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多重荧光定量聚合酶链反应法检测肉制品中的3种食源性致病菌
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作者 孙新城 李爽 +4 位作者 李侠颖 周杰 曹亚新 王宏伟 张晓根 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第9期37-43,共7页
目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大... 目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大肠杆菌O157:H7的rfbE基因序列分别设计特异性引物及探针,通过优化反应体系,测定其灵敏度、特异性和重复性,建立了可同时检测上述3种食源性致病菌多重qPCR方法。结果该方法只扩增3种靶细菌,对其他供试菌不扩增;沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7的检出限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)拷贝数/μL,并且拥有良好的重复性和特异性。人工污染的猪肉样品经SLE培养基富集8 h后,分别可以检测到初始菌液浓度为1.56×10^(2)CFU/25 g的沙门氏菌,2.13×10^(2)CFU/25 g的单增李斯特菌,2.32×10^(2)CFU/25 g的大肠杆菌O157:H7。结论所建立的多重qPCR灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌,在提高食品安全和保护人类健康方面有重要意义。 展开更多
关键词 沙门氏菌 单增李斯特菌 大肠杆菌O157:H7 多重荧光定量聚合反应
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荧光定量聚合酶链反应法与免疫学化学发光法检测乙型肝炎病毒的比较 被引量:1
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作者 王文萍 《基层医学论坛》 2023年第22期118-120,共3页
目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法与免疫学化学发光法(CLEIA)检测乙型肝炎病毒(HBV)的价值。方法选择2020年8月—2022年6月上饶市人民医院检验科341份应用FQ-PCR法测定HBV-DNA阳性血清标本作为研究对象,所有血清标本均采用FQ-PC... 目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法与免疫学化学发光法(CLEIA)检测乙型肝炎病毒(HBV)的价值。方法选择2020年8月—2022年6月上饶市人民医院检验科341份应用FQ-PCR法测定HBV-DNA阳性血清标本作为研究对象,所有血清标本均采用FQ-PCR法及CLEIA检测。分析HBV-DNA阳性标本中乙肝5项[乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝核心抗体(HBcAb)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝e抗原(HBeAg)]阳性检出率在不同血清模式下HBV-DNA载量分布情况,对比HBV-DNA载量于HBeAg阳性与HBeAb阳性中的分布情况。结果HBsAg+、HBcAb+、HBeAg+及HBsAg+、HBcAb+、HBeAb+阳性检出率最高,分别为38.42%、43.70%;HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAg+阳性检出率为4.99%,HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAb+阳性检出率为4.69%。另外,HBcAb阳性标本共331份,约占所有HBV-DNA阳性标本数的97.07%。大三阳组(131例)患者HBV-DNA平均载量为5.65×10^(8)U/mL,其中低载量占全组比例为17.56%(23/131)、中载量占全组比例为17.56%(23/131)、高载量占全组比例为64.89%(85/131);小三阳组(149例)患者HBV-DNA平均载量为1.82×10^(6)U/mL,其中低载量占全组比例为81.88%(122/149)、中载量占全组比例为15.44%(23/149)、高载量占全组比例为2.68%(4/149)。HBeAg阳性患者于高载量HBV-DNA中占比为60.67%,HBeAb阳性患者于低载量HBV-DNA中占比为77.71%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论2种方法联合检测在判断HBV感染中具有较高的应用价值,可为诊断及治疗方案制定等提供可靠的参考依据。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 荧光定量聚合反应 免疫学化学发光 乙肝5项
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的比较 被引量:1
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作者 姜红涛 姚秀林 《中外医疗》 2015年第8期192-193,共2页
