金胺“O”荧光染色LED显微镜检测痰中抗酸杆菌的应用

目的探讨金胺"O"荧光染色LED显微镜法在检测痰中抗酸杆菌的应用。方法依据《中国结核病防治规划﹑痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》对2106例痰标本同时用萋-尼氏抗酸染色法和金胺"O"荧光染色法查找抗酸杆菌,比较两种方法的实验结果,分析金胺"O"荧光染色LED显微镜检测抗酸杆菌的灵敏度和特异性。结果 2106例痰标本中荧光染色阳性315例,阳性率15.0%;萋-尼氏染色阳性283例,阳性率13.4%,两种方法符合率89.8%。对比两组检测结果,金胺"O"荧光染色LED显微镜法检测的灵敏度和特异性均较高。结论金胺"O"荧光染色LED显微镜法是一种检测灵敏度高﹑特异性好﹑操作简便﹑快速的方法,对结核病患者的早期诊断和治疗具有重要意义。

荧光染色发光二极管显微镜检测结核分枝杆菌的效果分析

目的探讨荧光染色发光二极管(LED)显微镜镜检对结核分枝杆菌的检出效果。方法收集232例可疑结核病患者的痰标本,每位患者收集3份痰(即时痰、清晨痰和夜间痰),共696份痰标本。分为萋-尼染色(Z-N)法镜检组(简称Z-N组),荧光染色发光二极管显微镜镜检组(简称LED组)。对每份痰标本同时采用上述两种镜检法进行检测。比较两者的检查结果,分析两种方法检查结核分枝杆菌的阳性率差异情况。结果 LED组检出率为37.9%(88/232),Z-N组检出率为26.7%(62/232),经检验,χ2=6.66,P<0.01,差异有统计学意义。结论LED显微镜镜检具有阳性检出率高等优点。

Tamm-Horsfall免疫荧光染色与相差显微镜法检测尿红细胞方法的评估

目的:评价Tamm-Horsfall(THP)免疫荧光染色法和相差显微镜法在肾性血尿诊断中的意义。方法:对诊断明确的30例肾小球性血尿和25例非肾性血尿同时进行尿红细胞THP免疫荧光检测和相差显微镜形态检测,比较两种方法在确定血尿来源的差异,并对血尿严重程度与尿白蛋白排泄率(UAER)做相关分析。结果:在30例肾小球性血尿中,红细胞THP检测法确定肾小球性血尿28例,2例与诊断不符;在25例非肾小球性血尿中,红细胞THP检测法确定为非肾小球性血尿22例,3例与诊断不符。红细胞THP检测法灵敏度为93.3%、特异性为88.0%、准确性为90.9%、漏诊率为6.7%、误诊率为12.0%。尿红细胞的形态检测法敏感性为80.0%、特异性为72.0%、准确性为66.3%、漏诊率为20.0%、误诊率为28.0%。血尿严重程度与肾脏损害程度不相关。结论:尿红细胞THP免疫荧光法在检测血尿来源方面具有准确、客观的优点,可在临床推广使用。

激光扫描共聚焦显微镜在人胆管癌组织免疫荧光染色切片观察中的应用

目的 :探讨利用激光扫描共聚焦显微镜鉴定单克隆抗体特异性。方法 :正常人胆管组织、正常人肝组织及人胆管癌组织切片经免疫荧光染色后置于普通荧光显微镜及激光扫描共聚焦显微镜进行观察 ,比较二者效果。结果 :与普通荧光显微镜相比 ,激光扫描共聚焦显微镜能清晰地显示染色组织的荧光染色部位及强弱 ,能较好地显示染色组织的形态 ,显示出良好的准确性及精确性。结论 :激光扫描共聚焦显微镜在免疫荧光染色切片的检测中具有准确、特异、清晰的特点 。

LED光源和CCD在荧光显微镜上的应用研究

荧光显微镜是常用的医用光学仪器之一,分布在各大医院科研、病理、检验等部门。光源是荧光显微镜的主要组成部分,使用新型的LED光源替代传统的高压汞灯,以及把数码相机改为CCD摄像装置,使现有的荧光显微镜上了一个等级,达到现代荧光显微镜的水平。

