荧光定量免疫层析法测定鸡肉和牛奶中的氯霉素

目的建立一种荧光定量免疫层析法测定动物源性食品鸡肉与牛奶中氯霉素残留的分析方法。方法将氯霉素鼠单克隆抗体与羧基化铕微球进行偶联标记。经过荧光微球活化、探针偶联等一系列条件优化确定最佳反应体系条件,根据纸条测试线(T线)信号值与质控线(C线)信号值的比值(T/C)和样本中氯霉素浓度建立定量标准曲线。针对鸡肉和牛奶样品,对荧光免疫层析检测方法的灵敏度、准确度和精密度等进行评价,并与液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)标准仪器分析方法进行比较。结果本研究建立的荧光免疫层析检测方法对鸡肉和牛奶中氯霉素残留的检出限分别为0.041μg/kg和0.040μg/kg,定量限分别为0.079和0.100μg/kg,添加回收率在76.26%~112.92%之间,变异系数均小于15%。结论本研究建立的荧光定量免疫层析方法灵敏度高、稳定性好,且与使用仪器方法得到的检测结果一致性较高,适用于鸡肉和牛奶中氯霉素残留的现场快速检测。

荧光定量免疫层析技术在诊断上的应用

近年来随着纳米粒子、量子点等标记蛋白质的新材料和新技术的不断发展,免疫检测领域掀起了新的革命,使抗原抗体检测的灵敏度逐步增强,特异性逐步提高,操作更为简便;荧光定量免疫层析技术,是将免疫荧光与免疫层析技术相结合,克服了以胶体金标记为代表的传统免疫层析技术上的不足,朝向量化、多标记和直观检测方向发展的新型免疫检测技术,本文就近年来该技术在诊断上的应用进行综述。

荧光免疫层析法检测粮食谷物中重金属铅的前处理研究

基于时间分辨荧光纳米微球的重金属铅快速定量检测卡,通过对样品前处理的研究,确定了最佳提取液为0.5~1 mol/L HCl,最佳螯合剂为1~2 mmoL/L ITCBE,提高了粮食谷物中重金属铅的检测灵敏度,使得检测卡能满足粮食谷物中重金属铅快速检测的需求。并对重金属铅荧光定量检测卡的性能进行检测,其最低检出限LOD为7.428μg/kg,最低定量限LOQ为20.830μg/kg,线性范围为25~1000μg/kg,线性范围内的添加回收率为96.43%~108.34%,5次重复的变异系数在10%以内,其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对重金属铅的分析标准的技术要求,且该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点,可用于不同粮食谷物中重金属铅的快速定量检测分析。

高敏定量荧光免疫层析法、ELISA法检测猪、牛、羊O型口蹄疫病毒抗体的临床对比试验

为了将新型的O型口蹄疫病毒抗体高敏定量荧光免疫层析技术应用于天津市基层检测,将该技术与实验室常用的液相阻断酶联免疫吸附法（ELISA）进行了对比试验,对100份猪血清、100份牛血清、50份羊血清进行检测,猪、牛、羊的O型口蹄疫病毒抗体高敏定量荧光免疫层析法准确度分别为90. 0%、95. 0%、82. 0%,特异性分别为89. 2%、100%、85. 7%,敏感性分别为90. 5%、94. 9%、80. 6%。猪、牛、羊的O型口蹄疫病毒抗体高敏定量荧光免疫层析法与液相阻断ELISA方法的符合率分别达到90. 0%、95. 0%、82. 0%。说明利用高敏定量荧光免疫层析技术可在基层现场对家畜O型口蹄疫病毒抗体进行检测,能够及时有效地评价O型口蹄疫疫苗的临床免疫状况。

白细胞介素-6快速定量荧光免疫层析试纸条的制备及特性研究

目的利用免疫荧光技术研制一种快速、高灵敏度定量检测血清中白细胞介素-6(IL-6)的方法。方法本研究对试剂盒的灵敏度、准确度、特异性和稳定性进行了初步的性能评价。结果本方法的标准曲线线性关系良好,r^2=0.965,检测线和定量限分别为8.49、25.28pg/mL,添加回收试验测得其回收率平均值分别为96.51%、102.46%、103.06%,且制备试纸条的批间和批内精密度均小于15.00%,与7种竞争物交叉反应率小于0.10%。结论本试验制备的IL-6定量荧光免疫层析试纸条的灵敏度高,特异性好,稳定性好,有较为广泛的应用前景。

