胶体硒法HIV快速检测与实时荧光定量PCR法检验的一致性研究

目的:探究胶体硒法人类免疫缺陷病毒(HIV)快速检测与实时荧光定量PCR法检验的一致性。方法:选取2020年1月—2021年1月到艾滋病自愿咨询检测(VCT)门诊就诊的987例患者为研究对象,均接受胶体硒法、实时荧光定量PCR法检验,以免疫印迹法为金标准,比较不同检测方式的诊断效能、不同检测方式之间检验的一致性,对比不同方式对“窗口期”弱阳性抗体检测情况及不同检测方式的一致性。结果:987例疑似HIV高感染风险患者中,经免疫印迹法检测发现,373例阳性,614例为阴性;胶体硒法与实时荧光定量PCR法比较无统计学差异(P>0.05)。胶体硒法诊断结果与免疫印迹法诊断结果之间具有一致性(Kappa值=0.539),等级为中度;实时荧光定量PCR法与免疫印迹法诊断结果之间具有一致性(Kappa值=0.872),等级为高度;经免疫印迹法检测45份“窗口期”弱阳性抗体实时荧光定量PCR法检测43例阳性,胶体硒法检测42例阳性,实时荧光定量PCR法的灵敏度、准确度均显著高于胶体硒法(P<0.05)。胶体硒法与实时荧光定量PCR法胶在“窗口期”弱阳性抗体诊断结果中的一致性较差(Kappa值=0.357)。结论:胶体硒法与实时荧光定量PCR法对HIV检测的效果具有一致性,实时荧光定量PCR法准确性略高;胶体硒法与实时荧光定量PCR法在“窗口期”弱阳性抗体诊断结果中的一致性较差,实时荧光定量PCR法在“窗口期”弱阳性抗体血清检测中具有较高的检测价值。

刍议活动性肺结核早期检验中半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法的应用研究

目的评估半巢式全自动实时荧光定量PCR检测与涂片抗酸染色法在活动性肺结核早期检验中的应用效能。方法选取2022年9月—2023年9月于平邑县结核病防治所就诊的90例疑似肺结核患者为研究对象,采用Xpert MTB/RIF技术、涂片抗酸染色法检验及简单法固体培养法同时检测90例疑似肺结核患者痰标本,对检测结果进行比较。结果以固体培养结果作为金标准,痰培养阳性率85.56%,阴性率14.44%。Xpert MTB/RIF阳性率84.44%、阴性率15.56%。涂片抗酸染色法检验阳性率48.88%、阴性率51.11%。Xpert MTB/RIF检验的灵敏度97.40%、准确度96.67%、阳性预测值98.68%以及阴性预测值85.71%均高于涂片抗酸染色法检验50.64%、52.22%、88.64%、17.39%,差异有统计学意义(χ^(2)=43.768、46.722、5.922、22.546,P均<0.05)。结论与涂片抗酸染色法相比,在活动性肺结核早期检验中采用半巢式全自动实时荧光定量PCR检测(Xpert MTB/RIF)的应用效能更高。

荧光定量PCR法与培养法检测解脲支原体结果比对分析

目的通过比较荧光定量PCR法(qPCR)和培养法在解脲支原体(UU)检测中的符合率,为临床解脲支原体检测方法的选择提供参考依据。方法收集近期就诊于该院112例患者的生殖道分泌物标本,分别采用qPCR法与培养法检测UU。结果在112例标本中,UU培养法阳性53例,阳性率为47.32%,qPCR法阳性61例,阳性率54.46%(χ2=1.143,P=0.285>0.05)。61例qPCR法阳性的UU浓度范围1.60×10^(3)-1.04×10^(7)copy/mL,其中10^(3)copy/mL 12例(19.7%),10^(4)copy/mL 15例(24.6%),10^(5)copy/mL 22例(36.1%),10^(6)copy/mL 9例(14.7%),10^(7)copy/mL 3例(4.9%)。培养法阴性而qPCR法阳性病例9例,qPCR法测定浓度范围10^(3)~10^(5)copy/mL。结论qPCR法检测UU的阳性率略高于培养法,两种方法不符合结果的UU测定浓度分布在10^(3)-10^(5)copy/mL之间。