染色体空间构象研究:技术、应用与挑战

染色体在细胞核中的空间构象对于基因的表达、DNA的复制、DNA的损伤修复以及基因的稳定性具有至关重要的作用,了解染色体在细胞核中的空间构象是研究疾病发生发展的关键所在。但目前对于染色体空间构象的变化规律的认识依然不足,束缚了对染色体空间构象与疾病关系的研究。其主要原因在于高分辨率研究染色体空间构象的技术有待进一步发展与完善。本文简要介绍了染色体的基本空间组织结构,并详细介绍了非活体细胞染色体空间构象研究技术荧光原位杂交技术(FISH)和染色体构象捕获技术(3C及其衍生技术)的应用及相关研究成果。为了能够更加准确地实时观察染色体的空间构象及其动态变化,采用活体细胞进行研究势在必行,因此,本文又详细介绍了基于荧光显微技术的定位追踪技术,以及染色体动力学追踪技术在染色体空间构象研究方面的应用及相关成果。最后,针对各种技术的优缺点,本文对目前各种技术研究染色体空间构象存在的问题以及对今后的研究方向给出了建议。

荧光显微镜双路输出不等功率LED光源驱动的设计

基于LED光源及荧光显微镜照明的特点,本文公布了一种双路输出不等功率LED光源驱动;电路设计采用恒流输出可调,两路输出功率不等,满足显微镜明视场照明和荧光激发需要。

发光二极管荧光适配器显微镜的实验室诊断效果评价

涂片显微镜检查是结核病实验室检查的重要手段之一，主要包括萋一尼（Ziehl—Neelsen，Z-N）染色技术和荧光染色技术。Z-N染色技术具有操作简便、廉价和特异度高等优点，目前使用广泛；荧光染色法较Z-N染色法检出率高而阅片，

不同固定液对细胞骨架荧光染色标记效果的影响

目的比较不同固定液对细胞骨架荧光染色的差异,选择最佳固定方法。方法分别采用4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇和4%多聚甲醛/MES 4种固定液,对人肺腺癌细胞H1299进行固定,对其微管和微丝荧光标记后,在共聚焦显微镜下观察其形态结构。结果 4%多聚甲醛/MES对细胞的微管和微丝都有很好的固定作用。4%甲醛、2%戊二醛、95%乙醇对细胞的微丝基本能起到固定作用,而4%甲醛对微管的固定效果略差,2%戊二醛、95%乙醇固定的细胞看不到微管的具体形态结构。结论细胞骨架的固定中需加入骨架稳定剂,且根据实验目的,选择适当的固定液获得最佳标记效果。

发光二极管荧光法与抗酸染色法查找抗酸菌效果对比

目的通过发光二级管荧光法与抗酸染色法查找抗酸菌效果的对比,评价发光二极管荧光法查找抗酸杆菌的应用价值。方法将发光二极管荧光法金胺"O"染色涂片采用抗酸染色法复染,以抗酸染色法结果作为参照,比较两种方法的检验结果。结果对1 063张涂片检查结果进行比较,抗酸染色检查法阳性率为39.32%,发光二极管荧光法阳性率为46.00%。在645张抗酸染色检查阴性的结果中,发光二极管荧光法有71张查找到抗酸杆菌,其中1～9条/50个视野涂片9张,1+涂片62张;在31张1～8条/300个视野抗酸染色检查结果中,发光二极管荧光法报告1～9条/50视野涂片3张,1+涂片28张;在32张1+抗酸染色检查结果中发光二极管荧光法报告1+涂片32张;在101张2+抗酸染色检查结果中发光二极管荧光法报告2+涂片94张和3+涂片7张;在82张3+抗酸染色检查结果中发光二极管荧光法报告2+涂片1张3、+涂片73张和4+涂片8张;在172张4+抗酸染色检查结果中发光二极管荧光法报告3+涂片1张和4+涂片171张。结论发光二极管荧光法查找抗酸杆菌的敏感性高于抗酸染色法,具有推广应用价值。

激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件研究

目的对应用激光扫描共聚焦显微镜进行荧光强度的测定条件做了详细的分析。方法选择和设置激光扫描共聚焦显微镜的各参数,对用间接免疫荧光法检测改性后的材料表面对人牙龈成纤维细胞分泌细胞外基质纤粘连蛋白FN和I型胶原的影响进行荧光强度的定量。结果细胞在材料表面接种后FN的荧光染色强度在四组材料之间没有显著差异,说明材料表面化学成分的改变对FN的形成没有明显影响。但四组材料对I型胶原分泌的影响有差异。结论选择和设置适合的激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件,可以真实有效的反映实验的结果。

