荧光标记DNA扩增片段长度多态性方法的改进

采用常规PCR试剂和合成的接头和引物 ,其中MseⅠ引物为荧光标记物FAM标记 ,并对扩增片段长度多态性 (AFLP)程序进行了改进 ,优化了PCR反应和电泳条件 ,建立了一个新的、有效的反应体系 ,降低了实验费用 ,经比较实验结果与AFLP荧光标记试剂盒的实验效果一致 .

鼠疫耶尔森氏菌荧光标记扩增片段长度多态性分型方法

目的建立荧光标记扩增片段长度多态性(FAFLP)技术平台,探讨鼠疫菌基因分型。方法用5种核酸限制性内切酶消化鼠疫菌基因组DNA,选择最佳内切酶组合,酶切片段经接头连接后,用荧光素标记的5条EcoRⅠ引物和9条MseⅠ引物组成的引物配对扩增,选择最佳引物组合,进行系列PCR条件的优化。扩增产物经ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer(遗传分析仪)检测,GeneScan等软件进行分析。结果成功建立FAFLP技术平台。结论FAFLP具有快速、简便、廉价、分辨率高、重复性好和污染少的优点,可用于鼠疫菌的基因分型分析。

半滑舌鳎雌性特异扩增片段长度多态性标记的筛选与应用

半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Gtinther）为东北亚特有的名贵冷温性比目鱼类，为我国养殖业的新宠。半滑舌鳎雌鱼生长速度是雄性的2～3倍，若能实现单雌化养殖将大大提高养殖业的经济效益。本研究利用扩增片段长度多态性（AFLP）技术，应用64个引物组合，检测了半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis Giinther）雌雄基因组DNA的多态性，筛选与半滑舌鳎性别相关的AFLP分子标记。实验经过3轮筛选和验证，4个引物组合扩增出7个雌性个体出现频率为100％的DNA片段，我们认为这7个标记是半滑舌鳎雌性特异的AFLP标记，分别命名为CseF382、CseF575、CseF783、CseF464、CseFl36、CseF618和CseF305。同时，将标记CseF382成功转化为SCAR标记，测定了该标记的DNA序列，建立了半滑舌鳎遗传性别鉴定的PCR技术，为半滑舌鳎性别决定机制的研究和性别控制奠定了重要基础。

中华鲟性别相关的扩增片段长度多态性分子标记筛选

性别鉴定是生产养殖和物种保护中常用的技术。中华鲟Acipenser sinensis是我国特有的一种大型海河洄游性鱼类,已极度濒危。由于中华鲟性成熟时间长,缺乏第二性征,基于外部特征难以进行性别鉴定,因此,筛选中华鲟性别特异性分子标记具有重要意义。利用扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记,用10条Eco R I-ANN引物和8条Mse I-CNN引物组成的80对引物,对9尾雄性和15尾雌性中华鲟个体进行PCR扩增和毛细管电泳荧光分型,检测其基因组DNA多态性,寻找与其性别相关的分子标记。在100～500 bp范围,共获得864个位点,其中具有多态性DNA位点411条,多态性位点比例为48.58%,并未发现雌雄特异性位点。但发现33个位点在雌雄个体中的比例存在较大差异,聚类分析显示大部分雄鱼聚为一支,雌鱼聚为一支,从而推断这些位点可能与中华鲟性别具有密切相关性。该研究首次尝试在中华鲟基因组中寻找性别特异性的AFLP分子标记,尽管未找到特异性标记,但这些数据为进一步研究中华鲟性别相关基因和性别决定机制奠定了基础。

用扩增片段的长度多态性分子标记探讨盾叶薯蓣的遗传多样性

用扩增片段的长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)标记分析研究了中国5个盾叶薯蓣居群30个个体的遗传多样性。筛选出9对AFLP引物,从中检测到14698条清晰可见的条带,其中多态性带12628条,多态性比率85.92%。Shannon信息指数(I)为0.3656±0.1721,物种水平的Nei基因多样性(H)为0.2322±0.2200。遗传变异分析表明,物种水平的遗传分化系数Gst为0.4827,说明其群体间存在一定的遗传分化,居群间的基因流Nm为0.5358,居群间遗传交换较小。聚类分析结果显示5个居群盾叶薯蓣有较为丰富的遗传变异,且与地理分布有相关性。

谈扩增片段长度多态性分子标记技术

扩增片段长度多态性是1种在PCR技术和RFLP标记技术基础上产生的新的分子标记技术。简述了该分子标记技术的原理和优缺点,综述了该技术在遗传连锁图谱构建、遗传多样性研究、基因定位、分子辅助育种等方面的应用情况,并对其发展前景进行了展望。

