生鲜乳中16种致病微生物多重荧光定量PCR集成检测技术的建立与初步应用

为满足生鲜乳中微生物快速通量检测的需求,建立多重荧光定量PCR集成方法,从而快速检测生鲜乳中潜在的16种致病微生物,通过设计致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌等目标菌株的特异性引物和探针,优化反应体系,验证方法的特异性、敏感性等,建立了稳定的4组多重集成荧光定量PCR反应体系,并利用人工污染的生鲜乳样品对所建立的方法和传统培养法进行了验证比较。结果显示:各对引物探针对目标菌株均能有效识别并扩增,每组体系中引物探针未发现交叉反应,对其余3组体系的12株非目标菌均未有特异性反应;组内和组间变异系数均低于3%;该方法对布鲁氏菌的最低检出限为10^(2) CFU/mL,对阪崎肠杆菌、志贺菌、沙门菌等7种致病微生物的最低检出限为10^(3) CFU/mL,对蜡样芽胞杆菌、弯曲杆菌、结核分枝杆菌等8种致病微生物的最低检出限为10^(4) CFU/mL;所建方法和传统培养法对人工污染不同致病菌的各25份样品检测结果基本一致。结果表明,本研究建立的多重集成荧光定量PCR方法灵敏度高,特异性及重复性好,可实现对生鲜乳样品中多种致病微生物的快速高效检测,为生鲜乳微生物性风险监测提供了技术支撑。

荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的对比研究

目的对比荧光定量核酸扩增检测技术与环介导等温扩增技术在呼吸道感染病原体检测中的应用价值。方法随机在2020年1月~2023年1月天津市河东区疾病预防控制中心接收的呼吸道感染的患者中选取120例作为研究对象,分别采用荧光定量核酸扩增(PCR)检测技术与环介导等温扩增技术(LAMP)检测呼吸道病原体,并对检测结果进行比较分析。结果120例患者中使用LAMP检出细菌感染85例(阳性率为70.83%)。荧光定量PCR检出细菌感染72例(阳性率60.00%),差异无统计学意义(P>0.05);其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法,差异有统计学意义(P<0.05);采用荧光定量PCR与LAMP法对呼吸道感染10种病原体进行检测,结果表明,除LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、流感嗜血杆菌的检测一致性极好,荧光定量PCR对耐甲氧西林葡萄球菌的检测一致性极好(Kappa≥0.75),其余病原体采用荧光定量PCR与LAMP法检测一致性均中等(0.4≤Kappa<0.75)。结论荧光定量PCR与LAMP两种检测方法对呼吸道感染病原体检出率均较高,其中LAMP法对耐甲氧西林葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌的检出率高于荧光定量PCR法。

荧光定量PCR技术在猪病防治中的应用

生猪感染疾病时会直接对养殖场或养殖户的经济造成巨大损失,因此,做好生猪疾病预防工作显得尤其重要。利用实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR技术)能有效利用微量的DNA进行扩增,提高检测精度,对猪病诊治和防治具有重要作用。一、猪病的诊断和防治现状猪病预防成效能直接影响养殖效益,在我国农村有大量的个体户进行生猪养殖,但个体农户往往缺乏足够的养殖经验,文化水平普遍偏低.

碳点荧光传感技术在替加环素定量分析领域的研究进展

旨在对碳点的发光机制及其合成方法进行深入研究,并全面总结当前利用碳点作为探针的抗菌药物分析方法的研究状况。详细介绍替加环素的定量分析以及临床快速检测的重要性,并概述其分析检测的现状与未来发展趋势。探讨碳点荧光传感技术在替加环素定量分析检测中的潜在应用价值,以期为相关领域的研究提供有益的参考。

实时荧光定量PCR技术在食品检测中的应用进展

“民以食为天,食以安为先”。近年来,食品安全事件时有发生,泰国假香米、阿斯巴甜致癌疑云、“鼠头鸭脖”等事件不断被曝光,公众对食品安全的关注度日益提高。为了保障食品安全,监管部门加强了对食品检测技术的研发和应用。在各种检测技术中,PCR技术尤其是实时荧光定量PCR,因具有更灵敏、更省时、更特异等优点,在食品安全检测领域得到了广泛应用。本文综述了实时荧光定量PCR技术的原理,及其在食品中植物源性成分、转基因成分、过敏原、动物源成分和微生物等检测中的应用进展,并对该技术未来的发展方向进行了展望,以期该技术未来在食品检测领域得到更广泛的应用。

应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术快速检测青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫耶尔森菌耐链霉素基因