利用荧光免疫层析卡测定黄曲霉毒素M1的研究

将量子点与抗黄曲霉毒素M1(AFM1)的单克隆抗体偶联,以AFM1-BSA偶联物包被于NC膜作为检测线,山羊抗鼠二抗包被于NC膜上作为质控线,构建了直接竞争检测AFM1的荧光定量免疫层析检测卡体系,在0.156μg/L^1.25μg/L范围内能够准确定量黄曲霉毒素B1,灵敏度达到0.156μg/L。

黄曲霉毒素B1/呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素三合一时间分辨荧光定量快速检测卡的优化

改进了一种基于时间分辨荧光纳米微球的黄曲霉毒素B1/呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素三合一荧光定量快速检测卡,一次提取,一次检测,8 min内即可得到三个项目的检测结果,快速、简易、省时省力。本项目成功优化了黄曲霉毒素B1/呕吐毒素/玉米赤霉烯酮真菌毒素三合一荧光定量快速检测卡的时间分辨纳米微球的整个制备工艺,解决了玉米赤霉烯酮(简称ZEN)的灵敏度低、黄曲霉毒素B1(简称AFB1)的均一性差、样本检测C线线条扩散等等问题。通过对微球制备工艺、微球表面修饰不同数量碳原子手臂,确认了ADZ检测卡中ZEN胶乳所用的荧光微球,即南京微测生物的200原子手臂的时间分辨荧光微球,解决了ZEN灵敏度低的问题;通过对样品垫的选择、样品垫缓冲液配方的优化,确认了样品垫工艺,即用上海捷宁生物的G-6玻纤垫,并处理样品垫缓冲液配方3,解决了AFB1的均一性差问题;通过对抗原稀释液的优化,确认了用50 mM PBS+5%蔗糖划膜液,解决了样本C线线条扩散问题。

基于时间分辨荧光纳米微球的玉米赤霉烯酮快速定量检测试纸条的研制及性能研究

成功研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的玉米赤霉烯酮快速定量检测试纸条,并在粮食谷物饲料等样品中对其检测性能进行了研究。该产品的最低检出限LOD为3.65μg/kg,最低定量限LOQ为8.51μg/kg,线性范围为10.00~1 000.00μg/kg,线性范围内的添加回收率为94.00%~118.33%,3次重复的变异系数在13.11%以内。与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%。其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对玉米赤霉烯酮的分析标准的技术要求,且该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点,可用于不同粮食谷物饲料中玉米赤霉烯酮的快速定量检测分析。

基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素快速定量检测试纸条的研制及性能研究

成功研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的呕吐毒素快速定量检测试纸条,并在粮食谷物饲料等样品中对其检测性能进行了研究。该试纸条的检出限为25μg/kg,最低定量限为82μg/kg,线性范围为100~5 000μg/kg,线性范围内的添加回收率为83.51%~113.84%,同一个样本检测3次的CV<14.75%,与其他真菌毒素的交叉反应率均小于5%,与其代谢物的交叉反应率在20%以内。具有操作简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点,适合对粮食谷物饲料中呕吐毒素进行快速定量测定。

黄曲霉毒素B1荧光定量检测试纸条性能评估测试

对上海飞测生物科技有限公司研发生产的黄曲霉毒素B1荧光定量检测试纸条在粮食谷物饲料中的检测性能进行了评估。该产品的最低检出限(LOD)为0.29μg/kg,最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg,线性范围为1.00~50.00μg/kg,线性范围内的添加回收率为92.89%~121.07%,3次重复的变异系数在14.56%以内。与其它真菌毒素的交叉反应率均小于5%。该产品具有操作简便、灵敏准确、快速定量、重现性好等优点,适合用于对粮食谷物饲料中黄曲霉毒素B1进行快速定量测定。