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法 ,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病... 目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法 ,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病毒分离的阳性数为26份,实时荧光定量RT-PCR的阳性数为36份,好=8.1,P<0.005。结论 通过该实验,验证了实时荧光定量RT-PCR的确快速敏感,适用于实验室快速诊断。 展开更多
关键词 实时荧光定量逆转录-聚合反应 细胞培养 流感病毒
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荧光定量聚合酶链反应与分支链DNA信号扩增法检测血清HBV DNA的比较 被引量:3
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作者 袁静 马为民 +3 位作者 周伯平 徐六妹 王火生 John S Tam 《广东医学》 CAS CSCD 2000年第10期838-839,共2页
目的 了解荧光定量聚合酶链反应 (PCR)法与分支链DNA信号扩增 (bDNA)法在检测血清中HBVDNA含量上的优缺点。方法 分别用这两种方法平行检测 44份乙型肝炎患者的血清标本 ,并与定性PCR检测结果比较。同时用荧光定量PCR法观察 15例乙肝... 目的 了解荧光定量聚合酶链反应 (PCR)法与分支链DNA信号扩增 (bDNA)法在检测血清中HBVDNA含量上的优缺点。方法 分别用这两种方法平行检测 44份乙型肝炎患者的血清标本 ,并与定性PCR检测结果比较。同时用荧光定量PCR法观察 15例乙肝患者干扰素治疗期间HBVDNA含量变化。结果 ①荧光定量PCR法和bDNA法比较 ,○a前者测出的HBVDNA含量均值为 ( 3 5 0× 10 5± 3 3 6)copies/μl ;后者为 ( 3 0 7× 10 5± 12 9)copies/μl ,两者比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。○b前者的HBVDNA阳性率 79 5 % ;后者及常规PCR定性法均为 5 9 1%。荧光定量PCR法的阳性检出率显著高于bDNA法及常规定性PCR法 (P <0 0 5 )。② 15例中 5例获完全应答的乙型肝炎患者其血清HBVDNA含量在治疗 16周内均逐渐下降至完全转阴。结论 荧光定量PCR法与bDNA法在检测血清HBVDNA含量上 ,结果大多一致 ,且敏感性强 ,检验也较简便、价廉 ,并能较好评价和检测乙肝患者抗病毒疗效 ,宜于临床推广。 展开更多
关键词 乙型肝炎 HBV-DNA bDNA 荧光定量聚合反应
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荧光定量聚合酶链反应及培养法检测淋球菌的结果分析 被引量:3
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作者 曹文苓 颜景兰 +4 位作者 林路洋 李平 宋卫忠 梁艳华 黄玉绯 《中国麻风皮肤病杂志》 北大核心 2003年第2期133-134,共2页
关键词 荧光定量聚合反应 培养 检测 淋球菌 淋病 淋病奈瑟氏菌 性传播疾病
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荧光定量-聚合酶链反应法检测丙型肝炎病毒RNA 被引量:2
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作者 温涛 邢培清 +1 位作者 李伍升 刘玉振 《卫生毒理学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第1期63-63,共1页
关键词 荧光定量-聚合反应 检测 丙型肝炎病毒 RNA 血清
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间日疟原虫荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立 被引量:1
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作者 江晓玲 李明 +2 位作者 徐伟文 毕惠祥 程钢 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期80-82,共3页
目的 建立间日疟原虫荧光定量聚合酶链式反应 (FQ -PCR)检测方法 ,为快速、准确定量检测间日疟原虫奠定基础。方法 根据间日疟原虫SSURNA基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针 ,将PCR扩增的间日疟原虫SSURNA基因片段克隆入载体 ,... 目的 建立间日疟原虫荧光定量聚合酶链式反应 (FQ -PCR)检测方法 ,为快速、准确定量检测间日疟原虫奠定基础。方法 根据间日疟原虫SSURNA基因序列 ,设计并合成引物和荧光标记探针 ,将PCR扩增的间日疟原虫SSURNA基因片段克隆入载体 ,对重组质粒进行筛选、鉴定后 ,作为阳性模板 ,用于标准曲线的判定和样品检测。结果 应用重组质粒制作的定量曲线 ,循环阈值与模板浓度具有良好的线形关系 ,12 7份疟区血样和 30份正常血样的检测 ,显示此法有较高的灵敏度和特异度 ,定量检测结果与镜检感染率呈直线相关 ,相关系数为 0 95 9。 展开更多