目的 应用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR技术快速检测青海省海西州鼠疫自然疫源地鼠疫菌耐链霉素基因,为今后该地区突发人间鼠疫的精准临床用药提供理论依据。方法 分离培养海西地区1957—2009年间取自鼠疫患者、媒介昆虫及中间宿主的代表性鼠疫菌110株,提取其DNA,针对我国链霉素耐药基因rpsl基因设计引物P-F和P-R和TaqMan-MGB探针Probe1 [FAM]和Probe2[VIC],利用荧光定量PCR技术,进行耐药rpsl基因筛查。结果 110株被试菌株中FAM检测均为阳性(RFU峰值>2000);VIC阳性的为0株(RFU峰值<200)。阳性对照和空白对照成立。结论 实时荧光定量PCR结果显示,该地区未检测出耐链霉素菌株。

基于多重实时荧光定量PCR技术检测高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA的临床研究

目的 研究基于多重实时荧光定量PCR技术检测高危型人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA的价值。方法 选择2022年1月至2022年7月我院进行宫颈癌筛查的患者60例,分别采取多重实时荧光定量PCR技术测定高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA情况,并将病理学检查结果作为金标准,分析基于多重实时荧光定量PCR技术检测高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA的价值。结果 HPV 16、18、31、33等九类型的最低检测为10 copies/μL,但HPV 51、52、56、58等五类型最低检测是100 copies/μL。另外通过多重实时荧光定量PCR检测高危HPV E6/E7 mRNA和生殖道内常见病原菌例如大肠埃希菌、取淋病奈瑟菌、梅毒螺旋体、金黄色葡萄球菌等,其结果均显示阴性,且检测结果的特异性良好。薄层液基细胞学的检查结果与病理学检查并无差别(P>0.05)。多重实时荧光定量PCR技术的符合率91.67%(55/60),灵敏度83.33%(15/18),特异度95.24%(40/42)。结论 基于多重实时荧光定量PCR技术在HPV E6/E7 mRNA检测中意义重大,存在较高的灵敏度及特异度,可成为宫颈病变筛查的主要方式。

“一锅法”等温核酸扩增策略联合荧光定量侧流层析技术对多种细菌16S rRNA的超灵敏检测

致病菌对人类健康构成了极大的威胁,因此及时、灵敏地检测病原体是确诊感染源、预防疾病传播和改善患者治疗的关键。最近的研究表明,细菌的16S rRNA包含了种间差异信息,而典型的细菌则拥有约10000个16S rRNA拷贝。因此,使用16S rRNA作为检测模板对于低浓度病原体的即时检测(POCT)具有重大意义。

荧光定量PCR技术与酶联免疫法在手足口病肠道病毒检测中的应用价值比较

目的探讨荧光定量PCR技术(FQ-PCR)与酶联免疫法(ELISA)在手足口病肠道病毒检测中的应用价值。方法选取2021年1月至2022年12月就诊于广东省江门市妇幼保健院的疑似238例手足口病患儿,均行FQ-PCR检测与ELISA检测,统计FQ-PCR与ELISA病毒阳性检出率,以病毒分离培养及临床表现、血清实验室综合诊断结果为金标准,对比FQ-PCR与ELISA检测敏感度与特异度、准确度及检测窗口期。结果238例患儿中137例(57.56%)最终确诊为手足口病。FQ-PCR检测敏感度与特异度、准确度均高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05);FQ-PCR病毒阳性检出率较ELISA高,差异有统计学意义(P<0.05);FQ-PCR对通用型肠道病毒、Cox A16、EV71检测窗口期均短于ELISA检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论与ELISA相比,FQ-PCR在手足口病肠道病毒检测中具有更高的特异度、敏感度,可提高阳性检出率,且检测窗口期更短,利于临床早期实施治疗。