实时荧光PCR法血清分型与全面生化反应对沙门氏菌的临床检验价值

目的:分析实时荧光PCR法血清分型与全面生化反应对沙门氏菌的临床检验价值。方法:选取医院2021年1月—2023年6月期间收治的疑似为沙门氏菌感染的患者100例,将患者粪便标本采用全面生化反应检验法,以传统微生物检验法为对照,比较两种检验方法的检出率;再分别采用传统玻片血清凝集分型法和实时荧光PCR法血清分型将鉴定出的沙门氏菌进行血清学分型,通过统计学分析方法比较两种分型方法的符合率。结果:全面生化反应检验诊断沙门氏菌的检出率(62.00%)较微生物检验法(54.00%)高,但差异无统计学意义(P>0.05);全面生化检验对沙门氏菌的诊断敏感度为95.08%、阴性预测值为92.11%,均高于微生物检验法的81.97%、76.09%,差异有统计学意义(P<0.05)。与传统玻片血清凝集分型检验相比,分子血清分型试剂盒检验对沙门氏菌血清学分型的检出符合率高(Kappa值=0.842)。全面生化反应检验、实时荧光PCR法血清分型的检验时间均短于微生物检验法、玻片血清凝集法(P<0.05)。结论:沙门氏菌临床检验中全面生化反应检验与实时荧光PCR法血清分型检验均有一定价值,若将两种方法联合应用可快速检出沙门氏菌,且能对细菌进行准确分型。

乙肝肝炎病毒检测中荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光的对比分析

探析荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光在乙肝肝炎病毒检测中的应用效果。方法 选用96例疑似乙肝患者,均进行荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光病毒检测,以细菌培养作为金标准,比较不同检测手段的阳性检出率、检验结果及检测效能。结果 荧光定量PCR法的检测符合率、灵敏度,高于时间分辨免疫荧光法,而特异度低于时间分辨免疫荧光法。结论 荧光定量PCR法和时间分辨免疫荧光两种方法各有优缺点,适用于不同的检测环境和需求。在实际应用中,需要根据检测要求和实际情况进行选择,确保有效性和准确性。

活动性肺结核早期检验中荧光定量检验PCR与涂片抗酸染色法的价值分析

目的探讨活动性肺结核早期检验中荧光定量检验PCR与涂片抗酸染色法的价值。方法80例肺结核患者入院后均收集痰标本分别进行荧光定量检验PCR与涂片抗酸染色法检测。以临床诊断结果为金标准,比较两种诊断方法对活动性肺结核的诊断效能。采用κ检查分析荧光定量检验PCR及涂片抗酸染色法与金标准的一致性。结果80例肺结核患者经临床诊断确诊活动性肺结核70例,非活动性肺结核10例。κ检验分析结果显示,荧光定量检验PCR检查结果与金标准的一致性较好(κ=0.940,P<0.05);涂片抗酸染色法检查结果与金标准的一致性中等(κ=0.591,P<0.05)。荧光定量检验PCR诊断活动性肺结核的灵敏度(100.00%vs.75.71%)、特异度(90.00%vs.20.00%)及准确度(98.75%vs.68.75%)均高于涂片抗酸染色法(P<0.05)。结论荧光定量检验PCR对活动性肺结核早期检验的诊断效能较高,适合作为该类疾病临床鉴别诊断的优先选择。

结核分枝杆菌复合群检验中应用荧光定量PCR方法的临床价值

目的对荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法检验结核分枝杆菌复合群的效果做出分析。方法选取2022年3月—2023年5月在长春市传染病医院诊治的疑似结核患者118例作为研究对象,共计156份临床样本,以实验室培养为金标准,对荧光定量PCR法的检验结果进行分析。结果在118例疑似结核患者中,经荧光定量PCR法检测,其阳性检出率为64.10%,与实验室培养检查结果相比,差异无统计学意义(χ^(2)=2.078,P>0.05);经荧光定量PCR法检测,其准确度、特异度、灵敏度分别为97.44%、100.00%、96.15%。结论为结核可疑患者使用荧光定量PCR法进行检测,可获取较高的检测准确度,且灵敏度和特异度均较高,临床应用价值较高。

