肝组织免疫荧光抗体检测诊断自身免疫性肝炎2例

以肝细胞炎症为主的自身免疫性肝炎（AIH）是一种免疫介导的且病因不明的肝脏损伤性疾病。结合自身抗体阳性、血清转氨酶升高、高γ球蛋白血症、肝组织界面炎及乏力、纳差等综合而确诊，其中血清自身抗体阳性为主要诊断依据，但笔者发现，少部分患者具有AIH的诸多指征，但血清自身抗体阴性，给临床诊断造成极大困扰。针对以上问题，现将笔者所在医院肝组织免疫荧光抗体阳性2例、阴性对照19例报告如下。

应用荧光抗体技术检测牙鲆体内的河流弧菌

用灭活的河流弧菌(Vibrio fluvialis)抗原,注射免疫实验兔,制得凝集价为1∶5 120的抗血清。用试管凝集法检测了抗血清的特异性,再用免疫吸附法去除交叉反应,从而得到高效价、高特异性的抗河流弧菌血清。用所制备的抗血清在实验室中建立起河流弧菌荧光抗体检测技术(FAT),在荧光显微镜下可清楚地看到被标记的病原菌,整个检测过程只需3h。用河流弧菌感染牙鲆(Paralichthys olivaceus),24 h后,用FAT测定牙鲆的血液、肾脏和肝脏中的河流弧菌,在血液中河流弧菌的检出率最高,其次是肾脏,肝脏的检出率最低。以上结果表明:荧光抗体技术可以快速、灵敏、准确地检测出牙鲆体内的河流弧菌。

养殖刺参腐皮综合征2种致病菌间接荧光抗体快速检测方法

以养殖刺参(Apostichopus japonicus)腐皮综合征的2种致病菌:灿烂弧菌(Vibrio splendidus)和假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)为抗原,分别制备兔抗血清。以载玻片为介质,建立了2种病原菌的间接荧光抗体检测技术(IFAT)。交叉反应、阻断试验和吸收试验结果均表明本方法特异性强。对人工感染实验中的养殖水体及发病刺参溃烂组织检测,可以检出水体和患病刺参溃烂组织中的相应病原菌,病原菌被染成明亮的黄绿色,检测灵敏度2.4×104cell/mL。冰冻切片检测结果显示,在刺参肿胀嘴部与溃烂肌肉处有大量染成黄绿色的细菌颗粒。结果表明:采用IFAT可以对刺参腐皮综合征2种致病菌进行准确快速的检测。该方法的建立对刺参腐皮综合征的流行病学调查及快速诊断具有重要意义。

不同荧光标记检测抗体组合及不同抗凝剂对流式测定食蟹猴T淋巴细胞亚群的影响

目的比较不同荧光标记检测抗体组合与不同抗凝剂对检测食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群的影响,为相关检测提供方法参考。方法取肝素钠抗凝猴血50μl分别与两组荧光检测抗体PerCP-CD3/FITC-CD8/PE-CD4(检测抗体组合1)和PerCP-CD3/FITC-CD4/PE-CD8(检测抗体组合2)孵育,流式细胞仪测定CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞百分比和平均荧光强度(MFI),并计算CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞比值,比较不同荧光标记抗体组合检测食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群的结果。取肝素钠和乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)抗凝猴血各50μl分别与上述两组荧光检测抗体组合进行孵育,测定CD3^(+)CD4^(+)和CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞百分比和MFI,计算这两种淋巴细胞亚群比值,比较不同抗凝剂对食蟹猴外周血T淋巴细胞亚群检测结果的影响。结果⑴肝素钠抗凝猴血荧光检测抗体测定T淋巴细胞亚群的结果显示,FITC标记抗CD4抗体检测到的CD4^(+)T淋巴细胞百分比和MFI均显著低于PE标记抗CD4抗体检测到的CD4^(+)T淋巴细胞百分比和MFI,同样,FITC标记抗体检测到的CD8^(+)T淋巴细胞百分比和MFI均显著低于PE标记抗体检测到的相应结果,应用检测抗体组合2的CD3^(+)CD4^(+)/CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞比值显著低于应用检测抗体组合1的,雌、雄动物均出现前述结果,雌性动物的变化更为显著。⑵应用抗体组合1检测时,与肝素钠抗凝组相比,EDTA-K2抗凝剂组CD3^(+)CD4^(+)淋巴细胞百分比显著增加、CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞百分比和CD8^(+)MFI显著降低,CD3^(+)CD4^(+)/CD3^(+)CD8^(+)淋巴细胞比值显著增加;应用抗体组合2检测时,仅发现EDTA-K2抗凝组比肝素钠组CD8^(+)MFI显著降低,未见其他有意义的变化。结论FITC标记抗CD4抗体和抗CD8抗体检测相应细胞百分比和荧光强度均小于PE标记的抗体,在应用这两种荧光标记抗体进行T淋巴细胞亚群检测时应注意对试验结果的影响和合理分析。使用EDTA-K2抗凝对食蟹猴外周血CD8^(+)淋巴细胞测定结果有明显影响,在进行食蟹猴T淋巴细胞亚群测定时宜使用肝素钠抗凝剂。