染色体核型分析、染色体拷贝数变异测序、荧光定量聚合酶链技术在产前诊断联合应用的价值

目的探讨染色体核型分析、染色体拷贝数变异测序(CNV-seq)、荧光定量聚合酶链技术(QF-PCR)在产前诊断中联合应用的价值。方法选取2022年1月至10月在茂名市人民医院产前诊断中心就诊的具有产前诊断指征的417例孕妇进行穿刺,同时做染色体核型分析、CNV-seq及QF-PCR,比较三种检测方法各自及联合检测的异常检出率及其他特殊情况。结果三种技术共检出63例异常,异常检出率为15.11%。染色体核型分析共检出29例异常核型,染色体核型异常检出率为6.95%。有17例数目异常,其中有7例47,XN,+21、4例47,XN,+18、2例47,XXY、1例45,X、3例嵌合;另有12例结构异常。CNV-seq共检出57例异常,染色体异常检出率为13.67%,其中常见非整倍体17例、大片段CNV(≥10 M)有2例、微小CNV(<10 M)有38例。明确致病性CNVs 17例,可能致病性CNVs或临床意义不明CNVs 23例。有5例异常核型CNV-seq检测为正常。QF-PCR技术共检出17例数目异常,异常检出率为4.08%。染色体核型分析、CNV-seq及QF-PCR三种技术的异常检出率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。CNV-seq检测的异常检出率高于核型和QF-PCR检测,差异有统计学意义(P<0.017);核型检测和QF-PCR检测的异常检出率比较,差异无统计学意义(P>0.017)。结论染色体核型分析有利于发现更多的染色体结构异常,CNV-seq有利于发现更多的微小缺失或重复,染色体核型分析和CNV-seq及QF-PCR在产前诊断中实现优势互补,为临床咨询提供准确的实验室依据,加强优生指导。

实时荧光定量及数字PCR技术在病毒检测中的应用及研究进展

实时荧光定量PCR是在传统PCR技术基础上发展而来的一种通过收集荧光信号来进一步检测目的基因扩增数量的定量PCR技术,较传统PCR技术有着灵敏度高,特异性高和准确度高等优点,广泛应用于病毒的快速分型,相似病毒的鉴别诊断等。同时随着微流控技术的逐渐发展,数字PCR技术以其绝对定量及更高的灵敏度准确度等优势,在病毒DNA定量检测、基因突变检测等领域得到广泛应用。本文将对两种PCR技术的原理、分类、各自在病毒检测领域中的前沿应用及优势对比进行了详细综述。

定量光导荧光技术评价CPP-ACP联合多乐氟对釉质抗酸性影响的实验研究

目的利用定量光导荧光技术,研究酪蛋白磷酸肽-无定形磷酸钙(CPP-ACP)联合多乐氟对釉质抗酸性的影响及作用。方法收集在右江民族医学院附属医院口腔科就诊正畸减数前磨牙32颗,随机分为4组,分别为去离子水组、CPP-ACP组、多乐氟组及联合组,每组8颗牙,术前使用定量光导荧光系统检测各组基线处的荧光损失量(△F)、脱矿面积(Area)、病变体积(△Q)值,去离子水组未作特殊处理,CPP-ACP组、多乐氟组、CPP-ACP联合多乐氟组实验分别进行CPP-ACP涂布、多乐氟涂布、CPP-ACP联合多乐氟涂布,将所有标本放入脱矿液中72 h,72 h后停止实验,定量光导荧光系统拍摄每组标本的荧光图像,对数据进行统计学分析。结果①脱矿前QLF值:4组各QLF变量基线值间差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性;②QLF荧光图片结果:4个不同处理组表现病损区荧光强度的损失,但病损的严重程度不一,其中联合组颊侧面形成的病损面积最少,荧光损失最轻;③脱矿后QLF值:与去离子水组比较,CPP-ACP组、多乐氟组以及联合组的早期龋病损较轻,其中联合组△F、Area、△Q最少。各组脱矿后△F、Area、△Q差异比较具有统计学意义(P<0.05);组间两两比较,各组组间△F、Area、△Q差异均具有统计学意义(P<0.05);④扫描电镜结果:原样标本釉质表面平整,无釉柱晶体溶解及孔隙结构;去离子水组呈典型酸蚀样外观;CPP-ACP组、多乐氟组、联合组釉质表面地貌均有一定程度的破坏,联合组破坏最轻。结论QLF可以作为一种对釉质早期龋矿物质含量动态变化进行定量的诊断方法;CPP-ACP、多乐氟均能抑制釉质脱矿,其中两者联合使用时抗酸效果最佳,多乐氟次之,CPP-ACP抗酸作用最弱。

三维定量荧光录井技术在乌石凹陷油层评价中的应用

针对乌石凹陷原油品质差异大、部分井钻井施工采用高荧光钻井液,常规录井难以有效识别真假油气显示及判断储层流体性质的问题,利用三维定量荧光录井技术取得该区不同品质原油样品的最佳激发波长和发射波长及油性指数,建立不同品质原油识别标准,通过油性指数、相当油含量、对比级别等三维定量荧光参数与气测录井数据结合,建立了储层流体性质判别图板。应用该图板可快速判断原油品质,并有效识别真假油气及微弱油气显示,其对储层流体性质的解释结果与实际测试及取样结果吻合率达92%,有效提高了录井对油气层的快速判断能力。

