利福平耐药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物表型耐药与其基因突变的一致性研究

目的:研究利福平耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)耐药基因突变特征与FQs最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的关系。方法:选取2016—2021年北京市结核病防治机构及定点医院收治的利福平耐药结核病(rifampicin resistant tuberculosis,RR-TB)患者分离培养阳性菌株进行微孔板法药物敏感性检测,总结RR-TB患者菌株对左氧氟沙星(levofloxacin,Lfx)和莫西沙星(moxifloxacin,Mfx)的MIC值;同时进行一代测序。分析FQs耐药相关基因gyrA和gyrB突变特征与FQs MIC之间的关系;以表型药物敏感性试验(phenotypic drug susceptibility testing,pDST)结果为参照标准,评价基因型药物敏感性试验(genotypic drug susceptibility testing,gDST)对FQs耐药的检测效能;探讨RR-MTB对FQs表型耐药与基因型耐药差异的原因。结果:303株RR-TB患者菌株中,FQs pDST耐药率为27.7%(84/303),gyrA基因突变检出率为25.1%(76/303),未检测到gyrB基因突变。以pDST结果为参照标准,gDST检测RR-MTB的FQs耐药性的敏感度和特异度分别为84.5%(71/84;95%CI:74.6.1%~91.2%)和97.7%(214/219;95%CI:94.5%~99.1%)。两种方法结果不一致的菌株有25株,不一致率为8.3%(25/303)。FQs耐药菌株的MIC主要为2μg/ml,最常见的突变位点发生在第94位点(53.9%,41/76),gyrA基因在第88和94位点突变与pDST耐药完全一致,而第90和91位点突变的pDST耐药一致率分别为95.8%(23/24)和3/5。第88位点的突变与Lfx pDST耐药相关,与Mfx pDST高浓度耐药相关;第90位点的突变以丙氨酸转变为缬氨酸为主(92.3%,24/26),该突变发生的Lfx和Mfx最低MIC为临界浓度(1μg/ml和0.25μg/ml)。第94位点天冬氨酸突变为天冬酰胺均为Lfx和Mfx高浓度耐药(1/1),该位点天冬氨酸突变为酪氨酸与Lfx耐药(1/1)相关,与Mfx高浓度耐药相关(1/1)。结论:北京地区RR-MTB的FQs耐药的主要机制是gyrA基因突变,不同gyrA基因突变提示FQs耐药水平存在差异。FQs pDST和gDST检测RR-MTB的结果高度一致,可及早应用gDST检测RR-TB患者的FQs的耐药性,以指导临床制定合理治疗方案。

耐氧氟沙星结核分枝杆菌对五种氟喹诺酮类药物交叉耐药的研究

目的 研究耐氧氟沙星结核分枝杆菌对5种不同氟喹诺酮类药物之间的交叉耐药性.方法 本研究选取来自于2007年全国结核病耐药性基线调查的130株对氧氟沙星耐药的结核分枝杆菌菌株,用微孔板稀释法检测这些菌株对5种氟喹诺酮类药物（氧氟沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星以及司帕沙星）的最低抑菌浓度,统计耐药率的差别并分析对某种氟喹诺酮类药物耐药的菌株中对其他4种药物的耐药率的差别,组间差异的比较采用卡方检验,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 130株对氧氟沙星耐药的菌株中,分别有110株（84.6％,110/130）、108株（83.1％,108/130）、46株（35.4％,46/130）及66株（50.8％,66/130）对左氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星及司帕沙星耐药.加替沙星耐药率显著低于左氧氟沙星（x2=65.641,P＜0.01）、莫西沙星（x2=61.225,P＜0.01）和司帕沙星（x2=6.274,P=0.02）的耐药率.左氧氟沙星耐药菌株中分别有90.9％（100/110）、41.8％（46/110）和59.1％（65/110）的菌株对莫西沙星、加替沙星和司帕沙星耐药;在加替沙星和司帕沙星耐药菌株中,有97.8％（45/46）和97.0％（64/66）对莫西沙星耐药.莫西沙星耐药株中分别有41.7％（45/108）和59.3％（64/108）对加替沙星和司帕沙星耐药.结论 上述5种氟喹诺酮类药物之间呈现出不同的交叉耐药性,其中左氧氟沙星和莫西沙星交叉耐药,加替沙星和司帕沙星与莫西沙星之间表现为部分单向交叉耐药.

