利用双荧光素酶报告系统鉴定靶向作用猪CD163基因的miRNA

为了进一步筛选获得抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的候选mi RNA,为猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)防治及猪的抗病育种提供新策略,通过3′RACE(Rapid-amplification of c DNA ends)测序获得了猪CD163基因3′UTR的完整序列,生物信息学分析发现其具有mi R-181c、mi R-181d、mi R-23b、mi R-4262等mi RNA的作用靶点。利用双荧光素酶报告系统检测发现,与阴性对照组相比,mi R-181c、mi R-181d、mi R-23b和mi R-4262均可极显著(P<0.01)抑制荧光素酶的相对活性,其中mi R-181d抑制效果最佳。

双荧光素酶报告基因系统验证hsa-miR-1291对ARHGAP29基因的调控作用

目的验证hsa-miR-1291对ARHGAP29基因的靶向调控作用。方法利用PCR方法,根据目的基因ARHGAP29的3′非编码区(3′untranslated region,3′UTR)序列信息设计扩增引物,以293T细胞基因组DNA为模板,扩增ARHGAP29基因的野生型3′UTR片段(ARHGAP 29-WT 3′UTR)及突变型3′UTR片段(ARHGAP29-MUT 3′UTR),并将其分别克隆到双荧光素酶报告pmiR-RB-Report载体中,构建双荧光素酶基因报告载体,即野生型载体ARHGAP29-WT 3′UTR pmiR-RB-Report和突变型载体ARHGAP29-MUT 3′UTR pmiR-RB-Report。将hsa-miR-1291 mimic、阴性对照(non-target control,NC组)同野生型载体、突变型载体载体分别共转染于293T细胞中,进一步检测相对荧光值。结果成功构建ARHGAP29-WT 3′UTR pmiR-RB-Report载体(野生型载体)、ARHGAP29-MUT 3′UTR pmiR-RB-Report载体(突变型载体)。荧光检测结果显示,野生型载体转染hsa-miR-1291 mimic后,其荧光表达较NC组明显下降(0.67±0.04 vs 1.00±0.08,P=0.014);转染hsa-miR-1291 mimic后,突变型载体的荧光表达相对于野生型载体的荧光表达有所上升(1.20±0.05 vs 0.67±0.04,P<0.001)。结论初步证实hsa-miR-1291很可能对ARHGAP 293′UTR上的该位点有靶向调控作用。

SLC2A9基因rs13137074位点双荧光素酶报告系统的构建及其对基因活性的影响

目的构建该实验室定点突变联合双荧光素酶报告系统,并通过该系统了解rs13137074基因位点突变对葡萄糖易化转运蛋白-9(SLC2A9)基因转录活性的影响。方法采用定点突变法对rs13137074基因位点进行点突变,并通过双酶切的方式连接构建双荧光素酶报告系统质粒。随后通过细胞转染及荧光素酶检测等方法确定突变位点对SLC2A9基因转录活性的影响程度。结果rs13137074基因位点突变成功;质粒转染过程中Lipofectamine 3000终水平为1.5μL/mL,转染时间为48 h时效果最佳;rs13137074位点发生突变时可导致SLC2A9基因转录活性下降23.60%。结论人群血尿酸水平可能受SLC2A9基因调控区rs13137074位点单核苷酸多态性的影响。

基于SSA修复机制和特异性核酸酶活性检测的双荧光报告载体系统的开发及应用

报告载体系统因构建快捷、改造简单、操作容易、经济有效,并且能通过介导筛选核酸酶阳性细胞富集基因组修饰的阳性细胞克隆,而成为特异性核酸酶活性检测的重要手段。基于非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)修复机制的报告系统在引入DNA双链断裂(Double strand breaks,DSBs)后,经过优化最高也只有2/3的概率实现报告基因的修复;而单链退火(Single strand annealing,SSA)修复机制在引入DSBs后,理论上可以实现报告基因100%的修复,具有更高的灵敏度,有利于活性较低的特异性核酸酶活性的检测,为基因组修饰研究中特异性核酸酶活性的检测提供了有效的手段。本研究设计并构建了3套基于SSA修复机制的双荧光报告载体系统,并应用m RFP-e GFP系统检测了3对ZFNs的有效活性,其活性检测结果分别为8.9%、9.3%和5.0%,该研究为核酸酶活性的检测提供了有效的手段。

