荧光标记引物复合扩增短串联重复序列技术用于异基因造血干细胞移植植活测定

目的 探讨荧光标记引物复合扩增短串联重复序列技术(fm PCR -STR)在分析异基因造血干细胞移植(allo- SCT)后植活状态中的作用。方法 用fm -PCR- STR技术对 15例allo SCT患者的 15个STR位点和 1个性别位点 (牙釉蛋白基因 )进行分析。结果 12例(5例接受HLA全相合allo- SCT和 7例接受HLA半相合allo SCT)的受者移植后均持续表达完全供者型。1例HLA全相合allo -SCT和 1例HLA半相合allo -SCT在fm PCR -STR动态观察中早期均表现为完全供者型,分别于+82d和 +381d转为嵌合型。1例HLA半相合首次移植+31d表达完全受者型(反映移植失败),再次移植+29d表达完全供者型。结论 fm -PCR- STR可敏感且精确地分析allo SCT后移植物植活状态,亦可作为白血病复发的监控手段。

荧光标记复合扩增STR检测技术在法医学中的应用

本研究用荧光标记8个STR位点及性别位点,于同一试管同步进行扩增后,在PE377全自动测序仪于一个泳道内,成功地对各位点进行基因型分离检测.将此方法应用于30多起案件检验,均取得满意结果.

STR复合扩增及荧光检测技术在个体识别中的应用

目的 :使用 310型遗传分析仪对D3S1358等 10个位点进行基因型检测并应用于法医物证学个体识别案件。方法 :用PCR复合扩增结合四色荧光检测技术对样本DNA进行基因分型。结果 :常见物证检材可成功地得到检验。结论 :这些位点适用于法医物证学个体识别。

荧光标记复合扩增毛细管电泳法在SNP分型中的应用

目的采用荧光标记复合扩增毛细管电泳法,对辽南地区汉族人群13个SNP进行等位基因频率调查,并评价其法医学应用价值。方法选择13个双等位基因SNP,应用荧光标记片段长度差异等位基因特异性复合扩增SNP分型方法,对辽南地区汉族人群进行群体调查。结果每个SNP纯合子为单一产物峰,杂合子则为长度不同的两个产物峰。不同位点扩增产物长度不同,根据产物长度和产物峰数量进行SNP分型,其结果与直接测序完全一致。同时获得辽南地区汉族人群13个SNP等位基因频率。结论采用荧光标记复合扩增毛细管电泳法进行SNP分型,方法简单实用,在法医学个人识别领域具有较高的应用。

STR基因座荧光标记复合扩增检测及其法医学应用

目的建立荧光标记复合扩增检测4个STR基因座的方法,应用于法医学亲权鉴定与个人识别。方法用6-FAM标记D3S1754引物,HEX标记D4S2366和D12S375引物,TMR标记D1S549引物,PCR复合扩增,310基因分析仪电泳自动收集电泳结果数据,GeneScanAnalysisSoftware3.7NT计算扩增产物片段相对大小,Genotyper誖3.7NT软件进行样本基因型分型。将该方法应用于法医学亲权鉴定与个人识别。结果建立了荧光标记复合扩增检测4个STR基因座基因型的方法,具有良好的稳定性和较好的灵敏度,分型结果准确。结论研究建立的方法操作简便,分型结果稳定可靠,可用于遗传多态性研究和法医学亲权鉴定与个人识别。

荧光标记STR复合扩增检验系统的研究

本研究以化学合成的荧光标记引物建立了STR复合扩增体系,体系I包括4个STR基因座和牙釉蛋白基因,体系Ⅱ包括4个STR基因座,体系Ⅲ包括3个STR基因座。制备了体系I各基因座的等位基因标准对照,测定了各等位基因长度。对代表性等位基因进行了序列测定,确定了等位基因重复单位的重复数目及测量长度与等位基因命名的对应关系,对各基因座等位基因进行了标准命名。建立了复合扩增检验系统等位基因自动分析命名的模板。三个复合扩增检验体系的累积随机匹配概率为8.3×10-13,为遗传学分析建立了实用的检验系统。