关键词 荧光定量 pcr 间日疟原虫 小亚单位核糖体核糖核酸 聚合反应 疟疾
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实时荧光定量聚合酶链反应法与分离培养法在流感病毒鉴定中的关系研究 被引量:1
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作者 史晶晶 商永超 +1 位作者 石超帆 李海清 《山西医药杂志》 CAS 2022年第16期1887-1890,共4页
流感是至今尚无法完全控制的一种病毒性急性呼吸道传染病,同时也是国际上第一个实现全球监测的传染病[1]。为使阳泉市流感监测走向系统、全面和科学化,阳泉市疾病预防控制中心于2009年加入全国流感监测网络实验室,现将2015—2019年实时... 流感是至今尚无法完全控制的一种病毒性急性呼吸道传染病,同时也是国际上第一个实现全球监测的传染病[1]。为使阳泉市流感监测走向系统、全面和科学化,阳泉市疾病预防控制中心于2009年加入全国流感监测网络实验室,现将2015—2019年实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)检测阳性样本进行分离培养,分析CT值与流感病毒分离率的影响关系。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合反应 流感监测 阳性样本 分离培养 流感病毒 疾病预防控制中心 全球监测 CT值
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荧光定量聚合酶链反应染料法在HLA-B~★5801等位基因分析中的应用
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作者 马亮 丛笑 +3 位作者 鲁爽 韩呈武 湛玉良 曹永彤 《中日友好医院学报》 2013年第6期323-325,330,F0002,共5页
目的:评估荧光定量聚合酶链反应(PCR)染料法在HLA-B*5801等位基因分析中的灵敏度、特异度、准确度和Kappa值,并与经典测序方法进行比较。方法:应用HLA-B*5801基因检测试剂盒对268例痛风、痛风性关节炎和高尿酸血症患者和50例正常人HLA-B... 目的:评估荧光定量聚合酶链反应(PCR)染料法在HLA-B*5801等位基因分析中的灵敏度、特异度、准确度和Kappa值,并与经典测序方法进行比较。方法:应用HLA-B*5801基因检测试剂盒对268例痛风、痛风性关节炎和高尿酸血症患者和50例正常人HLA-B*5801进行分析,并对318例标本HLA-B基因2、3、4外显子双向测序。结果:荧光定量PCR染料法敏感度、特异度和准确度均为100%,Kappa值为1。318例参与者HLA-B*5801等位基因发生率为9.2%(29/318)。痛风患者HLA-B*5801发生率8.51%(8/94),痛风性关节炎发生率9.52%(2/21),高尿酸血症发生率11.11%(17/153),正常人发生率4%(2/50)。结论:荧光定量PCR染料法能够快速准确检测HLA-B*5801,检测结果与测序方法完全一致。 展开更多
关键词 荧光定量聚合反应 染料 HLA-B*5801 灵敏度 特异度
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FQ-PCR检测乙型肝炎病毒DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值
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作者 柯秋莉 梁晓芳 户丹 《临床医学研究与实践》 2024年第23期110-113,共4页
目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值。方法选择2021年1月至2023年10月本院接收的82例疑似乙肝患者作为研究对象,均通过FQ-PCR实施HBV-DNA检测,同... 目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值。方法选择2021年1月至2023年10月本院接收的82例疑似乙肝患者作为研究对象,均通过FQ-PCR实施HBV-DNA检测,同时予以时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项[乙肝病毒核心抗体(HBcAb)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)],并分析检测结果。结果82例患者中,HBV-DNA阳性率为70.73%(58/82)。82例患者中,组合A(HBcAb+HBeAg+HBsAg阳性)占比91.46%(75/82),组合B(HBeAb+HBsAg阳性)占比63.41%(52/82),组合C(HBcAb+HBeAb+HBsAg阳性)占比37.80%(31/82),组合D(HBcAb+HBeAb+HBsAb阳性)占比6.10%(5/82),组合E(HBeAg+HBsAg阳性)占比64.63%(53/82)。组合A、组合B、组合C、组合D、组合E中HBV-DNA阳性率分别为53.33%(40/75)、7.69%(4/52)、29.03%(9/31)、40.00%(2/5)、5.66%(3/53),组合A中HBV-DNA阳性率均高于其他各项组合,差异具有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR检测HBV-DNA联合时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项诊断乙肝的准确度、灵敏度高于单独FQ-PCR检测HBV-DNA及时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在乙肝诊断中,FQ-PCR检测HBV-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项各具优势,积极联合应用有助于进一步提升诊断效能。 展开更多
