从YAC DNA制备荧光原位杂交探针的新方法

介绍了一种新的ＹＡＣ ＤＮＡ的回收方法。该方法先用脉冲电泳分离并回收ＹＡＣ条带，然后连接引物用ＰＣＲ扩增ＹＡＣＤＮＡ。这一方法回收的ＹＡＣＤＮＡ一是量多，节省制备探针的时间；二是产物总的染色体跨度大，有利于染色体原位杂交。经ＦＩＳＨ（荧光原位杂交）鉴定证明该方法得到的ＹＡＣＤＮＡ对ＹＡＣ的定位和嵌合的鉴定非常有效。

荧光探针杂交技术检测临床标本内结核分支杆菌的价值

目的 评价聚合酶链反应 (PCR)荧光探针杂交技术 (TaqMan技术 )检测临床标本中结核分支杆菌的应用价值。方法 应用细菌学方法(涂片镜检和培养 )及TaqMan法检测 1 3 3份结核病患者痰标本 ,5 3份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 细菌学方法检测结核病患者临床标本中结核分支杆菌阳性率为 3 6.1 % ,TaqMan法阳性率为 61 .7% ,高于细菌学检测法 ,经统计学处理 ,两者有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,用TaqMan法检测临床标本特异性为 96.2 %。 结论 TaqMan技术将PCR扩增、荧光探针杂交及检测一体化 ,在单一管内完成 ,具有简便、快速、防污染、敏感性及特异性较高等优点 ,是结核病辅助诊断的有效方法之一。

荧光探针杂交-聚合酶链反应检测沙门菌的研究及应用

目的 建立一种快速检测沙门菌的荧光探针杂交 聚合酶链反应 (PCR)方法。方法 利用TaqDNA聚合酶的 5’ 3’核酸外切酶活性降解特异性杂交于模板上的荧光标记探针 ,导致荧光强度的改变 ,通过检测荧光强度分析PCR扩增产物。结果 选用 13株常见致病性沙门菌和 7株非沙门菌进行特异性分析 ,所有沙门菌的荧光△RQ值介于 3～ 8之间 ,而所有非沙门菌的荧光△RQ值均小于 1;在敏感性分析中 ,采用菌落CFU计数法 ,最低限度可检测到每PCR扩增体系中含 2 .2 5CFU的沙门菌 ;与传统细菌培养鉴定方法对照 ,对 4 0份各种标本进行沙门菌的检测 ,结果该方法的特异性为 10 0 % ,敏感性为 93.1% ,两种方法的符合率为 95 %。结论 用荧光探针杂交 PCR检测沙门菌 ,是一种快速。

PCR-荧光探针杂交技术诊断肺结核的价值及卫生经济学评价

目的 探讨PCR -荧光双标记探针杂交定量结核杆菌技术对肺结核的诊断价值并进行卫生经济学评价。方法 对 2 0 0 2年 5月至 2 0 0 2年 11月收治的 30 1例患者进行回顾性研究 ,将痰PCR-荧光探针杂交法与荧光抗酸染色涂片法进行比较 ,以综合临床资料最后确诊为诊断标准 ,计算两种方法的诊断效率及进行成本 -效果分析。结果 痰PCR -荧光探针法诊断肺结核的灵敏度为5 1.9% ,涂片法 1次、3次、6次的灵敏度分别为 4 9.2 %、5 7.4 %、6 1.2 % ,经统计学分析 ,两种方法的检出率比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,进行成本 -效果分析 ,每检出 1例肺结核行 1次痰PCR -荧光探针法患者要花费 2 5 3.4 7元 ,行 1次涂片法要花费 5 0 .17元。结论 PCR -荧光探针杂交法与涂片法比较同样具有快速、有效等优点 ,但经济效率低于荧光涂片法 ,目前尚不能取代后者在诊断结核病中的传统地位。