12个mini-X-STR和Amel基因座荧光标记复合扩增体系的初步研究

目的研究建立12个mini-X-STR和Amel基因座复合扩增体系。方法选择DXS101、DXS10159、DXS10162、DXS10164、DXS6789、DXS7133、DXS7423、DXS7424、DXS8378、DXS981、GATA165B12和GA-TA31E08共12个X-STR与Amelogenin基因座,自行设计引物,分别采用FAM、HEX、Tamra、ROX四色荧光标记5′端,并进行必要的修饰,按照合适的引物浓度进行混合。对97个血痕样本进行复合扩增,并用ABI3130XL进行电泳和分型。结果所建立的荧光标记复合扩增体系能够得到清晰、明确的分型图谱,灵敏度达50pg,稳定性、重复性与平衡性较佳。结论本研究建立的12个mini-X-STR和Amel基因座荧光标记复合扩增体系统检验方法简单,灵敏度高,适合实际办案的需要。

DYS19、DYS391、DYS439三个Y-STR荧光标记复合扩增的法医学应用研究

目的 研究Y—染色体STR基因座在法医学检测中的应用价值。方法 用荧光标记DYS19,DYS391,DYS4 39三个Y—STR基因座 ,PCR复合扩增 ,通过毛细管电泳得到结果。结果 三个Y—STR基因座有较高的种属特异性 ;观察 5 0次男性配子细胞形成过程中的减数分裂未发现突变基因 ;对男∶女不同比例混合血样检测 ,当男∶女性血样比达 1∶5 0时 ,仍能准确分型Y—STR基因型 ,并且Y—STR检验较常染色体STR分型更有优势 ;检测了 1～ 15个月病理石蜡切片 ,表明Y -STR基因座适合降解DNA的检测。结论 Y -STR分型适合日常法医检案的需要 ,该方法是对常染色体STR应用的一个补充。

STR遗传标记荧光复合扩增系统的法医学应用

目的:建立D20S601、D6S474、D6S2418荧光标记复合扩增体系,并对其进行法医学实用性研究。方法:利用传统复合扩增技术扩增D20S601、D6S474、D6S2418基因座,在不同条件下对复合扩增系统的同一性、灵敏性、可重复性等进行测试,用实际案例进行验证。结果:建立的D20S601、D6S474、D6S2418荧光标记复合扩增体系的扩增条件要求不高,法医实用性研究证明该体系实用性好。结论:建立了D20S601、D6S474、D6S2418遗传标记的荧光标记复合扩增体系。法医学应用性研究证明,该系统分型结果稳定,重复性好,灵敏度高,对陈旧斑痕具有检测能力,能够对常见介质上的斑痕正确分型,与常见的动物及微生物无交叉反应,可成功应用于法医检案。

荧光标记STRs复合扩增分析混合血样品

探讨应用荧光标记STRs复合扩增技术能够检测出混合血样品中较少个体成份的最低检出量及所占的比例多少与基因型的峰值高低是否存在一定的剂量反应关系。采用荧光标记STRs复合扩增技术 ,分析 4对两无关男 /女的混合血样品。扩增基因座包括D8S1179、D2 1S11、D18S5 1、D3S135 8、vWA、FGA、D5S818、D13S317、D7S82 0及性别Amelogeine。结果表明 ,对经用酚 /氯仿有机溶剂方法提取的混合血样品中较少成份的最低检出量为 ,能够从10ng混合DNA中检出 1ng的较少成份 ;从 10∶90至 5 0∶5 0 5个不同比例组 ,较少成份所占比例多少与其对应基因型峰值的高低呈现一定的正相关趋势。

荧光标记DNA扩增片段长度多态性方法的改进

采用常规PCR试剂和合成的接头和引物 ,其中MseⅠ引物为荧光标记物FAM标记 ,并对扩增片段长度多态性 (AFLP)程序进行了改进 ,优化了PCR反应和电泳条件 ,建立了一个新的、有效的反应体系 ,降低了实验费用 ,经比较实验结果与AFLP荧光标记试剂盒的实验效果一致 .

