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伪狂犬病病毒荧光标签毒株构建及其在抗病毒药物筛选中的初步应用
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作者 呙会会 张浩 +5 位作者 杨丹 旷燕 李亚菲 刘绍蒙 刘青芸 王湘如 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3600-3611,共12页
为筛选针对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的有效抗病毒药物,本研究以PRV人源分离毒株hSD-1/2019和经典猪源流行毒株Ea为亲本病毒,采用同源重组技术将mCherry报告基因插入到PRV的UL 35基因终止子之前位点,构建了表达红色荧光蛋白... 为筛选针对伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的有效抗病毒药物,本研究以PRV人源分离毒株hSD-1/2019和经典猪源流行毒株Ea为亲本病毒,采用同源重组技术将mCherry报告基因插入到PRV的UL 35基因终止子之前位点,构建了表达红色荧光蛋白mCherry的荧光标签毒株PRV-mCherry。基于构建的荧光标签病毒,以荧光强度为指标,建立高通量药物筛选平台,对天然产物库中1621种化合物进行抗病毒药物筛选,并初步探索药物特性。结果表明,mCherry标签插入位置正确且稳定遗传,荧光标签毒株PRV-mCherry与亲本毒株在PK-15细胞上的增殖曲线趋势一致,且荧光强度可反映病毒增殖情况。使用PRV-mCherry从天然产物库中成功筛选出3种可在体外有效抑制PRV增殖的药物,根据测定的50%细胞毒性浓度和50%抑制浓度,计算出3种药物的选择指数范围为203.63~564.58μmol·L^(-1),表明其具有良好的成药性。本研究为临床防治PRV感染的抗病毒药物发掘提供了新的策略和思路。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 人源分离株 荧光标签毒株 抗病毒药物
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基于轻量级卷积神经网络的荧光指示标签用于冷鲜猪肉新鲜度判别
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作者 陈单妮 朱磊 +4 位作者 王琳 高晓光 朱晨欣 邓文静 陈伯超 《肉类研究》 北大核心 2024年第6期60-70,共11页
荧光新鲜度标签的颜色指示是实时监测肉制品品质的重要手段。以冷鲜猪肉为研究对象,提出一种由异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)、罗丹明B(rhodamine B,RhB)2种荧光素组成的比率型荧光新鲜度指示标签,其中发绿色荧光的F... 荧光新鲜度标签的颜色指示是实时监测肉制品品质的重要手段。以冷鲜猪肉为研究对象,提出一种由异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)、罗丹明B(rhodamine B,RhB)2种荧光素组成的比率型荧光新鲜度指示标签,其中发绿色荧光的FITC为反应信号,发红色荧光的RhB为参考信号。结果表明:当标签与腐败胺反应时,表现出双发射特性,FITC荧光增强,RhB荧光不受干扰,标签呈现红粉色到黄绿色的明显过渡,显著提高了标签的灵敏性和精确性;其次,利用卷积神经网络对荧光新鲜度标签的色泽变化进行智能化判别,以减少人为视觉误差,对比3种轻量级(MobileNetv2、EfficientNetb0、ShuffleNetv2)和2种非轻量级卷积神经网络(ResNet50、VGG16)的判别效果,其中轻量级神经网络EfficientNetb0的效果优于其他4种模型,识别准确率高达95.6%,且参数量和运算量仅为4.01 MB和0.398 GMACs,实现了最佳运算速度和精度的平衡。因此,利用该模型可满足快速、准确、无损判别冷鲜猪肉新鲜度的需求。研究结果可为荧光指示标签应用于冷链物流贮运过程中智能化判别冷鲜猪肉新鲜度提供理论参考。 展开更多
关键词 轻量级卷积神经网络 荧光指示标签 新鲜度 冷鲜猪肉
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荧光膜指示标签用于静脉留置针穿刺时间的标记 被引量:2
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作者 金红妍 《护士进修杂志》 北大核心 2011年第19期1810-1810,共1页
静脉留置针技术已在临床广泛应用,静脉留置针避免了反复穿刺给病人带来的痛苦,也减轻了护理工作量,为临床静脉给药提供方便。为防止静脉炎及导管败血症,静脉留置针一般保留3~5d,最长不超过7d。为此,护士在静脉留置针穿刺后,应... 静脉留置针技术已在临床广泛应用,静脉留置针避免了反复穿刺给病人带来的痛苦,也减轻了护理工作量,为临床静脉给药提供方便。为防止静脉炎及导管败血症,静脉留置针一般保留3~5d,最长不超过7d。为此,护士在静脉留置针穿刺后,应表明穿刺时间及日期。 展开更多
关键词 荧光膜指示标签 静脉留置针 护理
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Ⅱ-Ⅵ族核壳结构量子点的制备及其在生物方面的应用 被引量:1
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作者 葛美英 魏调兴 +1 位作者 吴杰 孙艳 《上海有色金属》 CAS 2012年第1期20-24,共5页
Ⅱ-Ⅵ族量子点由于具有强量子限域效应,表现出独特的光学特性,相对于传统荧光染料,它具有激发光谱宽且连续分布;发射光谱窄,对称性、单色性好,空间位阻小;荧光强度高;颜色多样且容易调控等优点,从而在生物领域有着诱人的应用前景。以CdS... Ⅱ-Ⅵ族量子点由于具有强量子限域效应,表现出独特的光学特性,相对于传统荧光染料,它具有激发光谱宽且连续分布;发射光谱窄,对称性、单色性好,空间位阻小;荧光强度高;颜色多样且容易调控等优点,从而在生物领域有着诱人的应用前景。以CdSe量子点为例阐述了Ⅱ-Ⅵ族量子点的制备方法和光学特性,对量子点的表面修饰及其稳定性进行了简单介绍,并阐述了量子点在生物荧光标签方面的应用。 展开更多
关键词 Ⅱ-Ⅵ族量子点 CDSE 核壳结构量子点 荧光标签
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荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白在BHK-21细胞亚细胞定位的影响 被引量:3
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作者 王世民 张艳楠 +3 位作者 胡月 苏艳 冉多良 包晓玮 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1194-1201,共8页