发光二极管荧光显微镜实验室诊断效果评价

目的评估发光二极管荧光显微镜实验室诊断结核分枝杆菌的能力。方法收集409份痰标本，以固体罗氏培养为金标准，比较发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜、普通荧光显微镜在敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及检出时间上的差异，并比较技术人员对几种方法的评价。结果罗氏培养阳性的175份痰标本中，普通光学显微镜法112份为阳性，普通荧光显微镜法121份为阳性，发光二极管荧光显微镜法130份为阳性，敏感性分别为64．0％、69．1％、74．3％；罗氏培养阴性的234份痰标本中，普通光学显微镜法233份为阴性，荧光显微镜法227份为阴性，发光二极管荧光显微镜法227份为阴性，特异性分别为99．6％、97．0％，97．0％。χ^2检验统计结果表明，发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜、普通荧光显微镜检测结果差异显著（P〈0．001）。普通光学显微镜、普通荧光显微镜和发光二极管荧光显微镜读片所用的平均时间分别为186．7秒、75．1秒、72，2秒，发光二极管荧光显微镜与普通光学显微镜在读片时间上显著差异，与普通荧光显微镜差异不明显（P〈0．05）。参与研究的技术员评价发光二极管荧光显微镜较其他两种方法易接受。结论发光二极管荧光显微镜法较普通光学显微镜法及普通荧光显微镜在检查效果及检出时间上存在明显优势，对技术人员的亲和性最好，具有推广使用的价值。

发光二极管荧光显微镜技术检测痰结核分枝杆菌的效果分析

目的比较发光二极管(LED)荧光显微镜和萋尼染色光学显微镜两种方法在结核分枝杆菌检测方面的差异。方法对1 360份痰标本同时进行萋尼染色和荧光染色LED镜检查找抗酸杆菌,以罗氏培养结果为金标准,比较两者的特异性、敏感性及过程和镜检时间差异。结果 1 360份痰涂标本中,萋尼氏染色法共检出阳性257份,阳性检出率为18.89%。LED染色法共检出阳性296份,阳性检出率为21.76%。萋尼染色法特异性为98.01%,敏感性为66.94%;LED染色法特异性为96.52%,敏感性为73.72%。两种方法学比较,差异有统计学(χ2=3.90,P<0.05)。结论荧光染色LED镜检法比传统萋尼染色镜检法敏感性高,操作简便,节省成本,节约时间,是一种理想的快速查找结核杆菌的检测方法,可作为常规光学显微镜的代替,适合在基层的实验室推广使用。

激光共聚焦显微镜在新生大鼠耳蜗组织染色中的应用

本文目的是探讨耳蜗组织免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜技术的应用。分离新生大鼠耳蜗,培养于胶原支持物上,采用0.25mM的顺铂作用24h,NF-200免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜下观察顺铂对耳蜗毛细胞和神经元的毒性作用。结果显示,顺铂对培养的耳蜗毛细胞的损伤没有频率特异性,毛细胞缺失可出现在整个基底膜;谷氨酸盐受体抑制剂-CNQX与顺铂同时作用耳蜗基底膜的神经元损伤程度与单纯顺铂组没有明显差别。结论表明,顺铂能够导致耳蜗毛细胞丢失和形态改变。对耳蜗神经元的损伤可能是顺铂对神经元的直接毒性。

不同的固定及渗透方法对小鼠卵母细胞免疫荧光染色的影响

目的探索有效的染色前固定及渗透卵母细胞的方法,以提高小鼠卵母细胞免疫荧光染色的效率。方法采用4种不同的固定及渗透方法处理小鼠卵母细胞:①方案A:先用4%多聚甲醛(PFA)固定1 h,再用0.5%Triton X-100穿透10 min;②方案B:先用0.5%Triton X-100穿透10 min,再用4%PFA固定1 h;③方案C:用1%PFA+0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h;④方案D:用-20℃预冷甲醇固定15 min。分析10种核蛋白(TFⅡA、TFⅡB、TAF1、TAF4、polⅡ、BRF1、MeCP2、MBD2ab、HP1α及HP1β)在小鼠卵母细胞中的免疫荧光染色效果。结果只有方案C能够完全检测出这10种蛋白质。结论用1%PFA+0.5%Triton X-100同时固定与穿透1 h,可以在小鼠卵母细胞形态保持良好的同时检测出更多的蛋白质。