关键词 荧光定量聚合反应 乙型肝炎病毒DNA 时间分辨免疫荧光 乙肝五项
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实时荧光定量聚合酶链反应在HBV YMDD基因变异检测中的应用 被引量:4
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作者 刘兴态 郑霞 +1 位作者 汪亚洲 秦军 《检验医学与临床》 CAS 2012年第9期1091-1092,共2页
目的以DNA测序法为标准,探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测乙型肝炎(下称乙肝)病毒YMDD基因变异的敏感性和特异性。方法选取68例乙肝患者经拉米夫定治疗前及治疗9个月后其血清采用荧光定量PCR技术联合检测HBV DNA及YMDD变异,... 目的以DNA测序法为标准,探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测乙型肝炎(下称乙肝)病毒YMDD基因变异的敏感性和特异性。方法选取68例乙肝患者经拉米夫定治疗前及治疗9个月后其血清采用荧光定量PCR技术联合检测HBV DNA及YMDD变异,并随机选取10例(5例实时荧光定量PCR提示YMDD变异;5例提示未变异)慢性乙肝患者做DNA测序,分析二者的检测结果。结果拉米夫定治疗前HBVDNA的载量,两组相比差异无统计学意义(P>0.05),9个月后YMDD的变异率为14.7%(10/68);YMDD变异型组HBV DNA无l例阴转,YMDD野生型组HBV DNA阴转率为79.3%(46/58),差异有统计学意义(P<0.01);10例测序法所测结果与实时荧光定量PCR完全相符,总符合率为100.0%。结论实时荧光定量PCR技术联合检测HBV DNA及YMDD变异具有很好的临床应用前景。 展开更多
关键词 实时荧光定量聚合反应 测序 拉米夫定 YMDD变异
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实时荧光定量聚合酶链反应原理和在预防兽医学中的应用及研究进展 被引量:2
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作者 曹军平 刘秀梵 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2008年第7期56-57,共2页
聚合酶链反应(PCR)是检测核酸的强力方法。由于PCR技术简便易行、灵敏度高等优点,该技术被广泛应用于基础研究.成为分子生物学必不可少的研究工具。由于传统的PCR技术存在不能准确定量.且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点... 聚合酶链反应(PCR)是检测核酸的强力方法。由于PCR技术简便易行、灵敏度高等优点,该技术被广泛应用于基础研究.成为分子生物学必不可少的研究工具。由于传统的PCR技术存在不能准确定量.且操作过程中易污染而使得假阳性率高等缺点.使其应用受到局限。对PCR产物进行准确定量成为PCR技术发展的重要方向。 展开更多
关键词 聚合反应 预防兽医学 应用 反应原理 荧光定量 pcr技术 分子生物学
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实时荧光定量聚合酶链反应技术及应用 被引量:2
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作者 赵紫琴 陆凤先 《中国药物与临床》 CAS 2006年第4期248-251,共4页
关键词 实时荧光定量聚合反应技术 耐热DNA聚合 Green pcr) RQ-pcr 荧光标记引物 DNA嵌合剂 杂交探针 SYBR CHAIN
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实时荧光定量聚合酶链反应技术及细胞培养法在流感病毒检测中的应用价值 被引量:1
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作者 罗周正 张丽艳 +1 位作者 李贺 杜波 《中国医药指南》 2020年第26期47-48,共2页
目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术及细胞培养法在流感病毒检测中的应用价值。方法选取2013年1月至2018年12月阜新市哨点医院采集的4026份疑似流感咽拭样本作为研究对象,先后采用不用的检验方式进行检测,研究组采用实时荧光定... 目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术及细胞培养法在流感病毒检测中的应用价值。方法选取2013年1月至2018年12月阜新市哨点医院采集的4026份疑似流感咽拭样本作为研究对象,先后采用不用的检验方式进行检测,研究组采用实时荧光定量PCR法,对照组采用细胞培养法,比较两种检测方法对流感病毒携带者样本临床分型阳性率的检测效果。结果研究组检出阳性样本512份。其中,检出新甲H1型149份,对照组分离毒株62株;研究组H3亚型206份,对照组分离毒株109株;研究组B型157份,对照组分离毒株97株,各组均未检出H5、H7、H9亚型。研究组检出阳性样本总数与对照组毒株总数呈正相关,且新甲H1型、H3型、B型与毒株分别呈正相关(P <0.05)。研究组检出流感病毒阳性率为25.68%,对照组检出流感病毒阳性率为6.66%,差异有统计学意义(P <0.05)。结论实时荧光定量PCR技术对流感病毒检测的速度更快,灵敏度更高,具有较高的临床应用价值。 展开更多