【目的】探究荧光蛋白标签对马疱疹病毒I型(Equine herpes virus type 1,EHV-1)gD囊膜蛋白亚细胞定位的影响。【方法】以EHV-1基因组为模板利用PCR扩增gD全基因,分别克隆至pAcGFP1-C1和p Ds Red2-N1质粒,构建p Ac-GFP-gD(GFP-gD)和p Ds-... 【目的】探究荧光蛋白标签对马疱疹病毒I型(Equine herpes virus type 1,EHV-1)gD囊膜蛋白亚细胞定位的影响。【方法】以EHV-1基因组为模板利用PCR扩增gD全基因,分别克隆至pAcGFP1-C1和p Ds Red2-N1质粒,构建p Ac-GFP-gD(GFP-gD)和p Ds-gD-Red(gD-Red)重组质粒;将GFP基因插入gD基因信号肽序列之后并克隆至PVAX-1质粒,构建PVAX-S-GFP-gD’(S-GFP-gD’)重组质粒;将Flag标签序列与gD囊膜蛋白N端序列融合后并克隆至p VAX-1表达载体,构建p VAX-Flag-gD(Flag-gD)重组质粒。将4种不同重组真核表达质粒分别转染BHK-21细胞,通过激光共聚焦显微镜对不同融合蛋白gD进行亚细胞定位。【结果】成功构建4种不同的融合蛋白gD真核表达载体;在BHK-21细胞单独表达时,不同融合蛋白gD绝大部分都定位于高尔基体,极少量定位于细胞核内。【结论】不同插入位点的荧光蛋白标签对gD囊膜蛋白亚细胞定位无明显影响,这对今后研究其它蛋白亚细胞定位提供参考。 展开更多
关键词 EHV-1 gD囊膜蛋白 亚细胞定位 荧光蛋白标签
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自噬检测质粒pLVX-mRFP-EGFP-LC3的构建和表达鉴定 被引量:1
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作者 边帅 赵月 +2 位作者 李芳宇 赵大庆 王佳雯 《科学技术与工程》 北大核心 2019年第33期101-104,共4页
细胞自噬的机体重要的一种代谢过程,为了更好地研究不同条件下细胞自噬的水平,构建自噬检测质粒pLVX-mRFP-EGFP-LC3。使用Trizol法提取Hela细胞总RNA,PCR技术特异性扩增LC3基因,将目的片段插入pEGFP-N3载体中。再将mRFP片段插入到EGFP-... 细胞自噬的机体重要的一种代谢过程,为了更好地研究不同条件下细胞自噬的水平,构建自噬检测质粒pLVX-mRFP-EGFP-LC3。使用Trizol法提取Hela细胞总RNA,PCR技术特异性扩增LC3基因,将目的片段插入pEGFP-N3载体中。再将mRFP片段插入到EGFP-LC3质粒中,利用PCR技术扩增带有不同酶切位点的mRFP-EGFP-LC3片段,插入到慢病毒载体pLVX-puro中。通过Fugene 6将质粒瞬时转染到293T细胞中,使用荧光显微镜检测荧光蛋白的表达,使用Western blotting检测目的基因的表达。结果显示成功构建自噬检测质粒pLVX-mRFP-EGFP-LC3,荧光显微镜下可见红色和绿色荧光,Western blotting方法检测到LC3的表达。 展开更多
关键词 自噬 慢病毒载体 荧光标签 LC3
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Experimental evaluation of fluorescent (alizarin red S and calcein) and clip-tag markers for stock assessment of ark shell, Anadara broughtonii 被引量:1
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作者 周珊珊 张秀梅 +2 位作者 李文涛 李龙 蔡星媛 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2017年第2期265-274,共10页
Release programs to enhance stocks of ark shell(Anadara broughtonii) have been undertaken in a number of Asian countries,but their effectiveness has rarely been investigated owing to a lack of marking methods.The qual... Release programs to enhance stocks of ark shell(Anadara broughtonii) have been undertaken in a number of Asian countries,but their effectiveness has rarely been investigated owing to a lack of marking methods.The quality and longevity of fluorescent markers,alizarin red S(ARS) and calcein(CAL)(200 and 300 mg/L),as well as clip tags,were tested on juvenile A.broughtonii.No significant differences in survival or shell growth were observed in juveniles stained with either of the two fluorochromes after a 160-day culture period,but the retention rate was 100%after 1 year.Fluorescent marks(>grade 3) were observable microscopically in juveniles stained with the two fluorochromes,and some fluorescent marks(>grade 4) were visible with the naked eye after 1 year.ARS-marked shells were brighter than those marked with CAL,and shells marked with 300 mg/L of the fluorochromes were easier to detect than those marked with 200 mg/L.Clip tags were incorporated into the shell as the bivalve grew,and the retention rate was64.25%after 160 days.Significant differences in survival(at 30 days),shell length(at 60,90,120,and 160days),and wet weight(at 90,120,and 160 days) were observed between the clip-tagged and control groups(all P<0.05),indicating that the tags may have passive effects on the ark shell.The results suggest that both ARS and CAL are suitable to mark A.broughtonii for large-scale restocking programs,and that optimal marking quality was achieved with 300 mg/L ARS.Lighter and smaller clip tags need to be developed to reduce injury and increase survival rate of clams. 展开更多