荧光定量PCR法在乙型肝炎病毒检测中的准确性评价

目的分析荧光定量聚合酶链式反应法(FQ-PCR)应用在乙型肝炎病毒(HBV)检测中的准确性。方法选择2020年1月-2021年6月接诊的100例HBV携带者,均行FQ-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)检测,对比二者检测结果。结果100例HBV携带者中“大三阳(模式1)”共24例,HBV-DNA含量平均为(8.24±1.12)copy/mL,阳性率为95.83%(23/24),均显著高于其他6种模式(P<0.05);100例HBV携带者中"小三阳(模式2)"共31例,HBV-DNA阳性率为83.87%(26/31),均显著高于3,4,5,6,7模式(P<0.05);而其他模式在HBV-DNA阳性率及含量方面均无明显差异(P>0.05)。结论与ELISA相比较,FQ-PCR更能定量反映HBV复制、感染状况,有助于早期确诊乙型病毒性肝炎,以及判断传染性质与监测病情,值得推广。

荧光定量PCR作为猪瘟兔化弱毒疫苗效价检验替代方法的研究与应用

【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),为猪瘟兔化弱毒疫苗的效力检验提供一替代方法。【方法】在猪瘟兔化弱毒疫苗基因组3′非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒株的特异性引物和一条MGB探针,并进行反应体系及反应条件优化,以及特异性、灵敏度、稳定性及符合性试验。将此方法用于部分批次疫苗厂疫苗半成品的定量检验,与兔热反应进行比较,寻求两方法的相关性。【结果】试验结果证实,CT值与模板之间呈现良好的相关性,相关系数为0.9998,扩增效率为101.14%;该方法仅扩增HCLV,不扩增HCLV以外的其它病原,显示良好的特异性;具有较高的灵敏度,能检测模板中4.35个cDNA拷贝量,比CSFV-RT-nPCR高1个数量级。将此方法应用于4个厂家17个批次的34份猪瘟兔化弱毒疫苗效力检验,两只兔子均无热反应(不合格)样品共11份,FQ-PCR CT值为21.15—27.30;两只兔子一只呈现定型热,一只无热反应的样品12份,CT值为17.47—23.70;两只兔子都呈现定型热或者一只呈现定型热一只呈现轻热反应(合格品)样品共11份,CT值为17.10—20.8。【结论】建立的HCLV-FQ-PCR方法能特异性的检测疫苗核酸含量,与家兔热反应测定结果存在良好的相关性,可以用于猪瘟疫苗半成品中HCLV定量检测。

毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法在ALRTI患儿咽拭子标本病原体诊断中的应用对比观察

目的毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法在急性下呼吸道感染患儿咽拭子标本病原体诊断中的应用。方法急性呼吸道感染患儿65例(65份咽拭子标本),分别采用毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法检测患儿咽拭子病原体,比较两种方法病原体检出率,并分析两种检测方法与金标准(Sanger测序法)检测结果的一致性。结果毛细管电泳片段分析法病原体检出率为52.3%(呼吸道合胞病毒21份、副流感病毒4份、衣原体病毒2份、腺病毒2份、鼻病毒2份、偏肺病毒3份、博卡病毒1份,其中1份为合胞病毒与鼻病毒混合感染),荧光定量PCR法病原体检出率为45.0%(呼吸道合胞病毒20份、副流感病毒3份、衣原体病毒2份、腺病毒1份、鼻病毒1份),两种方法病原体检出率比较,P>0.05。毛细管电泳片段分析法与Sanger测序法检测结果阳性一致率为100.0%,阴性一致率为100.0%,准确率为100.0%;荧光定量PCR法与Sanger测序法检测结果阳性一致率为86.2%,阴性一致率为93.5%,准确率为90.0%。结论毛细管电泳片段分析法与荧光定量PCR方法病原体检出率无差异,但毛细管电泳片段分析法能检测出病原菌混合感染,且与Sanger测序法检测结果有高度一致性,有更高的临床应用价值。

基于实时荧光定量PCR的番木瓜多重PCR高效检测方法

以pCaMV35S基因核酸检测试剂盒反应体系为基础,添加多重PCR反应所需的目标基因引物和番木瓜(Carica papaya L.)DNA,进行多重PCR反应,同时考察不合成荧光探针的情况下对目标基因进行实时荧光定量检测。结果表明,在实时荧光定量PCR反应体系中,多重PCR扩增的基因条带比常规PCR扩增的基因条带更亮,在不合成荧光探针的情况下实现目标基因的实时荧光定量PCR反应,以期建立一种基于实时荧光定量PCR的多重PCR检测方法。