关键词 流感病毒 实时荧光定量 聚合反应 细胞培养 检验价值
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荧光定量聚合酶链反应技术检测痰结核分枝杆菌DNA及其临床应用研究 被引量:5
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作者 唐林国 谭耀驹 +2 位作者 何聚莲 张宇青 陈江华 《医学研究通讯》 2005年第7期34-36,共3页
目的探讨荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术在肺结核诊断中的临床价值。方法对144例活动性肺结核的痰及30例健康对照者的痰进行 FQ-PCR 检测,并与痰涂片检查法、改良罗氏培养法结果进行比较。结果 FQ-PCR... 目的探讨荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)技术在肺结核诊断中的临床价值。方法对144例活动性肺结核的痰及30例健康对照者的痰进行 FQ-PCR 检测,并与痰涂片检查法、改良罗氏培养法结果进行比较。结果 FQ-PCR 检测痰结核分枝杆菌阳性率、痰涂片抗酸检查法阳性率、改良罗氏培养法阳性率分别为61.1%(88/144)、51.4%(74/144)、55.6%(80/144),以 FQ-PCR 检测痰结核分枝杆菌阳性率为最高,FQ-PCR 检测特异性为100%。结论 FQ-PCR 技术检测痰结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性,该方法快速、准确,对肺结核的诊断有一定价值。 展开更多
关键词 荧光定量聚合反应 结核分枝杆菌DNA 临床应用研究 fq-pcr检测 pcr技术检测 活动性肺结核 肺结核诊断 痰涂片检查 阳性率 临床价值 培养 特异性 敏感性 改良
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荧光定量聚合酶链反应检测血清中HBV-DNA
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作者 许丽艳 敬华 +1 位作者 杨晋德 刘春雷 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期515-516,共2页
目的 :研究荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测HBV DNA对辨别病毒复制的临床意义。方法 :采用FQ PCR和ELISA方法 ,检测 79例患者血清HBV DNA拷贝数和免疫学血清指标。结果 :2 6例HBsAg、HBeAg、抗 HBc均阳性的标本 ,HBV DNA也全部阳性 ... 目的 :研究荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)检测HBV DNA对辨别病毒复制的临床意义。方法 :采用FQ PCR和ELISA方法 ,检测 79例患者血清HBV DNA拷贝数和免疫学血清指标。结果 :2 6例HBsAg、HBeAg、抗 HBc均阳性的标本 ,HBV DNA也全部阳性 ,平均拷贝数为 2 .7× 10 5/mL。 8例HBsAg、HBeAg阳性的标本 ,HBV DNA也全部阳性 ,平均拷贝数为5 .2× 10 4/mL。 2 1例HBsAg、抗 HBe、抗 HBc均阳性的标本HBV DNA阳性率为 6 6 .7% ,平均拷贝数为 3.1× 10 4/mL。 9例HBsAg阳性的标本HBV DNA阳性率为 11%。平均拷贝数为1.4× 10 3 /mL。结论 :荧光定量聚合酶链反应检测HBV DNA可以更加准确地判断HBV的感染和复制情况。 展开更多
关键词 HBV-DNA pcr ELISA 荧光定量聚合反应 病毒复制 血清检测
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酶联免疫吸附法与荧光定量聚合酶链反应法比较与意义
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作者 刘春云 赵露 《医学信息(下旬刊)》 2009年第8期217-217,共1页
目的:通过对乙型肝炎病毒酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应法(FQ—PCR)二者的分析解释和相互比较,提示二者的相关性。方法:分别对我院用酶联免疫吸附法(ELISA)检出的血清标本HBsAg阳性和阴性两组标本进行荧光定量... 目的:通过对乙型肝炎病毒酶联免疫吸附法(ELISA)和荧光定量聚合酶链反应法(FQ—PCR)二者的分析解释和相互比较,提示二者的相关性。方法:分别对我院用酶联免疫吸附法(ELISA)检出的血清标本HBsAg阳性和阴性两组标本进行荧光定量聚合酶链反应法(FQ—PCR)HBV—DNA的检测。结果:HBsAg(+)和抗-HBc(+)检出率100%;HBsAg(+)、抗-HBe(+)和抗-HBc(+)检出率60%;HBsAg(+)和抗-HBc(+)检出率54%;46例(46%)HBV—DNA阴性。结论:两种方法在试验中各有优势,互为补充,在临床检验中应该两者结果综合分析。 展开更多