八探针荧光原位杂交技术在急性髓系白血病诊断中的应用

目的探讨八探针间期荧光原位杂交技术(FISH)在检测急性髓系白血病(AML)常见细胞遗传学异常中的价值。方法采用八探针FISH系统,即以针对AML1/ETO融合基因、PML-RARα融合基因、CBFβ/MYH11融合基因、MLL基因、P53基因、De(l5q)、-7/Del(7q)、Del(20q)八种DNA探针对40例AML患者细胞遗传学异常进行检测,并与常规G显带核型分析技术相比较。结果 40例AML中,共22例多探针FISH检出了细胞遗传学改变,总阳性率为57.50%,包括:AML1/ETO融合基因、PML-RARα融合基因、MLL基因断裂重排、Del(5q)、-7/Del(7q)、P53基因缺失、8号染色体三体7种细胞遗传学异常。而常规G显带核型分析技术(CCG)对于相对应的遗传学异常仅检出8例,另检出3例八探针FISH不能检出的异常,总阳性率为27.50%。结论 FISH八探针诊断技术较常规G显带核型分析技术具有省时、准确、高效等优点,可作为急性髓系白血病临床诊断的一个重要手段。

染色体核型分析与八探针间期荧光原位杂交检测急性淋巴细胞白血病儿童细胞遗传学异常

目的:比较染色体核型分析与八探针间期荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)两种方法在检测急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)儿童细胞遗传学异常方面的差异。方法:分析39例ALL儿童行染色体核型与八探针间期FISH的结果。结果:39例ALL儿童患者中染色体核型异常阳性率为33.33%,八探针FISH系统检测基因异常阳性率为87.18%,两者间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:八探针FISH系统检测ALL患者细胞遗传学异常的阳性率高于染色体核型分析的阳性检出率,且方便快捷;八探针FISH系统联合染色体核型分析技术,能明显提高了儿童患者细胞遗传学检测的效率。

多探针荧光原位杂交技术联合G显带核型分析诊断维吾尔族成人急性髓系白血病的效果

目的探讨多探针荧光原位杂交(FISH)技术联合G显带核型分析(CCG)在喀什地区维吾尔族成人急性髓系白血病(AML)诊断中的应用价值。方法采用AML多探针FISH系统[包括PML/RARα、AML1/ETO、CBFβ/MYH11融合基因,MLL基因重排,Del(20q),-7/Del(7q),Del(5q)及P53基因8种探针]对30例该地区新诊断维吾尔族成人AML进行检测,同期进行常规CCG。结果 30例AML中有20例多探针FISH检测出细胞遗传学异常,异常检出率为66.7%。而CCG的异常检出率为36.7%,相对应的遗传学异常仅检出9例,另检出2例多探针FISH不能检出的异常。多探针FISH异常检出率明显高于CCG(P<0.05),且两者结合可将检出率提高至73.3%。结论多探针FISH对于细胞遗传学异常的检出率较CCG高,两者联合检测可以提高AML遗传学异常的检出率,为该地区维吾尔族成人AML的精准诊断提供更多客观可靠的依据。

组合探针FISH在3种恶性血液病中的诊断价值

目的：评估组合探针FISH（Panel-FISH）在检测慢性淋巴细胞白血病（CLL）、多发性骨髓瘤（MM）和骨髓增殖异常综合征（MDS）常见细胞遗传学异常中的价值。方法：采用分别针对3种疾病的组合探针,对46例CLL、53例M M和93例M DS患者进行FISH检测,并与常规细胞遗传学分析结果进行比较。结果：在CLL和M M组中,Panel-FISH的异常检出率明显高于核型分析（73.8%vs 9.5%;70.8%vs 22.9%）,两组均存在显著性差异（χ2=35.7,P〈0.001;χ2=22.1,P〈0.001）。在M DS组中,Panel-FISH的异常检出率与核型分析相仿（30.4 vs27.2%）,无显著性差异（χ2=0.043,P=0.625）。结论：Panel-FISH能显著提高CLL和M M患者的异常检出率。虽然不能提高MDS患者的总体异常检出率,但对分裂象较少或核型分析失败的MDS患者有辅助诊断意义。

