一种新的检测土壤中壬基酚的荧光定量PCR方法

建立了一种新的外切酶保护-荧光定量PCR方法检测环境激素壬基酚,并将该方法应用于土壤样品中壬基酚的检测。壬基酚可以活化雌激素受体使之与包含特定序列的双链DNA结合,结合的DNA因受到蛋白质的保护可抵抗核酸外切酶Exo Ⅲ的消解而被保留,痕量的保留DNA可通过PCR扩增定量。根据此原理,首先从鱼肝脏中提取含雌激素受体的细胞溶质,与不同浓度的壬基酚结合使雌激素受体活化,形成配体-受体复合物;再设计合成特异性引物序列,采用常规PCR方法扩增制备双链结合DNA;使双链结合DNA与配体-受体复合物反应结合后,用核酸外切酶ExoⅢ和S_1核酸酶消解,去除未受到蛋白质保护的结合DNA。将消解后产物作为模板,进行荧光定量PCR扩增反应,从而建立G_1值与壬基酚质量浓度N(g/L)的标准曲线C1=-1.828lgN+11.447。将该方法应用于土壤中壬基酚的检测,最低检测限达到2 pg/g,可用于检测大批量环境样品中壬基酚。

多重实时荧光定量PCR法筛查成人Ph样急性淋巴细胞白血病

目的探讨多重实时荧光定量PCR法早期、快速筛查Ph样急性淋巴细胞白[血病（ALL）的可行性，了解Ph样ALL的临床特征及预后。方法2010年10月至2016年3月收治的118例初诊成人B—ALL患者纳入研究，利用多重实时荧光定量PCR法检测其中58例BCR-ABL融合基因和MLL重排均阴性患者Ph样相关融合基因及细胞因子受体样因子2（CRLF2）表达情况。比较分析Ph样融合基因阳性和（或）CRLF2高表达患者的临床特征、疗效和预后。结果检mPh样融合基因阳性患者9例（9／58，15．5％），CRLF2高表达患者10例（10／58，17．2％）。Ph样融合基因阳性和（或）CRLF2高表达组、Ph阳性组、MLL重排阳性组以及其他患者组在年龄、WBC、免疫分型、细胞遗传学、危险度分组方面差异有统计学意义（P值均〈0．01）。四组患者的2年总生存率分别为65％、47％、64％、74％（P=0．043），2年尢复发生存率分别为51％、39％、62％、70％（P=0．010）。结论采用多重实时荧光定量PCR法筛查P11样ALL患者可行，Ph样ALL患者预后较差。