基于时间分辨荧光纳米微球的黄曲霉毒素B1快速定量检测试纸条的研制及性能研究

成功研制开发了一种基于时间分辨荧光纳米微球的黄曲霉毒素B1快速定量检测试纸条,并在粮食谷物饲料等样品中对其检测性能进行了研究。该产品的最低检出限(LOD)为0.29μg/kg,最低定量限(LOQ)为0.91μg/kg,线性范围为1.00~50.00μg/kg,线性范围内的添加回收率为92.87%~121.33%,3次重复的变异系数在14.80%以内,与其它真菌毒素的交叉反应率均小于5%。其准确性和可靠性均可以满足欧盟和我国对黄曲霉毒素B1的分析标准的技术要求,且该方法具有简便快速、准确可靠、重复性好等特点,适合用于对粮食谷物饲料中黄曲霉毒素B1的进行快速定量测定。

荧光定量法快速检测鲜奶中四环素类总量残留

以荧光纳米微球标记抗体,建立免疫层析检测方法,配合荧光定量仪,可高灵敏度地检测样本中4种四环素类药物的残留含量,实现鲜奶中所含四环素类药物的总量检测。结果表明,本方法对四环素的检测下限达10μg/L,对金霉素、土霉素、多西环素回收率均达70%以上,除了与链霉素有0.32%的交叉反应率外,与其他药物没有交叉反应,整个检测过程只需15 min左右。通过建立的荧光定量免疫层析法,实现了四环素总量的快速定量检测。

盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒质量的评价

本研究使用盐酸克伦特罗荧光定量检测试剂盒,基于免疫荧光层析原理,实现对猪尿中所含克伦特罗的定量检测,并对试纸条的灵敏度、准确度与精密度、特异性、稳定性等进行了初步的性能评价。结果表明,以四参数法对定量曲线进行拟合,线性系数为R2=0.99972;检测限达到0.1μg/L;对3个不同浓度的添加回收试验,测得其回收率为80%~120%;批内变异系数分别为12.2%、11.1%、15.2%;与4种β-肾上腺素受体激动剂和8种常用的抗生素交叉反应率均低于0.01%;同时验证了本试剂盒在1年的保存期限有效。整个检测过程只需15min。

基于时间分辨荧光纳米微球的伏马毒素B1快速定量检测卡的制备及应用

为了满足粮食谷物中伏马毒素B1快速定量检测的需求,以伏马毒素B1为研究对象,建立了基于时间分辨荧光纳米微球的FB1荧光快速定量检测卡,检测前无需调整样品提取液pH,并借助酶联免疫试剂盒及高效液相色谱法分析比对了该荧光定量快速检测卡在粮食谷物(大米、玉米、小麦)中的检测性能。结果表明其检测不同样品的LOD在35.37~37.17μg/kg之间,LOQ在117.9~123.9μg/kg之间,灵敏度良好;线性范围均为250~6000μg/kg,相关系数R2在0.9972~0.9995之间;不同样品中6个添加水平的加标回收率为83.38%~114.66%,变异系数(CV)小于15%,准确性和重复性良好;国标液相色谱法和伏马毒素B1荧光定量快速检测卡同时检测FB1污染的不同样品,检测结果的符合度为92.53%~106.26%,CV小于10.37%;与其他常见的5种真菌毒素的交叉反应率均小于5%,且添加浓度和检出浓度的差异极显著,表明特异性良好。因此,所制备的FB1荧光定量快速检测卡能够满足粮食谷物中伏马毒素B1现场化快速定量检测的需求。

赭曲霉毒素A时间分辨荧光侧流层析试纸条的研究

目的构建一种基于时间分辨荧光纳米微球的赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)侧流层析试纸条。方法基于免疫层析原理,以时间分辨荧光纳米微球为信号探针,降低非特异性荧光的干扰,提高检测灵敏度,并通过优化样品提取液和样品稀释液,进一步提高现场检测OTA的灵敏度和准确性。结果OTA在1.0~50.0μg/kg范围内,T线和C线荧光强度比值与OTA浓度的对数线性关系良好,相关系数r 2为0.9981~0.9998。不同基质中OTA的检出限和定量限分别为0.401~0.614μg/kg和0.973~1.617μg/kg,加标回收率为89.53%~118.37%,相对标准偏差(relative standard deviations,RSDs)小于12%(n=3),且与将呕吐毒素、伏马菌素B1、黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的交叉反应率均小于5%,特异性良好。OTA侧流层析试纸条基于荧光定量快速检测技术平台可在8 min内快速准确地定量测定出待测样本中OTA含量。结论本研究所制备的时间分辨荧光侧流层析试纸条可实现玉米、小麦和饲料中OTA的快速定量检测,并具有成本低、灵敏度高、操作简便、准确高、重复性好、特异性好的优点,可满足国内外OTA检测的技术要求,为真菌毒素的快检技术的发展提供了技术支撑。