关键词 联免疫吸附 荧光定量聚合反应 比较与意义
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荧光定量聚合酶链反应检测献血员HCMV-DNA
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作者 叶冬青 郝加虎 +3 位作者 黄芬 胡兆平 蒋作君 余新炳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第5期57-60,共4页
目的 了解献血员血清中HCMV核酸含量。方法 采用FQ -PCR法定量检测 36 3例献血员的血清标本。结果 经FQ -PCR检测 ,血清标本HCMVDNA平均拷贝数为 1 2× 10 5基因拷贝 /μl。献血员的血清HCMV含量在不同性别及职业、文化程度、经... 目的 了解献血员血清中HCMV核酸含量。方法 采用FQ -PCR法定量检测 36 3例献血员的血清标本。结果 经FQ -PCR检测 ,血清标本HCMVDNA平均拷贝数为 1 2× 10 5基因拷贝 /μl。献血员的血清HCMV含量在不同性别及职业、文化程度、经济水平、献血次数、献血年限、ALT水平、是否定期献血组间均差异无显著性 ,只是在不同年龄段之间有差别。以FQ -PCR为“金标准” ,发现ELISA法灵敏度为 6 7 89% ,特异度为 93 16 % ,阳性预测值为 95 4 3%。结论 FQ -PCR能够避免PCR后处理导致的假阳性污染 。 展开更多
关键词 HCMV-DNA 荧光定量聚合反应 人巨细胞病毒 献血员 fq-pcr
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荧光定量聚合酶链反应检测沙眼衣原体
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作者 吴年浪 张惠成 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2003年第1期46-46,共1页
沙眼是一种由沙眼衣原体引起的常见病,多发病.目前由于抗生素的应用,临床表现多不典型,易漏诊误诊.
关键词 荧光定量聚合反应 检测 沙眼衣原体 pcr DNA 沙眼
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TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应在强直性脊柱炎IL-2RαmRNA检测的应用价值
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作者 骆方军 吕建新 《检验医学教育》 2005年第1期36-40,共5页
目的:利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平,并进行疾病的活动性相关分析。方法:用 Primer Express v2.0软件,根据GenBank提供的序列,... 目的:利用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞白细胞介素-2受体α(IL-2Rα)mRNA的表达水平,并进行疾病的活动性相关分析。方法:用 Primer Express v2.0软件,根据GenBank提供的序列,在人IL-2Rα mRNA的第2和第3外显子之间设计一对引物和一条TaqMan探针。提取总RNA,加入已优化的一步法FQ-RT-PCR反应体系,扩增产物经凝胶电泳后切胶回收,并与pUCm-T载体连接。制备好的重组质粒转化感受态细胞进行克隆。经测序分析确定为特异性片段后,用T7RNA聚合酶转录为cRNA,作为FQ-RT-PCR系列浓度标准品。评价FQ-RT-PCR检测 IL-2Rα mRNA的特异性、线性、精密度和探针稳定性等。定量测定HLA-B27阳性活动组与阴性非活动组强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞IL-2Rα mRNA基因的表达水平,结合血浆可溶性白细胞介素-2受体 (sIL-2R)浓度,探讨与炎症活动的相互关系。结果:成功构建了cRNA标准品。该方法的线性范围为7~107 cells/ml,其批内CV8.4%,批间CV9.6%;扩增产物克隆的双向测序结果经BLAST比较、分析,证实为IL- 2Rα mRNA特异性片段。对各30例HLA-B27阳性与阴性的强直性脊柱炎的测定表明:与正常人对照组结果比较,HLA-B27阳性组与HLA-B27阴性组IL-2Rα mRNA和sIL-2R都有明显增加(P<0.01)。IL-2Rα mRNA对炎症活动评价的灵敏度为96.7%。结论:FQ-RT-PCR具有灵敏、特异、结果重复性好等优点;IL- 2Rα mRNA与sIL-2R比较更能反映强直性脊柱炎患者的免疫状态,可能为免疫药物的疗效评价和药物筛选提供基因表达水平上的信息。 展开更多
关键词 实时荧光定量逆转录聚合反应 IL-2RΑ 强直性脊柱炎 TaqMan mRNA检测 应用价值 可溶性白细胞介素-2受体 外周血单个核细胞 sIL-2R Express pcr反应体系 特异性片段 RNA聚合 MRNA基因 基因表达水平 扩增产物 cRNA
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