基于荧光反射成像的小鼠下肢外周组织的灌注参数成像

目的利用荧光反射成像技术，重建出小鼠下肢外周组织的灌注参数的分布图像。方法BALB/c裸鼠尾静脉注射10μg的吲哚菁绿（ICG）溶液，给药后立即用荧光反射成像系统连续拍摄ICG荧光强度图像，总计时长200S。随后拍取小鼠轮廓的白光图，以获得感兴趣区域（ROI）。用双指数模型对ROI区域的动态荧光数据建模分析，重建出小鼠下肢外周组织的灌注参数图像。结果利用双指数模型获得的荧光强度一时间曲线与测量的灌注曲线接近，并重建出反映小鼠下肢外周组织血液灌注情况的参数分布图。结论提出一种量化分析小鼠下肢外周组织血液灌注状态的方法，重建的灌注参数图像分辨率较高。该方法采用非入侵式活体成像，对实验对象损伤小。

膜片钳技术结合全内反射荧光成像技术在单细胞胞吐活动研究中的应用

介绍了膜片钳和全内反射荧光成像的工作原理、实验技术,以及这两种技术的结合在单细胞胞吐研究中的应用,并对其发展前景进行了展望。

应用全内反射单分子荧光成像研究蛋白复合物亚基组成

细胞的生化过程大都是由蛋白复合物完成的,研究蛋白复合物亚基的组成对于了解蛋白质的结构和生物学功能具有重要的意义,然而如何准确确定蛋白复合物中蛋白质亚基的数量(stoichiometry)仍然是一个挑战.近年来,活细胞体系单分子荧光成像技术的不断发展为原位实时动态地研究蛋白质的结构和性质提供了新的手段.本文主要介绍了应用活细胞全内反射单分子荧光成像技术表征细胞膜区蛋白复合物组成的3种方法,包括单分子漂白步数分析、荧光强度统计分布以及蛋白运动分析,并结合其基本原理介绍了这几种方法在活细胞体系膜蛋白研究中的应用.

动态荧光分子成像技术研究进展

动态荧光分子成像技术能够描述荧光分子探针在生物体内吸收、分布以及排出的完整过程,是一种可以对生物体的生理、病理过程进行连续监测的动态成像技术.这项技术具有无电离辐射、成像速度快、灵敏度及特异度高、费用低廉等优点,在基础医学及临床医学研究中具有广阔的应用前景.从系统、算法和应用3个方面对动态荧光分子成像技术的研究进展进行了综述.

紧聚焦径向偏振倏逝场的测量

基于径向偏振光束的全内反射荧光显微成像具有更高的成像分辨率,探究其倏逝场的强度分布规律是实现系统结构设计和优化的关键。基于矢量衍射理论,推导了聚焦的径向偏振倏逝场的数学表达式,进行了理论计算,并基于扫描近场光学显微镜搭建了实验系统,测试了倏逝场的强度分布,验证了理论分析。测试结果表明,聚焦的径向偏振光束产生的倏逝场在横向及轴向都具有非常高的分辨率,在可见光波长范围内,光斑横向半高全宽度在100~200nm范围,轴向半高全宽度在40~80nm范围,突破了衍射极限,证明了该类型倏逝场在全内反射荧光显微成像领域巨大的应用价值,也为接下来的系统改进提供了技术支持。

线虫荧光标记稳定表达系的建立

目的:建立稳定表达的PHluorin标记的线虫种系,为囊泡在线虫ALA神经元上分泌机制的研究提供模型。方法:采用了国际先进的线虫转基因技术,将构建的Pida-1IDA-1:PHluorin质粒通过显微注射到线虫的母代,通过筛选后得到稳定表达的种系。结果:通过DIC显微镜整体检测和全内反射荧光成像技术(Tirfm)细胞检测,蛋白表达的位置正确,通过高倍数体式显微镜确定稳定种系中阳性率高达99%。结论:建立了一个稳定表达的荧光标记线虫种系,为进一步在线虫上研究囊泡分泌提供了很好的模型。