核因子-κB反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白报告系统的建立与应用

建立核因子 κB (NF κB)反应性不稳定增强型绿色荧光蛋白 (d2EGFP)报告系统 ,作为筛选NF κB拮抗药物及研究其相关信号转导途径的工具 .分别以EGFP与d2EGFP为报告基因、neor 为筛选基因 ,构建成 4×κB基序为增强子、SV40为基本启动子的报告基因载体 p4κB EGFP和 p4κB d2EGFP .两载体分别与p6 5载体瞬时共转染HEK2 93细胞 ,通过比较不同时相点EGFP和d2EGFP的调控表达 ,证明 p4κB d2EGFP是较理想的NF κB反应性绿色荧光蛋白 (GFP)报告基因载体 .将 p4κB d2EGFP稳定转染HEK2 93细胞 ,从而获得NF κB反应性报告细胞株HEK d2EGFP .应用NF κB“圈套”寡核苷酸 (TFD)与 p6 5载体瞬时共转染HEK d2EGFP ,1mg/L NF κB和 2mg/LNF κBTFD组对p6 5蛋白诱导调控表达的d2EGFP具有明显拮抗作用 .结果表明 ,NF κB反应性d2EGFP报告系统可特异、灵敏、动态地反映和监测NF κB的活性变化 .

腺病毒介导的双荧光素酶报告系统的构建及其应用

目的:构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统,并利用其筛选一种广谱高活性启动子。方法:将待检测启动子控制的萤火虫荧光素酶(Fluc)基因表达框插入腺病毒E1区,CMV启动子控制的海肾荧光素酶(Rluc)基因表达框插入E3区作为内参,构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统。检测不同病毒感染量条件下测得的启动子活性数据差异、组内差异,难转染细胞内的转染情况,分析该系统的操作简便性、稳定可靠性。应用该系统检测常用启动子CAG、CASI及新启动子CCAU在一系列细胞内的活性,从中筛选出一种广谱高活性启动子。结果:成功构建了腺病毒介导的双荧光素酶报告系统;不同MOI值下测得的各启动子相对活性值无显著差异(P>0.05);在所实验的细胞内均能有效且准确地测定各启动子的活性,且复孔间方差小;CCAU在所实验的9株细胞中的表达活性显著(P<0.05)或极显著地(P<0.01)高于CASI以及CAG的表达活性。结论:构建获得的腺病毒介导双荧光素酶报告系统操作简便、稳定可靠、通用性强,可作为启动子活性筛选的一种新方法;利用该系统筛选获得了一种新的广谱高活性启动子CCAU。

启动子荧光素酶报告系统检测低浓度过氧化氢激活神经肽PACAP特异受体PAC1-R启动子的作用

垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide,PACAP)特异受体PAC1-R(PACAP receptor 1)是神经系统疾病药物开发的重要靶点。为了研究其表达的生物学机制,本研究克隆了PAC1-R基因转录起始位点上游从-2 500到+26的2 526 bp启动子片段,构建PAC1-R启动子驱动的荧光素酶基因报告载体p GL3-PAC1-Rp,并确证PAC1-R启动子荧光素酶报告系统在小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2a和人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中工作正常。运用此PAC1-R启动子荧光素酶报告系统,首次发现低浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)有效激活PAC1-R启动子,此作用可被转录因子特化蛋白1(specificity protein 1,SP1)抑制剂光神霉素A(mithramycin A)所抑制,提示SP1参与介导H_2O_2对PAC1-R启动子的激活作用。生物信息学分析显示,PAC1-R启动子含有多个SP1结合位点。PAC1-R启动子的荧光素酶报告系统的构建为深入探索PAC1-R高表达的作用与机制奠定了基础,低浓度H_2O_2对PAC1-R启动子激活作用的发现有助于深入诠释低浓度活性氧的生理学作用。