基层非洲猪瘟荧光定量PCR检测技术研究

随着现代化养猪业的快速发展,非洲猪瘟已成为全球养猪业最大的威胁之一。我国将非洲猪瘟列为重点防范的一类动物疫病,实行严格的防控措施,包括加强检测和监测、加强动物隔离和消毒、实行扑杀等紧急措施。在基层工作中,为了更快速、准确地检测非洲猪瘟病毒,多采用荧光定量PCR的检测方法。本文将围绕这个主题进行论述。

实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的实践分析

当前,随着我国科技的不断发展,科研领域创新不断增加,使我国食品工程技术进入到了一个新的阶段,在当前时代背景下,食品工程科技创新催生了转基因工程等一系列高精尖技术体系,使我国食品产业发展规模不断壮大。随着近几年我国转基因食品种植面积不断扩大,食品质量控制难度也明显提高,如果不能实现对转基因食品具体质量情况的有效检测,会对人体健康产生较为负面的影响。而实时荧光定量PCR技术则是当前我国转基因食品检测过程中经常应用的技术,因此,想要实现对转基因食品质量的有效确定,应该灵活应用此项检测技术。基于此,本文对实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的应用进行了分析。

实时荧光定量PCR技术在肉及肉制品中的运用

文章首先介绍了实时荧光定量PCR的技术原理,随后选取83份肉及肉制品的样品,设计了对照试验。对照组采用常规的细菌培养法,实验组采用了实时荧光定量PCR技术,测定样品中沙门菌、金黄色葡萄球菌等4种致病细菌的数量。结果表明,实验组检测出沙门菌17株,阳性率为20.48%,明显高于对照组(阳性率7.23%);其他3种细菌方面,实验组的检出率也明显超过了对照组,说明实时荧光定量PCR技术在肉及肉制品的污染物检测中有着更高的特异性和灵敏度。在应用这一技术时,还要注意做好肉及肉制品的前处理,以及正确选用Real-time Q-PCR检测试剂盒,才能保证检测结果的可靠性。

双重荧光定量聚合酶链反应技术在食品微生物检验中的应用

随着人民生活水平的不断提升,使得人们逐渐对食品安全产生了更高的重视程度。这一背景下,在食品进入到市场之前,需要采取各种方式对食品进行检验,以及时发现存在安全问题的食物,并禁止进入到市场中,从而向社会群众提供安全性较高的食物。双重荧光定量聚合酶链反应技术是其中较为常见的检测技术,用于对食品微生物含量的检测。基于此,本文通过对双重荧光定量聚合酶链反应技术的介绍,进而分析了其在食品微生物检验中的具体应用,之后以此为基础,阐述了技术应用时的注意事项,以更好地开展食品微生物检测工作提供支持。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术对涂阴肺结核诊断价值的评价

观察利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在涂阴肺结核诊断中的使用价值。方法 采纳门诊2021.03-2022.03的22例涂阴肺结核病例(涂阴肺结核组)、肺结核确诊病例13例(肺结核确诊者) 、其他肺结核病例15例划分到其他肺病组,依据检测手段不足分组。对患者开展痰液涂片金胺O荧光染色、Xpert MTB/RIF检测、痰固体培养以及结核菌素皮肤试验,观察Xpert MTB/RIF检测结果,观察其在涂阴肺结核诊断中的效果。结果 涂阴肺结核组XpertMTB/RIF检测阳性情况比其他肺病组高,且其TST检测阳性情况比Xpert MTB/RIF检测阳性低。涂阴肺结核组Xpert MTB/RIF检测阳性例数比痰培养检测高。Xpert MTB/RIF检测在肺结核组中检出阳性例数比其他肺病组高,组间对比存在差异(P<0.05)。结论 Xpert MTB/RIF检测阳性率较高,将其用于涂阴肺结核早期诊断中可发挥重要作用。

实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon810、Event 176中的外源基因进行了定量检测 ,建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度小于 0 .0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10

实时荧光定量PCR技术

荧光定量PCR技术是一种目前国内外应用较为广泛的定量PCR技术,是通过始点定量和荧光检测系统实时监测累积荧光强度而实现的,具有灵敏度高、特异性强、线性关系好、操作简单等优点,不但能够用于基因定量检测,还能准确定量疾病相关基因的表达,现已广泛应用于人类和动物疾病的快速检测、定量分析、早期诊断、基因分型等方面。它可以采用绝对定量和相对定量2种方式实现定量检测,但都有各自的优缺点,需根据具体的试验选择合适的定量方式,从而得到更准确的试验结果。提高荧光定量PCR技术的特异性和灵敏度需从多方面着手,主要指特异性探针及引物的设计,选择合适的Mg2+浓度、引物和探针浓度、循环数等。