结核分枝杆菌DNA促旋酶基因突变与耐氟喹诺酮类药物的相关性研究

目的 分析MDR TB结核分枝杆菌临床分离株的DNA促旋酶（gyr）基因突变特点,初步探究MDR-TB对氟喹诺酮类药物耐药与gyr基因突变的相关性.方法 采用最低抑菌浓度（MIC）法筛选MDR-TB,对17株临床MDRTB菌株应用DNA直接测序法检测gyr基因的突变情况,分析细菌基因突变与耐药产生的相关性.结果 Mtb 1株标准菌株（H37Rv）未见gyr A亚单位基因（gyrA）和gyr B亚单位基因（gyrB）基因突变,所有17株临床菌株gyrA均存在95位AGC→ACC.12株耐环丙沙星和左氧氟沙星菌株中,10株gyrA产生了错义突变,突变率为83.3％;突变位点位于89位、90位、91位和94位;1株发生了gyrB突变,突变位点位于500位.耐莫西沙星的9株耐药株中,8株gyrA发生突变,占88.9％.结论 gyrA基因突变是Mtb对氟喹诺酮类药物产生耐药的机制之一;gyrA的错义突变主要发生在第89位、90位、91位、94位密码子上.

美国FDA对氟喹诺酮类抗生素的说明书进行修改强化宣示其在精神卫生及引起低血糖方面的副作用

美国FDA于2018年7月10日要求对氟喹诺酮类（fluoroquinolones，也称荧光喹诺酮类）抗生素药物（口服或者注射剂型）的说明书进行修改，强化宣示该类药物在精神卫生及引起低血糖方面的副作用。

眼部细菌对氟喹诺酮类药物的体外敏感试验研究

目的探讨眼部细菌对4种氟喹诺酮类抗菌药物体外药物敏感性的异同。方法非随机对照、回顾性研究。对2005年1月至2006年12月间首都医科大学附属北京同仁医院、北京市眼科研究所微生物室培养阳性的619株细菌，采用纸片扩散法测量抑菌环直径，观察其对加替沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星及环丙沙星的药物敏感性。结果619株细菌中革兰阳性球菌372株（60．1％），革兰阴性球菌7株（1．1％），革兰阳性杆菌60株（9．7％），革兰阴性杆菌177株（28．6％），其他待鉴定3株（0．5％）。加替沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星及环丙沙星的总敏感性分别为88．4％、72．1％、64．8％及54．4％。常见葡萄球菌对加替沙星的敏感性（89．9％）高于左氧氟沙星（61．6％）、氧氟沙星（48．2％）及环丙沙星（38．8％）；链球菌属对加替沙星（93．2％）、左氧氟沙星（89．2％）及氧氟沙星（87．8％）敏感性显著高于环丙沙星（62．2％）；革兰阳性杆菌对加替沙星（86．7％）敏感性高于环丙沙星（58．3％），以上差异均有统计学意义（P〈0．0083）；革兰阴性球菌、假单胞菌属及肠杆菌科对4种抗菌药物的敏感性比较，差异均无统计学意义（P〉0．0083）。结论眼部多数细菌对加替沙星敏感性的高于其他氟喹诺酮类抗菌药物，尤其是革兰阳性菌。

单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌耐药机制研究

目的探讨单耐氧氟沙星的结核分枝杆菌中耐药相关基因突变及外排泵基因风坦两种不同耐药机制的作用。方法从国家结核病参比实验室2007年全国耐药基线调查菌株库中挑选单耐氧氟沙星的菌株17株。采用直接测序法检测利福平耐药相关基因删似和gyrB突变情况。提取gyrA和gyrB无突变菌株的RNA后反转录并采用Real—timePCR方法检测20个药物外排泵基因的表达量，对比菌株最低抑菌浓度（MIC）试验结果，筛选可能与氧氟沙星药物外排泵的相关基因，并选用大肠埃希菌为模式生物构建表达载体，检测过表达目的外排泵蛋白的大肠埃希菌对氧氟沙星的耐药程度加以验证。结果在17株单耐氧氟沙星的菌株中，有4株（4／17）检测到gyrA突变，其中包括90位点突变1株及94位点突变3株，上述突变均表现为高浓度耐药，其MIC均不低于4μg/ml。在gyrA和gyrB未突变菌株中，通过real-timePCR检测发现在高浓度耐药的2株菌株中，Rv0933和Rv2938的转录水平显著高于其他低浓度耐药菌株，较对照株H37Rv转录水平高16倍和5倍。在对照组和转入pEASY-E1-Rv2938的大肠埃希菌中MIC均小于0．125μg／ml，而转入pEASY-E1-Rv0933的大肠埃希菌的MIC为2μg／ml。结论本研究结果显示，gyrA耐药决定区基因突变与氧氟沙星高浓度耐药相关，PstB可能是氧氟沙星特异性的药物外排泵基因，其高水平表达与氧氟沙星高浓度耐药相关。