双荧光素酶报告系统鉴定hsa-miR-4443对TIMP2基因的调控作用

目的通过构建组织基质金属蛋白酶抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP2)荧光素酶报告基因载体,观察hsa-miR-4443对TIMP2的靶向调控作用。方法生物信息学软件预测hsa-miR-4443与TIMP2 3′端非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)的结合位点,设计合成包含hsa-miR-4443结合序列及突变序列的TIMP2基因片段,构建野生型和突变型双荧光素酶报告基因载体,分别与hsa-miR-4443模拟物和阴性对照序列共转染MDA-MB-231细胞,检测荧光素酶活性,观察hsa-miR-4443对TIMP2表达的影响。结果生物信息学分析显示在TIMP2 3′UTR有3个hsa-miR-4443的潜在结合位点,酶切和测序结果均提示3个结合位点的野生型和突变型荧光素酶报告载体构建成功。hsa-miR-4443可通过第1个结合位点抑制野生型TIMP2载体的荧光素酶的表达,而对突变型载体的荧光素酶表达无影响(P=0.002)。结论 hsa-miR-4443可以靶向调控TIMP2的表达。

基于荧光素酶双报告基因系统体外验证长爪沙鼠Cip4基因受RXR及T4调控

目的 探讨核转录因子TRB、RXR和激动剂T4对长爪沙鼠Cip4基因表达的调控作用。方法 合成长爪沙鼠Cip4基因启动子区序列,构建报告载体p GL3-Cip4;将转录因子TRB、RXR克隆到pc DNA3. 1表达载体上。将p GL3-Cip4,pc DNA3. 1-TRB,pc DNA3. 1-RXR和pRL-TK(参照质粒)载体共转染到HEK-293细胞,构建Cip4基因的荧光素酶双报告系统。观察质粒用量、TRB的激动剂甲状腺素T4等处理对转录活性的影响。结果 以长爪沙鼠Cip4启动子区为启动序列的双荧光素酶报告基因系统在(启动子+转录因子):pRL-TK=20∶1、总质粒量为2μg时转染效率最高,并具有最高的荧光素酶活性。检测结果显示,仅加入TRB不改变Cip4的转录水平(P>0. 05),仅加入RXR可以增加Cip4的转录水平(P<0. 05),RXR与T4共同作用可上调Cip4的转录水平(P<0. 001)。TRB与T4共同作用可下调Cip4活性(P<0. 05)。RXR、TRB、T4共存时,Cip4的转录水平显著下调(P<0. 01)。结论本研究证实了T4、TRB及RXR共调控长爪沙鼠Cip4基因的转录,模拟了配体激活型转录因子TRB/RXR活化目的基因Cip4的转录,同时证实了Cip4的转录活化与RXR信号通路密切相关,为揭示甲状腺素在人类NAFLD中的作用机制奠定了基础。本报告基因系统可用于配体激活型转录因子调控Cip4基因表达的机理分析及相关药物的筛选。

基于分泌型荧光素酶亚细胞定位炎症小体活性报告系统的构建

目的构建快捷、灵敏的亚细胞定位炎症小体活性报告系统,探讨各细胞器在炎症小体激活过程中的作用。方法构建线粒体定位蛋白TOM20或内质网定位蛋白EMC3与白细胞介素-1β前体-分泌型荧光素酶的融合蛋白表达质粒,免疫印迹确认表达和免疫荧光染色确认亚细胞定位后,在Caspase-1和不同炎症反应刺激条件下,应用该报告系统检测炎症小体的活化情况。结果建立的炎症小体报告系统分别定位于线粒体和内质网,可快速检测线粒体和内质网相关的炎症小体活性。结论细胞器定位炎症小体活性荧光素酶报告系统能简便、快速地检测不同细胞器特异的炎症小体活性,可应用于无损伤的连续观察、动物活体研究和高通量药物筛选。