荧光复合扩增4个Y染色体STR的单倍型及其法医学应用

目的建立一套Y染色体STR的双色荧光复合扩增系统,调查4个Y-STR基因座单倍型分布情况及其在混合斑物证检验中的法医学应用前景。方法荧光标记引物复合扩增Y-GATA-A10、DYS531、DYS557和DYS448四个Y染色体特异性STR基因座,并用ABⅠ310遗传分析仪对扩增产物进行检测、分型。结果在成都汉族120名无关男性个体中,四个基因座分别检出5、5、8、7个等位基因,共检出78种单倍型,单倍型基因多样性为0.9881。对3例本教研室不能用常规常染色体STR对男性成份作出同一认定的混合斑检材,该系统成功的作出了与嫌疑人血液Y-STR基因型一致的鉴定结论。结论建立的Y-STR荧光标记复合扩增系统具有很高的识别能力,对建立Y染色体STR数据库,研究群体遗传学和进行法医学混合斑物证鉴定有重要意义。

STR复合扩增技术在亲子鉴定中的应用

采用12个荧光标记STR位点复合扩增,进行双亲亲子鉴定和单亲亲子鉴定,取得满意效果.

等温扩增荧光技术快速检测金黄色葡萄球菌方法的建立

等温荧光扩增技术--Isothermal Amplification Fluorescent Method（IAFT）是核酸体外扩增和荧光法技术的结合,在恒温条件下进行,通过添加特殊的DNA聚合酶和特异性引物,在扩增的同时加入荧光基团,通过荧光信号累积实时监控扩增过程,实现核酸快速扩增和检测,并对产物做溶解曲线分析。本研究针对金黄色葡萄球菌特异性的femA基因片段设计并筛选出了IAFT法的特异性引物,验证特异性和灵敏度,并与传统检测方法做对比,结果符合率为100%。

31个SNP位点多重PCR扩增和芯片分型技术的建立及其法医学应用

目的对SNP基因分型芯片在个体识别中的应用价值进行研究。方法根据SNP不同等位基因的序列设计探针,制成分型芯片。采用4个复合PCR体系,用末端标记了Cy5的引物进行复合PCR扩增,产物与寡核苷酸探针进行杂交,根据杂交产生的荧光信号值确定样品在各SNP位点的基因型。将这一方法应用于109份样本的分型,根据基因型分布统计分析31个SNP位点的法医学应用价值。同时,进行家系调查和方法灵敏度分析。结果方法的灵敏度为1ng;所检测的31个SNP位点的累积个体识别率为0.9999999999979(偶合率为2.13×10-12),二联体亲子鉴定中累积非父排除率为0.9609,三联体亲子鉴定中累积非父排除率为0.9970。家系调查的结果表明,这些位点等位基因由亲代向子代的传递符合孟德尔遗传定律。结论上述31个SNP位点为中高信息量位点,适用于法医学个体识别,可作为当前STR系统的补充。

荧光标记STR分型技术检验腐败组织基因型

探讨腐败组织荧光标记STR分型检测技术的应用价值。应用含12个STR基因座及一个性别基因座的2个荧光标记的复合扩增系统,对40例1～6周的腐败肌肉提取的DNA进行扩增,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,PE377测序仪分析基因型。所检测样本在12个STR基因座均扩增出特异性谱带,并可判定其基因型。荧光标记STR检测技术对腐败组织分型可靠,在实际检案中具有较高的应用价值。

ABO基因荧光标记复合AS-PCR分型的法医学应用研究

1990～1993年,Yamamoto等[1～3]通过对ABO基因的系列分析研究,发现了各等位基因核苷酸序列差异,为从分子水平进行ABO基因分型打下了基础.以后,国内外学者先后建立了PCR-RFLP、AS-PCR、直接测序等多种ABO基因分型方法.本文根据G.Watanabe等人报道[4],通过AS-PCR方法荧光标记复合扩增ABO基因型,并对其在法医学中的应用加以研究.现报道如下:……