萋-尼氏抗酸染色法和金胺O荧光染色法在结核分枝杆菌痰涂片检测中的对比

目的:比较萋-尼氏抗酸染色法(简称Z-N)和金胺O荧光染色法(简称荧光染色)在痰涂片镜检中对结核分枝杆菌的检测效果差异。方法:纳入580份痰标本,挑取相同部位制成两份涂片,分别使用Z-N和荧光染色进行染色镜检,比较两种方法的阳性检出率、阳性分级标准及读片时间上的差异。将涂片后余下的痰标本采用全自动分枝杆菌检测/药敏系统做液体培养。结果:Z-N法阳性检出率为10.8%,荧光染色法为15.3%,两种方法比较差异有统计学意义(P<0.05)。对两种方法每一级别的结果进行χ~2检验,结果表明两种染色方法在各个分级没有统计学差异(P>0.05)。荧光染色法的读片时间要明显短于Z-N。结论:荧光染色阳性检出率略高于Z-N,证明荧光染色法是一种快速、灵敏的检测方法,对肺结核的临床诊断具有重要意义。

人脑胶质瘤组织双色荧光染色图像质量与诊断效能分析

目的分析人脑胶质瘤组织双色荧光染色的图像质量与诊断效能,并与HE染色进行比较。方法取新鲜人脑胶质瘤组织标本71例,将同一脑组织标本分别分成大小相同的两份。一份标本使用荧光染色剂BODIPY和DRAQ5分别染脑组织脂质和DNA,在激光扫描共聚焦显微镜下进行双色荧光成像,采集荧光图像。另一份标本进行HE组织染色,用玻片扫描仪进行扫描成像。分别于染色后及染色90 d后由两名病理科医生对双色荧光染色和HE染色组织图像进行评估。对两位病理医生的评估结果进行Cohen'skappa一致性检验,评价双色荧光染色与HE染色的诊断一致性,计算双色荧光染色的诊断准确率、敏感度、特异度。结果人脑胶质瘤组织双色荧光染色图像具有与HE染色图像相似的组织学特征,且脂质保留完整。病理科医生A评估双色荧光染色图像得到低级别胶质瘤21例、高级别胶质瘤50例,病理科医生B分别为24、47例,将病理科医生A、B第一次诊断结果与HE染色诊断结果进行Kappa一致性检验,κ值分别为0.48、0.64。染色90 d后,两位病理科医生第二次评估双色荧光染色图像,病理科医生A评估低级别胶质瘤26例、高级别胶质瘤45例,病理科医生B分别为28、43例,将病理科医生A、B第二次诊断结果与HE染色诊断结果进行Kappa一致性检验,κ值分别为0.76、0.82。病理科医生A第一次诊断敏感度为88%、特异度为57%、诊断准确率为76%,第二次诊断分别为93%、82%、89%;病理科医生B第一次诊断敏感度为91%、特异度为71%、诊断准确率为83%,第二次诊断分别为93%、89%、92%。结论人脑胶质瘤组织的双色荧光染色图像具有类似HE染色的组织学特征,且能够完整保留脂质;同时与HE染色相比,诊断一致性基本满意,诊断准确率、敏感度及特异度高。

荧光染色法与萋-尼染色法检测结核分枝杆菌的效果评价

目的比较荧光染色与抗酸染色(萋-尼染色)检测结核分枝杆菌的结果差异,比较亚甲蓝液、Haris苏木素液、高锰酸钾液作为荧光染色法复染试剂的效果。方法采集疑似结核病症状的患者痰液标本198份,分别进行萋-尼染色和荧光染色,比较分析两种方法结核分枝杆菌检出率的差异。荧光染色分别用0.3%亚甲蓝液、0.5%Haris苏木素液、0.5%高锰酸钾液作为复染剂,比较不同复染剂在荧光显微镜下镜检的效果。结果萋-尼染色分枝杆菌检出率为66.67%(132/198)。荧光染色分枝杆菌检出率为94.9%(188/198),其中,亚甲蓝复染检出率为94.95%(188/198)、苏木素复染检出率94.44%(187/198)、高锰酸钾复染检出率为94.44(187/198),与萋-尼染色比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论荧光染色法阳性检出率明显高于萋-尼染色法,其中0.3%亚甲蓝液是一种良好的背景淬灭复染液。