双荧光素酶报告基因系统在家蚕基因启动子研究中的应用

双荧光素酶报告基因系统是以萤火虫荧光素酶作为主报告基因、海肾荧光素酶作为内参对照的检测系统。它在不同物种的基因启动子转录活性的研究中发挥着重要的作用。目前,在家蚕中已经应用双荧光素酶报告基因系统研究了家蚕生长发育期间基因表达的变化以及病毒侵入家蚕细胞基因表达调控的分子机制等。文章对双荧光酶报告基因系统的发展历史、工作原理及其在家蚕基因启动子转录活性调控研究中的应用和其中存在的问题进行了论述,以期为今后相关研究工作的开展提供参考。

绿色荧光蛋白报告系统用于单纯疱疹病毒感染的快速诊断和定量

单纯疱疹病毒(HSV)是免疫功能低下患者感染和死亡的常见原因之一,因而有必要对当前HSV的诊断方法进行改进。基于对HSV复制过程的了解,可以利用源于病毒启动子的转录来鉴定感染病毒的细胞。据此,已将多种报告基因,如氯霉素乙酰转移酶(CAT)、lacZ及荧光素酶,与控制核糖核苷酸还原酶大亚基的启动子HSV-1的ICP6或HSV-2的ICP10相连。

NKp46-Cre介导的YFP报告基因系统标记小鼠NK细胞的特异性和效率检测

目的:检测NKp46-Cre介导的黄色荧光蛋白(YFP)报告基因系统在小鼠体内自然杀伤细胞的效率以及特异性。方法:通过ROSA26R-YFP与NKp46-Cre小鼠杂交产生后代并且利用基因型鉴定的方法筛选出双阳性的基因型小鼠,流式细胞术检测小鼠体内免疫器官淋巴结、脾脏以及骨髓中的YFP的表达效率,然后用细胞表面抗体标记脾脏的淋巴细胞,分析淋巴细胞群体中YFP阳性细胞的百分比。结果:选取ROSA26R-YFP与NKp46-Cre小鼠杂交后代中基因型为ROSA26R-YFP(+/+)Cre(+/-)的小鼠为实验组,ROSA26R-YFP(-/-)Cre(-/-)的小鼠为对照组;流式细胞术分析免疫器官(淋巴结、骨髓、脾脏)YFP的阳性细胞的比例分别为0.589%±1.02%、1.89%±1.28%、4.53%±1.54%,对照组YFP的阳性细胞的比例分别为0.008%±0.003%、0.126%±0.08%、0.12%±0.004%;两种小鼠的非免疫器官(心脏)YFP阳性的细胞为0.009%±0.0002%、0.03%±0.012%;脾脏淋巴细胞系中各免疫细胞(NK细胞、T细胞、B细胞)YFP阳性百分比为89.4%±1.08%、0.89%±0.56%、0.82%±0.82%。结论:NKp46-Cre介导的YFP报告基因系统标记NK细胞具有明显的特异性。

p53基因3′UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与miRNA-2127靶向关系的验证

为了验证miRNA-2127与p53基因的靶向关系,利用生物信息学软件预测p53与miRNA-2127的结合位点,全基因合成法合成该结合位点的野生型与突变型模板,并将其克隆到pmiR-RB-REPORT^(TM)双荧光素酶报告载体中,构建野生型与突变型重组双荧光素酶报告质粒。将293T细胞分为4组,分别共转染野生型报告质粒+阴性对照(NC)、野生型报告质粒+miRNA-2127、突变型报告质粒+NC、突变型报告质粒+miRNA-2127。检测各组细胞中荧光素酶活性差异,结果显示:共转染了野生型报告质粒+miRNA-2127的293T细胞与共转染了野生型报告质粒+NC组相比,荧光素酶活性显著降低(P<0.05);且突变型报告质粒+miRNA-2127组的相对荧光素酶活性显著高于野生型报告质粒+miRNA-2127(P<0.05),说明miRNA-2127能够靶向调控p53基因,且结合位点位于3′UTR区369—375间。