荧光定量PCR方法在结核分枝杆菌复合群检验中的应用研究

研究实验室荧光定量PCR检验对结核病患者复合群检的效果。方法 对我院130例符合实验要求的结核病患者进行荧光定量PCR及培养法、涂片法检验,比较不同方式的检出情况。结果 采用实时荧光PCR检验方法的检出阳性率明显高于培养法与涂片法阳性率,组间数据有明显差异(P<0.05)。结论 结核病患者的病菌感染症状相对不明显,通过常规检验方法的复合群检验效果存在一定的偏差,而利用荧光定量PCR检验的检出效果更高,对提高患者阳性检出率有着重要作用,值得临床重视。

荧光染色与实时荧光定量PCR法检测在肺结核辅助诊断中的应用效果分析

探究肺结核辅助诊断中最有效的方式。方法 样本选取时间:(2021年1月-2022年6月);样本选取对象:疑似肺结核患者800例;以肺结核基层诊疗指南(实践版·2018)为金标准。分析诊断结果。结果 诊断结果:800例疑似患者中,阳性324例,阴性476例。荧光染色检测:真阳304例、假阳29例、真阴447例、假阴20例;实时荧光定量PCR法:真阳305例、假阳25例、真阴451例、假阴19例;联合:真阳314例、假阳1例、真阴475例、假阴10例。与荧光染色、实时荧光定量PCR法检测相比,联合方式诊断准确性、诊断灵敏性、特异性更高(P<0.05)。结论 荧光染色与实时荧光定量PCR法检测联合诊断肺结核具有较高的诊断效能,可实现早诊断、早治疗,临床应用价值显著,可继续推广及应用。

荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法在肠道致病菌检测中的应用效果

目的 探究在肠道致病菌检测中,应用荧光定量PCR法与常规细菌鉴定法的临床效果,并对之展开分析和探讨。方法 本次研究将时间定为2019年1月1日-2021年12月31日,纳入研究的参与对象为:上述时间段内,某医院收集的腹泻患者1286例资料。所有参与患者都进行了粪便采集和检测,检测方法为荧光定量PCR法和常规细菌鉴定法。对检测结果实施详细记录与分析。结果 所有粪便标本中,应用常规细菌检测出沙门菌21例,阳性率为1.63%,志贺菌50例,阳性率为3.88%;应用荧光定量PCR检测的沙门菌与志贺菌病例分别为23例、53例,阳性率分别为1.79%、4.11%。且将荧光定量PCR检测出的感染患者,应用常规细菌再次检测,检测结果完全相符,阳性率为100.00%。结论 荧光定量PCR检测法具有独特优势,不仅能够直接将粪便中的DNA快速提取,对致病菌进行准确判断,同时操作快速、简单,是一种可大范围推广应用的检测方式。

烟草花叶病毒实时荧光定量PCR检测体系的构建

[目的]防止隐症携带烟草花叶病毒(TMV)的烟苗移栽到大田造成产量损失。[方法]根据TMV的外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计引物及探针,通过绘制标准曲线、重复性、特异性及灵敏性分析,建立了一种TMV的TaqMan-qPCR检测方法。[结果]该方法特异性好,与其他常见的烟草病毒无交叉反应;灵敏度高,检测下限可达到4.53×10^(1) copies/μL,比常规RT-PCR检测灵敏度提高了10倍;建立的标准曲线斜率为-3.299,决定系数(R^(2))为0.9933,扩增效率为100.97%,且循环阈值(Ct)与质粒标准品浓度之间线性关系良好,重复性试验结果可靠。[结论]利用建立的TaqMan-qPCR检测方法与常规RT-PCR检测方法同时检测烟苗样品,检测结果一致,进一步验证了荧光定量PCR方法的可靠性。

酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR法检验EB病毒的效果比较

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)为具传染性单核细胞增多症病原体,与鼻咽癌、儿童淋巴瘤发生发展密切相关[1]。该病主要通过唾液传播,一般发生于幼儿,经口咽上皮细胞增殖后,引发B淋巴细胞感染,后进入血液循环引发全身性感染,急性期主要表现为咽炎、发热、淋巴结炎等上呼吸道感染症状,急性期后会持续发生低热、疲劳等症状,尤其免疫缺陷者感染EB病毒后死亡风险较高,因此需尽早鉴别诊断,并实施针对性治疗,以快速改善患者临床症状,保障其生命安全[2-3]。