大黄鱼弧菌病的荧光抗体快速诊断研究

用 0 .0 5 %福尔马林灭活大黄鱼的病原菌———副溶血弧菌制成菌苗 ,再用该菌苗注射免疫实验兔获得抗血清 ,进而建立起副溶血弧菌的间接荧光抗体检测技术。应用该技术在福建省连江县厦宫乡大黄鱼养殖渔排进行副溶血弧菌检测。在患病大黄鱼肝脏中均能检测到副溶血弧菌 ,10尾外观正常的大黄鱼中 ,有 4尾检出副溶血弧菌 ,而在养殖海水中没有检出副溶血弧菌。以上结果表明 ,间接荧光抗体检测法不仅可以用于诊断感染发病的大黄鱼 。

马立克氏病肿瘤表面抗原的免疫荧光测定及其应用

用马立克氏病(MD)肿瘤细胞系 MDCC-MSB-1免疫家兔制成的高免血清,经正常的来杭鸡淋巴细胞完全吸收后,获得针对 MD 肿瘤表面抗原(MASTA)的特异性抗血清,它与 MSB-1反应的间接免疫荧光效价为1∶32。以MD 京-1强毒株接种1日龄雏鸡诱发的实验性肿瘤和某鸡场疑似马立克氏病的内脏肿瘤制成细胞悬液,用 MASTA 特异性抗血清进行间接免疫荧光染色,测得内脏肿瘤细胞的 MASTA 阳性率分别为2%和15%,并从疑似 MD 的病鸡血液内分离出 MD Ⅰ型病毒。羽囊和血清琼扩 MD 阳性,但无肿瘤病变的鸡未能测出MASTA 阳性的肿瘤细胞。用荧光抗体染色检查 MASTA 抗原的 MD 诊断方法切实可行。

利用IFAT检测猪附红细胞体的研究

利用猪附红细胞体抗原玻片,通过IFAT方法,对96份疫区血清样本进行检测,并与血涂片镜检方法进行比较。结果显示IFAT法比血涂片法敏感性要高出40个百分点:用猪弓形体阳性血清、猪蛔虫阳性血清、猪瘟阳性血清进行对照,结果均阴性,表明IFAT法特异性强,敏感性高。

探讨3种不同检验方法在不同时期梅毒检测中的敏感性及特异性

目的研究比较梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)、梅毒螺旋体免疫荧光法抗体定量检测、梅毒快速血浆反应素检测(RPR)3种不同的梅毒临床检测方法对于不同时期梅毒检测的敏感性和特异性,从而筛选敏感性和特异性较高的诊断方法。方法选取60例梅毒确诊患者作为阳性组,另选取同期60例非梅毒患者作为阴性组,采集患者血样分别进行RPR、TPPA、免疫荧光法抗体定量检测,比较3种检测方式对于不同时期梅毒检测的敏感性和特异性。结果梅毒阳性组男36例,女24例;年龄4周~53岁;一期梅毒35例,二期梅毒22例,胎传梅毒3例。对于梅毒检测,RPR检测正确率为81.67%,TPPA检测正确率为90.83%,免疫荧光法抗体定量检测正确率为85.00%。3种检测方法中特异性最高的是TPPA检测,为88.3%;一期梅毒的检测敏感性最高的是TPPA检测与免疫荧光法抗体定量检测,均为97.1%,正确指数最高的是TPPA检测,为85.4%;二期梅毒的检测敏感性最高的是TPPA检测,为100.0%,正确指数最高的是TPPA检测,为88.3%;胎传梅毒的检测敏感性最高的是免疫荧光法抗体定量检测,为100.0%,正确指数最高的是免疫荧光法抗体定量检测,为73.3%。结论对于不同阶段的梅毒,3种方法的敏感性与特异度不全相同,因此对于不同时期梅毒检测的应用,应当慎重选择检查方法。