荧光探针二次杂交技术及其在医用基因芯片中的应用

目的 建立一种适用于医用基因芯片的核酸检测技术。方法 运用自行设计的荧光探针 ,通过与模板 DNA和固定探针的次序杂交 ,检出特异基因片段。结果 应用该方法在基因芯片上对性病病原体菌株进行检测 ,各阳性组荧光密度值较阴性组显著下降 ;对临床标本检测的灵敏度和特异性均达到 90 %以上 ,杂交过程不需添加任何试剂 ,杂交检测时间缩短至 40分钟以内。结论 荧光探针二次杂交技术可用于医用基因芯片 ,并具有快速、简便、可靠等特点 ,有利于实现检测过程的全自动、封闭性和一体化。

聚合酶链反应技术应用进展

全血不需分离细胞 ,将红细胞低渗溶解 ,直接取细胞胞溶物进行PCR基因分型 ,结果可靠 ;血管紧张素转换酶 (ACE)等位基因缺失在缺血性心肌病中有重要意义 ,而ACE基因插入 /缺失 (I/D)多态性检测由FerencSomogyVari提出的迅速PCR ,在Lightcycler仪器上采用荧光标记的寡核苷酸杂交探针能准确快速的进行基因分型 ;DNA模板无需变性 ,进行HBVDNA扩增。

聚合酶链反应分子灯塔法检测淋球菌的研究

目的 :探讨聚合酶链反应 (PCR)分子灯塔法检测临床标本中淋球菌的应用价值。方法 :应用PCR分子灯塔法、涂片镜检法、培养法检测80例疑为性病患者的标本。结果 :PCR分子灯塔法阳性率为75 % ,涂片镜检法阳性率为67 % ,培养法阳性率为64 %。结论 :分子灯塔法作为基因检测的新方法 ,对淋病奈瑟菌的诊断具有快速、防污染、特异性强、敏感性高的特点 ,是淋病辅助诊断的有效方法之一。

聚合酶链反应分子灯塔法检测结核分枝杆菌

目的 评价聚合酶链反应 (PCR )分子灯塔法检测临床标本中结核分枝杆菌 (结核菌 )的应用价值。方法 应用涂片镜检法、培养法及PCR分子灯塔法检测 142份结核病患者痰标本 ,42份非结核呼吸系疾病患者痰标本。结果 涂片镜检法检测结核病患者临床标本中结核菌阳性率为 35 .2 % (5 0 / 142 ) ,培养法阳性率为 35 .9% (5 1/ 142 ) ,PCR分子灯塔法阳性率为 44 .4% (6 3/ 142 )。用PCR分子灯塔法检测临床标本特异性为 10 0 %。结论 PCR分子灯塔法是一种全新的PCR分子杂交模式 ,PCR扩增、荧光探针杂交、检测一体化 ,在单一管内完成 ,其简便、快速、防污染 ,敏感性较高、特异性强 。

利用FISH分析HPV16在Hela细胞中的整合位点

目的探讨HPV16病毒感染导致子宫颈癌发生的染色体畸变。方法利用荧光原位杂交(FISH)技术检测HPV16病毒感染导致的Hela细胞中染色体核型的变化。结果Hela细胞系中存在9号染色体的三体畸变,但3号染色体表现为正常的二倍体核型;Hela细胞中没有发现HPV16的整合位点,但当外源性的HPV16感染Hela细胞后,HPV16病毒DNA整合在3号染色体上;9号和3号染色体变异在子宫颈癌的发生发展中起着重要的作用,而HPV16的感染主要引起3号染色体的变异。结论HPV16可以引起Hela细胞的3号染色体的畸变,从而导致子宫颈癌的发生。