关键词 Anadara broughtonii fluorescent staining clip tags survival rate shell length retention rate
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表达EGFP标签的重组血清4型禽腺病毒的构建及评价 被引量:1
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作者 柴冬华 邵昱昊 +1 位作者 李慧昕 刘胜旺 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期998-1005,共8页
我国当前流行的禽腺病毒血清4型(FAdV-4)毒株与国外毒株相比存在自然缺失。为了解我国流行的FAdV-4毒株的复制能力和特点以及病毒毒力的增强机制,本研究以我国当前流行的基因组3′端自然缺失株HN/151025为亲本病毒,采用同源重组技术,在H... 我国当前流行的禽腺病毒血清4型(FAdV-4)毒株与国外毒株相比存在自然缺失。为了解我国流行的FAdV-4毒株的复制能力和特点以及病毒毒力的增强机制,本研究以我国当前流行的基因组3′端自然缺失株HN/151025为亲本病毒,采用同源重组技术,在HN/151025毒株基因组35430~35431自然缺失位点插入EGFP表达盒,构建带有EGFP标签的重组病毒rHN-△35430-EGFP。获得的重组病毒在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,重组病毒在LMH细胞连续传代5代,EGFP基因随病毒的传代而稳定遗传,且EGFP蛋白稳定表达。病毒生长曲线测定结果显示,带有EGFP标签的重组病毒与亲本病毒的生长动力学趋势基本一致,均在接种后第96小时病毒滴度达到高峰,但是重组病毒滴度与亲本病毒差异显著(P<0.05)。对重组病毒感染细胞能力进行评价,结果表明,表达荧光信号的细胞比例从感染后第24小时逐渐增多,至感染后第96小时达到高峰,该结果与病毒生长曲线结果一致。本研究结果表明,FAdV-4病毒基因组3′端可作为标签基因插入位点,为进一步研究病毒复制和感染机制奠定基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒 血清4型 重组病毒 绿色荧光蛋白标签
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Aqueous self-assembly and surface-functionalized nanodots for live cell imaging and labeling
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作者 Mei-Lang Kung Pei-Ying Lin +1 位作者 Chiung-Wen Hsieh Shuchen Hsieh 《Nano Research》 SCIE EI CAS CSCD 2014年第8期1164-1176,共13页
Nanoparticles have enormous potential for bioimaging and biolabeling applications, in which conventional organically based fluorescent labels degrade and fail to provide long-term tracking. Thus, the development of ap... Nanoparticles have enormous potential for bioimaging and biolabeling applications, in which conventional organically based fluorescent labels degrade and fail to provide long-term tracking. Thus, the development of approaches to make fluorescent probes water soluble and label cells efficient is desirable for most biological applications. Here, we report on the fabrication and charac- terization of self-assembled nanodots (SANDs) from 3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) as a probe for protein labeling. We show that fluorescent SAND probes exhibit both bright photoluminescence and biocompatibility in an aqueous environment. Selective in vitro imaging using protein and carbohydrate labeling of hepatoma cell lines are demonstrated using biocompatible SANDs conjugated with avidin and galactose, respectively. Cytotoxicity tests show that conjugated SAND particles have negligible effects on cell proliferation. Unlike other synthetic systems that require multistep treatments to achieve robust surface functionalization and to develop flexible bioconjugation strategies, our results demonstrate the versatility of this one-step SAND fabrication method for creating multicolor fluorescent probes with the tailored functionalities, effident emission, as well as excellent biocompatibility, required for broad biological use. 展开更多
关键词 atomic force microscop HYDROPHILICITY molecular imaging SELF-ASSEMBLY SILANE
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