含人雌激素受体β基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及脂氧素对其转录活性的调节

目的:构建含人雌激素受体β(ERβ)基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并探究阿司匹林诱生的脂氧素(LXA_4)对其转录活性的影响。方法:以子宫内膜间质细胞基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增ERβ启动子序列,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建pGL3-basic-ERβ报告基因载体,行双酶切及测序鉴定后将上述载体与pCMX-βgal载体共转染293T细胞24小时后,加入不同浓度(0.1、1、10、100 nmol/L)的LXA_4刺激24小时,然后裂解细胞检测荧光素酶的活性。结果:测序结果表明,构建的pGL3-basic-ERβ荧光素酶报告基因载体序列正确;在293T细胞中,构建的pGL3-basic-ERβ报告基因载体与空载体pGL3-basic相比,pGL3-basic-ERβ报告基因载体的转录活性提高了将近十倍;荧光素酶报告系统表明,LXA4浓度为0.1、1、10、100 nmol/L时其相对荧光强度与对照组比较明显升高(P<0.05),10 nmol/L浓度的相对荧光强度明显高于其他浓度(P<0.05)。结论:成功构建了pGL3-basic-ERβ荧光素酶报告基因载体,并证明在一定浓度LXA_4的刺激下ERβ启动子区域转录活性升高,LXA_4浓度为10 nmol/L时转录活性达最高值。

CLPTM1L与miR-494靶向关系的双荧光素酶报告实验验证

目的:确定miR-494与CLPTM1L的靶向关系。方法:采用生物信息学方法预测miR-494与CLPTM1L基因的结合位点。采用PCR技术扩增CLPTM1L基因3'UTR片段,并克隆至pmir GLO载体,构建野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒。将培养的293T细胞分为4组,分别共转染miR-494或阴性对照和pmir GLO-CLPTM1L-W 3'UTR或pmir GLOCLPTM1L-M 3'UTR,检测4组细胞中荧光素酶活性。结果:酶切和测序证实成功构建了野生型及突变型重组双荧光素酶报告质粒pmir GLO-CLPTM1L-W 3'UTR和pmir GLO-CLPTM1L-M 3'UTR;与共转染miR-494 mimics和突变型CLPTM1L3'UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(1.056 4±0.163 4)、共转染阴性对照序列和突变质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.961 3±0.177 9)或野生型质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.983 4±0.001 2)相比,共转染miR-494 mimics和野生型CLPTM1L 3'UTR质粒的293T细胞中荧光素酶活性(0.651 6±0.136 4)明显降低(F=4.476,P=0.040),其他3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CLPTM1L与miR-494存在靶向关系。

环氧合酶2 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因载体的构建

目的:通过构建环氧合酶2(COX2)mRNA 3’UTR的全长及其截短体荧光素酶报告基因载体,为研究COX2基因在炎症条件下的的转录后调控提供有效的工具。方法:通过从胃癌细胞SGC-7901提取RNA,反转录成cDNA后,以此为模板,PCR扩增COX2 3’非翻译区(3’-UTR)全长及截短的序列,并将该序列连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-control,构建pGL3-COX2 3’UTR全长及pGL3-COX23’UTR不同截短体。测序后将上述载体分别与pRL-TK载体共转染293-T细胞,48 h后裂解细胞检测荧光素酶的活性。最后通过ELISA检测在IL-1β的刺激下COX2的下游产物PGE2的表达,并再次测定pGL3-COX2 3’UTR全长的荧光素酶活性。结果:成功构建了pGL3-COX2 3’UTR全长及pGL3-COX23’UTR不同截短体,荧光素酶报告系统表明COX2 3’UTR对基因表达具有较强的调控作用。而在炎症因子IL-1β的刺激下,pGL3-COX2 3’UTR全长荧光素酶的活性明显升高。结论:成功构建了COX2 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因载体并证明在IL-1β的刺激下COX2表达上调,参与转录后调控。

