例(94.1%)有PML/RARa融合基因异常,同时进行常规染色体核型分析和FISH检测的41例患者同时存在t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常和PML/RARa融合基因异常,两者符合率为100%;在15例正常骨髓标本的FISH检测中15例标本结果均未发现有PML/RARa融合基因,提示FISH检测技术具有较高的敏感度和特异性。结论对于初发的APL患者,常规染色体核型分析和间期荧光杂交技术结合分析APL患者细胞遗传学特征是诊断该病的有力工具,FISH技术操作更为简单,省时直观。

免疫组织化学法与荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER-2状态一致性的对比研究

目的对比研究免疫组织化学法(IHC)与荧光原位杂交技术(FISH)检测乳腺癌人类表皮生长因子受体2(HER-2)蛋白表达和基因状态的一致性,并评价其临床意义。方法采用IHC法及FISH法分别检测1 032例乳腺癌患者术后石蜡包埋标本的HER-2蛋白表达和HER-2基因状态,并进行对比分析。结果 1 032例乳腺癌患者术后石蜡包埋标本,用IHC检测HER-2蛋白表达阳性者373例,占36.1%(373/1 032);表达阴性者659例,占63.9%(659/1 032)。FISH检测HER-2基因扩增325例,占31.5%(325/1 032);基因非扩增707例,占68.5%(707/1 032)。373例HER-2蛋白为阳性的患者中,HER-2基因扩增293例,符合率为78.6%(293/373);659例HER-2蛋白为阴性的患者中,HER-2基因非扩增627例,符合率为95.1%(627/659)。2种方法检测结果比较一致性较好(Kappa=0.758 1,P<0.000 1)。结论 IHC检测乳腺癌HER-2蛋白与FISH检测HER-2基因结果一致性较高。

荧光原位杂交技术在先天性心脏病产前诊断中的应用

目的探讨采用荧光原位杂交技术(FISH)检查法对先天性心脏病胎儿进行染色体22q11微缺失产前诊断的临床应用。方法应用常规染色体核型分析及FISH检查法,对2012年3月至2014年10月中山市博爱医院收治的52例疑似妊娠22q11微缺失胎儿的孕妇进行产前22q11微缺失检查并跟踪随访。结果所有胎儿染色体核型分析均无异常,FISH检查结果显示3例呈阳性。结论染色体核型分析无法检测22q11微缺失综合征,因此对有22q11微缺失先天性心脏病风险的胎儿产前诊断应用FISH检查法,可提高检测的准确性。

应用荧光原位杂交技术动态观察急性早幼粒细胞白血病患者PML-RARα融合基因的变化

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术在急性早幼粒细胞白血病(APL)诊断及疗效判断中的作用。方法:对初发的急性白血病患者行常规形态学、细胞化学染色,并采用FISH技术检测PMLRARα融合基因,流式细胞术分析白血病细胞的免疫表型,对治疗过程中患者PMLRARα融合基因阳性细胞比例进行动态观察。结果:FISH对标准的PML-RARα融合基因的检出与形态学和临床符合率为100%,对流式细胞学免疫表型不符合的APL诊断的1例作出了明确诊断,对累及17号染色体的附加染色体异常也有一定的提示作用,对APL治疗过程中分子生物学缓解的判断非常直观。结论:FISH技术检测PMLRARα融合基因,实验方法简便、快速、直观和准确,具备了用以确定白血病类型,指导临床治疗和进行治疗后的疗效监测的作用。

应用荧光原位杂交技术分析乳糖不耐受者结肠菌群

目的 : 探讨结肠菌群构成与乳糖不耐受 (lactose intolerance,LI)症状之间的关系 ,以及饮奶对结肠双歧杆菌数量的影响。方法 : 根据乳糖负荷试验 ,结合问卷调查筛选成人乳糖吸收不良者、轻度及重度乳糖不耐受者作为试验对象。收集受试者一次新鲜全便 ,选用 5种特异性的 1 6S r RNA寡核苷酸探针 ,应用荧光原位杂交技术检测结肠细菌总数以及几种主要菌属 (种 )的构成。结果 : 乳糖不耐受组与吸收不良组相比 ,细菌总数和双歧杆菌数有显著性差异 (P<0 .0 5) ,细菌总数与乳糖不耐受症状评分之间呈负相关 (P<0 .0 5) ;每次饮奶以平均 2 0 0 ml计 5～ 7次 / w饮奶组与 0～ 2次 / w饮奶组或 0次 / w饮奶组相比 ,双歧杆菌数量显著增高 (P<0 .0 5)。结论 : 结肠细菌总数和双歧杆菌数可能与 LI症状的产生有关 ,同时饮奶习惯可能对双歧杆菌数量有潜在影响。

荧光原位杂交技术在上尿路肿瘤诊断中的应用

目的评价荧光原位杂交技术(FISH)在上尿路肿瘤诊断中的应用价值。方法采用FISH技术检测20例正常人的3、7、17号染色体及9号染色体p16位点的变异情况,建立阈值。15例上尿路肿瘤患者及7例对照组患者留取晨尿,分别进行尿脱落细胞学检查和FISH检测。以至少两种探针检测结果超过阈值或一种探针检测结果存在至少两种异常为阳性。结果15例上尿路肿瘤患者中14例FISH检测阳性,而尿脱落细胞学检查仅2例阳性。对照组7例中6例FISH检测阴性,尿脱落细胞学检查均阴性。结论FISH对上尿路肿瘤的诊断效果优于尿脱落细胞学检查。