荧光定量PCR方法在结核分枝杆菌复合群检验中的应用价值

目的分析利用荧光定量PCR方法检测结核分枝杆菌复合群。方法选取2019年6月至2020年6月医院接收436例结核可疑患者共计470份临床样本(其中414份为肺内样本,56份为肺外样本),以实验室培养为金标准,分析荧光定量PCR法的检验结果,并观察荧光定量PCR方法检测结核分枝杆菌复合群的灵敏度与特异度。结果在414份肺内样本中,培养阳性共计60份,培养阴性共计354份,荧光定量PCR检测中灵敏度为97.8%,特异度为97.5%;在56份肺外样本中,培养阳性共计12份,培养阴性共计44份,荧光定量PCR检测中灵敏度为100.0%,特异度为94.4%。以本研究总样本的培养结果来看,荧光定量PCR检测中灵敏度为98.2%,特异度为97.2%。结论荧光定量PCR方法在结核分枝杆菌复合群临床检验中具有较高的灵敏度与特异度,值得推广应用。

实时荧光定量PCR和测序法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较

背景与目的以厄洛替尼(Erlotinib)为代表的小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂在治疗非小细胞肺癌已经取得很好的疗效。许多研究发现表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变与酪氨酸激酶抑制剂的疗效密切相关。本研究目的是通过比较荧光定量PCR(Real-time PCR)和DNA测序法检测EGFR基因突变的一致性,建立适用于临床的EGFR基因突变检测方法。方法应用荧光定量PCR(Real-time PCR)及DNA测序法检测103例非小细胞肺癌标本的EGFR外显子19和21的基因突变,结果比较采用卡方检验。结果两种方法对EGFR外显子19和21的基因突变的检测结果无统计学差异,且荧光定量PCR法比测序法更快捷和灵敏。结论与测序法相比,荧光定量PCR更适用于临床检测。

TaqMan探针法实时荧光定量PCR检测西瓜潜隐病毒

【目的】西瓜潜隐病毒(Citrullus lanatus cryptic virus,CiLCV)是近年来新发生的一种重要种传病害,研究旨在建立基于TaqMan探针法的实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR with TaqMan probes,TaqMan-qPCR)检测技术,为开展种子、种苗带毒鉴定和病害防控提供技术支撑。【方法】通过基于小RNA高通量测序技术在北京西瓜产地发现了CiLCV,并克隆CiLCV的dsRNA1和dsRNA2全长序列,设计特异性引物建立RT-PCR和TaqMan-qPCR检测方法。以黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottled mosaic virus)、黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus)、甜瓜内源病毒(Cucumis melo endornavirus)、瓜类褪绿病毒(cucurbit chlorotic yellows virus)、南瓜花叶病毒(squash mosaic virus)、番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt virus)、西瓜花叶病毒(watermelon mosaic virus)、小西葫芦黄花叶病毒(zucchini yellow mosaic virus)8种常见病毒为对照进行检测方法特异性分析;利用建立的实时荧光定量标准曲线对方法灵敏度进行评价;进一步利用TaqMan-qPCR和RT-PCR技术监测我国葫芦科作物主产区的西瓜、黄瓜、甜瓜和南瓜(砧木)种苗带毒情况。【结果】通过分析获得的高质量小RNA数据,发现17条组装的contig与CiLCV基因组有较好同源性。进一步克隆获得CiLCV的dsRNA1和dsRNA2序列全长(分别为1603和1466 nt),发现其与河南省鉴定出的CiLCV同源性高达99.4%和99.8%(GenBank number KY081285、KY081284)。建立的RT-PCR检测技术对CiLCV有单一扩增条带;建立的TaqMan-qPCR检测技术具有较好特异性和灵敏度,且能够检测到最低拷贝数为2×10^(3)的病毒,灵敏度是RT-PCR的100倍。同时,发现有1份来自北京的西瓜种苗检出了CiLCV,而其余地区的西瓜、黄瓜、甜瓜和南瓜(砧木)种苗均未检出该病毒,表明我国葫芦科作物主产区种苗带毒情况总体不高。【结论】建立的TaqMan-qPCR检测CiLCV技术特异性强、灵敏度高,适用于口岸和实验室开展CiLCV快速检测和精准鉴定。鉴于CiLCV可以通过种子、种苗等传播方式快速扩散,我国应重视种子、种苗的带毒检测,防止带毒种子、种苗流入生产环节进而调运扩散至全国,给产业造成重大经济损失。