三峡库区居民疟疾感染水平横向调查分析

目的了解三峡库区疟疾感染基线情况,为进一步评价和分析当地疟疾流行水平提供参考依据。方法根据库区生态状况及近年来疟疾发病水平,多阶段分层整群随机抽取3613名当地居民,应用间接荧光抗体试验检测其抗体水平。结果总平均抗体阳性率为0.72%(26/3613),15岁以下儿童平均抗体阳性率为0.38%,低于15岁以上年龄组(0.86%);理论感染率远大于疫情报告的发病率。结论三峡库区疟疾具有一定感染水平。

规模化猪场猪瘟的控制与净化技术初探

目前猪瘟在广西规模化猪场流行严重,必须采取控制净化的措施,减少猪瘟带来的巨大损失。采用HCFA检测猪瘟病毒,猪场实施严格科学的净化方案,经过3次净化,淘汰带毒猪,猪瘟阳性率下降到3.52%的水平,生产成绩得到明显的改善,达到净化猪瘟的目标。

老年人呼吸系统感染与肺炎支原体和嗜肺军团菌的关系初步研究

本文对82例老年人呼吸系统感染患者进行了肺炎支原体(MP)和嗜肺军团菌抗体(LP)的测定,其中肺炎支原体抗体阳性(≥32)7例,占8.54%,嗜肺军团菌抗体阳性(≥16)54例,占65.85%,两种病原体总的阳性率为74.39%;依据支原体肺炎诊断标准和军团菌肺炎试行"诊断标准",两种肺炎占肺炎的35.29%。因此,作者认为肺炎支原体和嗜肺军团菌是老年人呼吸系统感染的重要病原体,应引起临床医师高度重视,及时检测病原体的抗体,尽早明确诊断,以便合理用药。

美科学家对SARS病毒的病原学研究

在不同成胶条件下利用铝酸钠溶液和硝酸制备了拟薄水铝石，研究了pH值、成胶温度、铝酸钠浓度及成胶时间的影响，结果表明不同的成胶条件对产物的物性有较大影响，在合适的成胶条件下，可以制得纯净的拟薄水铝石沉淀；在一定的范围内可通过调节实验参数等来控制拟薄水铝石物化性质如堆密度、比表面积、孔容积、孔径等。

采用HaCaT细胞培养沙眼衣原体

目的探讨新的培养沙眼衣原体的细胞。方法借鉴McCoy细胞培养沙眼衣原体的方法，将E型标准株和临床标本接种于HaCaT细胞，分别用碘染、单克隆荧光抗体检测、PCR扩增沙眼衣原体内源性质粒的方法检测沙眼衣原体是否可以在体外感染HaCaT细胞。用HaCaT细胞传代培养沙眼衣原体E型标准株5代，分别计数5次传代的包涵体数，并用SPSSl7软件进行单因素方差分析，以确定沙眼衣原体在HaCaT细胞中是否增殖。结果碘染后可见HaCaT细胞胞质内有典型的包涵体。单克隆荧光抗体检测，在荧光显微镜下可见HaCaT细胞内有黄色荧光颗粒。PCR扩增HaCaT细胞内沙眼衣原体内源性质粒为阳性。沙眼衣原体E型标准株在HaCaT细胞内经传代5次，包涵体数逐渐增加。结论HaCaT细胞在体外培养沙眼衣原体成功，且沙眼衣原体E型标准株在HaCaT细胞中可以增殖。

慢性阻塞性肺疾病急性加重患者常见病毒感染分析

目的 分析慢性阻塞性肺疾病（Chronic obstructive pulmonary disease,COPD）急性加重期患者感染病毒特点,及病毒感染在COPD急性加重中的作用.方法 将武警四川省总队医院2015年4月-2016年3月收治的COPD急性加重期患者193例为A组,同期COPD稳定期患者50例为B组.检测两组患者呼吸道合胞病毒、腺病毒、副流感病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒的IgM抗体.结果 两组患者在年龄、性别、病程方面差异无统计学意义（P＞0.05）.A组病毒感染率13.47％,高于B组（Х^2=5.29,P＜0.05）.A组感染的病毒以乙型流感病毒最多见（感染率12.44％）,之后依次为甲型流感病毒（感染率7.78％）、副流感病毒（感染率7.25％）、腺病毒（感染率2.63％）、呼吸道合胞病毒（感染率1.32％）.单一病毒感染占COPD急性加重期感染病毒患者的34.6％,2种病毒感染占15.4％,3种或3种以上病毒感染占50％.夏秋季病毒感染率高于冬春期,但差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 COPD急性加重患者有13.47％存在病毒感染,且大部分为2种或2种以上病毒感染,病毒感染可能在COPD急性加重中起重要作用,需重视COPD患者病毒感染的预防和治疗.