miRNA-7靶向SP1的3′UTR双荧光素酶报告基因载体构建及评价

目的:构建胃癌细胞核转录因子SP1的3′非翻译区(3′UTR)双荧光素酶报告基因载体,验证microRNA-7(miR-7)调控SP1的分子机制。方法:应用相关生物信息学软件预测miR-7靶向作用于SP1基因的3′UTR区;PCR扩增人胃黏膜上皮细胞SP1的3′UTR,插入至psiCHECK2载体双荧光素酶基因下游,构建野生型(w-3′UTR)和突变型重组表达载体(m-3′UTR),鉴定正确后,分别与miR-7模拟物(mimics)/抑制物(inhibitor)/阴性对照物(NC)共转染胃癌细胞MKN45,检测荧光素酶活性及SP1表达情况。结果:成功构建SP1的3′UTR野生型(psiCHECK2-SP1-w-3′UTR)和突变型(psiCHECK2-SP1-m-3′UTR)表达载体,双荧光素酶报告基因检测显示w-3′UTR/miR-7-mimics组的相对荧光素酶活性表达受抑制,与miR-7 NC组比较降低75%,差异具有统计学意义(P<0.001),而m-3′UTR/miR-7-mimics组的活性表达没有受到影响(P>0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果显示miR-7-mimics组SP1表达水平低于miR-7 NC组(P<0.001),而miR-7-inhibitor组SP1表达水平高于miR-7 NC组(P<0.001)。结论:成功构建SP1的3′UTR野生型双荧光素酶报告基因表达载体,miR-7能够显著降低其荧光素酶活性,提示miR-7能靶向负调控SP1的表达。

体外微RNA/信使RNA3′非翻译区相互作用报告系统的构建及鉴定

[目的]利用分子克隆技术,构建一套体外miRNA/mRNA-3′UTR interactions reporter system并鉴定其功能。[方法]分别以质粒pIRES2-EGFP、pGL3-Control为模板PCR扩增EGFP,Luciferase编码序列,并依次在5′,3′添加酶切位点XhoⅠ、HindⅢ,定向克隆到pBlue-script-KS(-)中的多克隆位点中,利用该载体中的多克隆位点序列使用XhoⅠ、NotⅠ酶切获取3′带有一段常用酶切位点的多克隆序列,最后定向克隆到pIRES2-EGFP中,由于取代了前者中的核糖体进入位点序列(IRES)及EGFP,而其载体骨架为pUC系列且克隆片段下游增加了一段包括HindⅢ、EcoRⅠ、BamHⅠ、XbaⅠ、NoⅠt等常用酶切位点的多克隆位点序列,为miRNA及mRNA-3′UTR的构建提供了便利的条件,故新构建载体分别取名为pUC-EGFP-MCS,pUC-Luciferase-MCS。构建pUC-EGFP-pre-miRNA1及pUC-Luciferase-HDAC4-3′UTR共转染HEK293-T细胞,使用荧光定量PCR检测miRNA1的过表达情况并测定相对荧光素酶活性,以检测所建立系统是否有效。[结果]所构建载体pUC-EGFP-MCS、pUC-Luciferase-MCS经酶切及测序证明构建正确;阳性对照组pUC-EGFP-pre-miRNA1及pUC-Luciferase-HDAC4-3′UTR共转染细胞后miRNA1得到有效表达且相对于对照组,即pUC-EGFP-MCS,pUC-Luciferase-HDAC4-3′UTR,试验组的相对荧光素酶活性显著降低。[结论]成功构建In-vitro miRNA/mRNA-3′UTR interactions reporter system,为体外筛选鉴定miRNA/mRNA-3′UTR interactions提供了一个有力的技术平台。

双荧光素酶报告基因检测斑马鱼c-Myb与lect2l的靶标关系

目的:构建斑马鱼lect2l基因启动子双荧光报告基因系统,研究lect2l是否是受c-Myb蛋白特异性调控的靶基因。方法:采用PCR方法克隆斑马鱼lect2l基因启动子序列,构建重组荧光素酶报告基因载体pGL4.20-lect2lp,并采用阳离子脂质体法将其与c-myb表达载体及pRL-CMV内参质粒共转染293T细胞,使用化学发光仪检测荧光强度并计算比值。结果:电泳显示酶切条带符合斑马鱼lect2l基因启动子序列长度,构建的重组荧光素酶报告基因质粒pGL4.20-lect2lp荧光素酶活性的表达是对照组的30.34倍。结论:斑马鱼lect2l基因启动子驱动的荧光素酶表达载体pGL4.20-lect2lp构建成功,双荧光素酶报告基因系统提示斑马鱼c-Myb蛋白对lect2l基因有转录激活作用。