纯培养微生物荧光原位杂交技术检测的影响因素探究

为了研究纯培养微生物荧光原位杂交技术(FISH)检测的影响因素,该实验以大肠杆菌(Escherichia coli)及植物乳杆菌(Lactobacillus planetarium)为研究对象,研究不同种属、不同生长期菌株、菌体预处理方式及杂交条件对基于探针EUB338的FISH检测结果的影响。结果表明,菌体种类及菌体生长阶段均较明显影响FISH计数的准确性;确定超声分散菌体时间60 s(100 W、每30 s间歇)、溶菌酶处理60 min可较大幅度提高FISH对菌体的检出率;杂交时间和洗脱液中NaCl浓度对FISH检测结果影响小,杂交温度、杂交液中甲酰胺浓度对大肠杆菌影响小而对植物乳杆菌有一定影响。

荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤染色体

目的研究荧光原位杂交技术(FISH)在多发性骨髓瘤(MM)染色体异常检测中的应用价值。方法选取从2012年1月至2014年1月该院收治的初治MM患者24例,同时采用常规G显带技术与FISH技术进行检测,比较两种检测方法的阳性检出率,分析染色体异常与MM的免疫学分型、临床分期与预后的相关性。结果常规G显带技术的染色体异常检出率比FISH检出率低(P<0.01);常规G显带技术仅检出1例染色体异常者,MM患者的染色体异常以Ⅲ期和Ig G型为主。结论 FISH技术的染色体异常检出率与特异性较高,临床分期、分型与染色体异常存在相关性,Ⅲ期和Ig G型患者出现染色体异常的可能性更高。

荧光原位杂交技术在膀胱肿瘤诊断中的应用

目的:评价荧光原位杂交技术(FISH)在膀胱肿瘤诊断中的应用价值。方法:20例正常人通过FISH技术检测9号染色体P16位点、3号染色体、7号染色体及17号染色体的变异情况,建立阈值。20例血尿患者留取晨尿,分别进行尿脱落细胞学检查和FISH检查。以至少两种探针检测结果超过阈值或一种探针检测结果至少存在两种异常为诊断阳性。结果:20例血尿患者除1例为泌尿系结石、1例为BPH外,病理检查证实的18例膀胱肿瘤患者中,FISH检出16例,尿脱落细胞学检出4例。结论:FISH无创快速,检出率高,在膀胱肿痛早期诊断中优于尿脱落细胞学检查方法。

超声波对荧光原位杂交技术检测氨氧化菌的影响

介绍了荧光原位杂交技术的基本原理和操作步骤。在采用荧光原位杂交技术检测氨氧化菌时必须经过预处理,而超声波对细胞的破碎是预处理中的关键步骤。试验通过比较预处理中超声波的三个强度对荧光原位杂交技术检测SBR反应器中氨氧化菌的效果,筛选出最佳的细胞破碎强度。结果显示,经过强度为150W超声破碎后,在荧光显微镜下观察,无论是丰度还是亮度方面,效果均比经过强度为100W或200W破碎后的好。

荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因的临床应用

本研究探讨应用荧光原位杂交技术(FISH)检测BCR/ABL融合基因在临床中的应用价值。对初诊考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者、急性淋巴细胞白血病患者及异基因造血干细胞移植后的慢性髓系白血病(CML)患者,行骨髓细胞学检查并用FISH法检测BCR/ABL融合基因。结果表明:①46例在初诊时考虑为慢性骨髓增殖性疾病或骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的患者中,有22例患者诊断为CML,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阳性(100%),骨髓细胞学检查显示CML者占86.4%(19/22);另24例患者诊断为非CML的慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病,FISH法检测BCR/ABL融合基因均为阴性(100%),而骨髓细胞学检查有3例支持CML诊断、1例支持MDS诊断;②7例急性淋巴细胞白血病患者,有3例FISH法检测BCR/ABL融合基因为阳性;③2例异基因造血干细胞移植后的CML患者,应用FISH法检测BCR/ABL融合基因可检测到阳性细胞(分别为6.5%及1.2%)。结论:FISH法检测BCR/ABL融合基因敏感、可靠,对慢性骨髓增殖性疾病及骨髓增生异常/骨髓增殖性疾病的诊断及鉴别诊断有重要价值;可明确Ph+急性淋巴细胞白血病患者的诊断;在CML患者行异基因造血干细胞移植后监测微小残留病灶方面也有重要意义。

荧光原位杂交技术分析人结肠菌群方法研究

建立荧光原位杂交技术分析人体内结肠菌群的方法。取受试者新鲜粪便 ,选用 5种特异性的 16SrRNA寡核苷酸探针 ,检测粪便样本收集后的保存时间、温度 ,离心条件及样本固定液存放时间对杂交计数结果的影响。结果建立最佳实验条件为 :粪便样本收集后应尽快在 4℃下保存 ,放置时间不要超过 12小时即作处理 ;样本的适宜离心条件为 70 0g 2分钟 ;样本用多聚甲醛固定后在 - 80℃下存放时间不要超过 5个月。该方法具有较好的稳定性 ,可以有效地检出个体之间结肠菌群的差异。

荧光原位杂交技术(FISH)及其在植物分子细胞遗传学中的应用与展望

荧光原位杂交是在分子水平上检测外源染色质的一种有效方法。该技术在研究植物分子细胞遗传学、基因扩增、基因作图及植物进化和亲缘关系的鉴定上已广泛应用。本文简要介绍了荧光原位杂交探针类型、探针标记方法和染色体制片技术等,概述了荧光原位杂交技术在构建植物基因组物理图谱,功能基因定位,远缘杂种的鉴定及外源染色质的检测,减数分裂时期染色体行为研究和探讨种的起源中的应用与展望。