基于免疫磁珠前处理的荧光免疫层析法定量检测牦牛肉中金刚烷胺

研究旨在提供一种基于免疫磁珠分离、富集和净化前处理,检测牦牛肉中金刚烷胺残留的荧光免疫层析定量分析方法。通过对免疫磁珠偶联液、抗体偶联量、偶联时间、微球的抗体标记量、金刚烷胺抗原和羊抗鼠二抗包被浓度等进行优化,初步建立了基于免疫磁珠前处理的时间分辨荧光免疫层析方法(TRIFA),并对其方法的灵敏度、准确度和精密度进行了评价。结果表明,经过优化后荧光微球抗体标记量为6μL,抗原和羊抗鼠二抗的包被浓度均为0.52μg/mL;免疫磁珠偶联液为0.02 mol/L PB、磁珠与抗体最佳偶联量为100μg、捕获时间为60 min;所建立方法的检出限为0.46μg/kg,IC50为2.327μg/kg,线性范围为0.87~7.32μg/kg,回收率为82.05%~109.95%,批内变异系数为4.77%~8.86%,批间变异系数为9.13%~11.92%。经验证,牦牛肉样本检测结果与液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)结果一致。结论:该研究建立的基于免疫磁珠前处理的时间分辨荧光免疫层析方法适用于牦牛肉样品中金刚烷胺类药物残留的检测,方法的灵敏度高、稳定性好,说明免疫磁珠-荧光免疫层析法可作为牦牛肉中金刚烷胺快速检测的有效手段。

上海市曲阳社区儿童血清25-羟维生素D3水平不足影响因素分析

目的探讨上海市曲阳社区儿童血清25-羟维生素D3[25-(OH)D3]水平不足的影响因素。方法选取2017年3月至2019年3月在曲阳社区卫生服务中心体检的儿童797例,荧光定量免疫层析法检测儿童血清25-(OH)D3水平,问卷调查儿童25-(OH)D3相关的基本信息和用药情况,logistic回归分析其影响因素。结果单因素logistic回归结果显示性别、月龄、体重、身高、小儿本阶段患病、小儿每日户外活动这些因素的P<0.15。多因素logistic回归分析结果显示,体重是儿童血清25-(OH)D3水平不足的保护因素,相对于0~10kg组,≥10kg组的发病优势比OR值为0.410(95%CI:0.176~0.954,P<0.05);小儿本阶段患病是儿童25-(OH)D3水平不足的危险因素,相对于未患病组,患病组的发病优势比OR值为1.974(95%CI:1.050~4.102,P<0.05);小儿每日户外活动时间是儿童25-(OH)D3水平不足的保护因素,相对于0h组,≥2h组的发病优势比OR值为0.722(95%CI:0.539~0.993,P<0.05)。结论儿童体重过轻、小儿本阶段患病、户外活动时间不足容易引起25-(OH)D3不足,需给予相应措施及时校正。

上海曲阳社区1108例儿童血清25-羟维生素D3水平调查分析

目的调查上海市曲阳社区1 108例儿童血清25-羟基维生素D3(VD3)水平。方法选取2017年3月至2019年3月在曲阳社区卫生服务中心体检的儿童1 108例作为研究对象,其中男564例,女544例;年龄3~48个月。采用荧光定量免疫层析法检测儿童血清VD3水平。结果各月龄儿童VD3下限多数在充足水平线(50ng/mL)以上。除了>12~24月组和>24~36月组以外,0~12月组、>12~24月组、>24~36月组、>36~48月组间血清VD3水平两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论上海曲阳地区儿童血清VD3水平多数充足,但需要重视36月龄以上儿童的VD3补充。