我国二线抗结核药物使用现状调查研究

目的调查各级结防机构、结核病专科医院和综合医院二线抗结核药物(second-line antituberculosis drugs,SLD)的使用情况,为国家进一步制定合理使用SLD的相关政策提供资料。方法采用分层目的抽样,按照我国东、中、西的地理位置分布,东、中、西部各抽取4个省,共抽取12个省,各省所有地市和县都参与调查。对各级结核病防治机构、结核病专科医院、综合医院和乡镇卫生院(以下总称为"医疗、结防机构")进行问卷调查,并将调查问卷进行汇总分析。结果调查4782个机构,72.6%的机构使用了SLD。省市县乡各级医疗、结防机构,使用SLD的比例依次降低,分别为:省级87.0%,地市级83.4%,县区级72.0%,乡镇级70.3%。不同类型的机构使用SLD的比例也不相同,结核病防治所设在结核、胸、肺科医院以及定点医院(98.7%)、结核病医院和有结核病科的专科病院(100%)、综合医院(99.4%)较高。疾病预防控制中心(简称"CDC")内设结核病防治所(科)较低(22.9%)。不同的SLD使用的比例也不相同,丁胺卡那霉素(49.6%)、氧氟沙星(42.3%)、左氧氟沙星(66.2%)和环丙沙星(39.5%)使用的比例较高。仅有92家(1.9%)医疗、结防机构做一线抗结核药物的药物敏感性试验。影响SLD使用的因素有:地区、机构类型、是否有结核病门诊和病房、结核病床位数、是否做痰涂片、是否做痰培养(P均<0.001)和患者涂阳率(P<0.05)等。药物敏感性试验不是使用SLD的影响因素(P=0.771)。结论SLD在各级结防、医疗机构使用很普遍,不同级别、不同类型的机构以及不同SLD的使用存在较大差异,而药物敏感性试验很少开展。国家应制定有关合理使用SLD的政策,促进SLD药物敏感性试验的开展。

深圳市住院病人抗结核相关抗菌药物应用调查

目的了解深圳市综合医院和结核病专科医院二线抗结核药物(second line anti-TBdrug,SLD)相关的抗菌药物使用情况,为其合理应用和科学管理提供可靠依据。方法调查2008年深圳市3家综合医院住院部呼吸内科、消化内科和泌尿内科3个科室245例病例,和1家结核病专科医院96例肺结核住院病例。均按不同科室内住院号顺序依次抽取病案资料查阅,分别记录使用的是SLD相关抗菌药物种类和时间段,并统计分析。结果综合医院,仅15.9%的病例有抗菌药物药物敏感试验,59.6%的病例使用过SLD相关的抗菌药物,以氟喹诺酮类居多,占49.8%,其次是大环内酯类,占9%;氟喹诺酮类的使用大多集中于左氧氟沙星和莫西沙星,而大环内酯类多集中于阿齐霉素和克拉霉素;呼吸内科应用较多,占75.1%。结核病专科医院96例肺结核病例中,65例为单纯肺结核病例,52%的病例合并使用SLD相关的抗菌药物,以氟喹诺酮类使用最多;31例合并其他细菌感染的肺结核病例,均使用了抗菌药物,且81%未做药物敏感试验,以氟喹诺酮类最多,占89%。氟喹诺酮类应用均以左氧氟沙星为主;氨基糖苷类抗菌药物应用较少。结论深圳市结核病专科医院存在较严重的结核病不规范治疗现象;综合医院和专科医院住院病例抗菌药物以经验用药为主,并均存在氟喹诺酮类和大环内酯类抗菌药物过多应用的现象。

加替沙星不良反应150例分析

目的:探讨加替沙星致不良反应的特点及一般规律,为临床合理用药提供参考。方法:对1999/2007年国内公开发行医药期刊报道的150例加替沙星不良反应进行统计、分析。结果:加替沙星不良反应主要有胃肠道反应、皮肤及附件损害、神经系统反应、糖代谢异常、心血管系统反应、肝毒性、过敏性休克等。结论:临床应重视加替沙星的安全性。

加替沙星治疗尿路感染临床观察

目的:观察加替沙星对尿路感染的临床疗效。方法:将104例确诊的尿路感染患者随机分为治疗组和对照组,治疗组用加替沙星治疗,对照组用左旋氧氟沙星治疗。结果:两组总有效率差异无显著性,但随访复发率低于对照组(P<0.05)。结论:加替沙星是治疗尿路感染的有效药物。