扩增片段长度多态性的研究进展

扩增片段长度多态性(AFLP)是一种建立在PCR基础上的分子标记技术。近年来已广泛应用于遗传图谱构建、重要基因定位、遗传多样性分析、分子标记辅助育种及生物系统分类等方面的研究。本文对AFLP的原理、基本操作程序及其应用作了简要的描述。

扩增片段长度多态性技术在动物遗传多样性研究中的应用

扩增片段长度多态性(AFLP)是一种有效的分子遗传标记方法,具有快速、经济、简便、模板需要量少、重复性高、结果可靠等优点。目前AFLP在动物方面的应用还不是很多,处于初级阶段,主要用于鉴定分类关系、种群遗传多样性分析、遗传连锁图谱构建等方面。

扩增片段长度多态性(AFLP)在动物遗传育种中的应用进展

AFLP是一种新的分子遗传标记技术,它结合了RFLP和PCR技术的优点,具有RFLP的稳定性和PCR的高效性,被称为"最有威力的分子遗传标记"或"下一代分子标记"。相对于国外而言,我国在这方面的研究还比较少。本文综述了扩增片段长度多态性(AFLP)这种遗传标记的原理、技术特点、技术发展及其在动物遗传多样性、种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位和标记辅助育种等研究中的应用。

扩增片段长度多态性（AFLP）分子标记技术在鱼类遗传学研究中的应用

随着扩增片段长度多态性分子标记技术的不断改进和深入研究，在鱼类遗传学研究中将会得到更广泛的应用，主要表现在以下几个方面：

扩增片段长度多态（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）是一种十分理想的分子标记技术

扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）标记技术是Zabean和Vos等科学家发展起来的一种新的分子标记技术。于1993年获得欧洲专利局专利。它是继限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP）、随机扩增多态性DNA（Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD）之后的第三代标记技术。

扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）技术基本涵义

本刊讯：扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism，AFLP）技术，该技术是由Vos等1995年建立的一项分子标记技术，其基本原理是选择性扩增带有人工接头的DNA酶切片段。因不同个体的DNA的酶切片段存在差异，从而产生扩增片段的长度多态性。AFLP技术具有不需要预先知道被研究物种的基因组DNA序列信息，

AFLP分子标记在香菇F_1代群体中的多态性及分离方式

利用8对引物组合对AFLP标记在两个香菇菌株间(IB01×IB15)杂交F1代的多态性及分离方式进行研究,结果显示,AFLP标记在该F1代群体中的多态性较高,分离位点出现的平均频率是32.55%,分离方式有孟德尔分离、偏孟德尔分离及异常分离3种方式,3种分离位点出现的数量与平均频率分别为602、28.86%,271、12.99%,49、2.35%,其中孟德尔分离位点占分离位点总数的53.99%。15.34%的AFLP标记表现了偏分离,偏离的方向趋于亲本。

椰毒假单胞菌酵米面亚种荧光标记扩增片段长度多态性分型方法的建立

目的建立椰毒假单胞菌酵米面亚种荧光标记扩增片段长度多态性(FAFLP)分型方法,并对4株模式菌株和19株分离菌株进行分型。方法选用4种低频限制性内切酶(ApaⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ和PstⅠ)和2种高频限制性内切酶(MseⅠ和TaqⅠ)进行组合,对FAFLP预扩增和选择性扩增体系进行优化,用BioNumerics软件对分离株的指纹图谱进行聚类分析,并与VITEK 2 GN生化结果和16S rDNA序列分析进行比较。结果 ApaⅠ-G/TaqⅠ-G组合将19株椰毒假单胞菌酵米面亚种分为7个群,菌株间最低相似度为80.85%,最高相似度为98.77%。PstⅠ-T/TaqⅠ-G组合将19株椰毒假单胞菌酵米面亚种分为10个群,菌株间最低相似度为48.68%,最高相似度为99.67%。两种FAFLP组合均能将菌株进行完全区分,而VITEK 2 GN和16S rDNA序列分析无法将菌株进行完全区分。结论 ApaⅠ-G/TaqⅠ-G组合与PstⅠ-T/TaqⅠ-G组合FAFLP对椰毒假单胞菌酵米面亚种具有足够的分辨率,本研究建立的FAFLP分型方法可应用于椰毒假单胞菌酵米面亚种的分子分型和溯源。

猪链球菌荧光DNA扩增片段长度多态性检测方法的建立

利用荧光标记技术,采用2对引物初步建立检测猪链球菌荧光DNA扩增片段长度多态性方法,结果表明12株猪链球菌扩增的多态性位点数从51～98条不等,该方法能够检测猪链球菌的多态性,区分不同血清型以及同一血清型不同特性的菌株,可用于菌株鉴定及流行病学研究中细菌源的追踪。

三例小麦细胞质雄性不育系线粒体DNA的扩增片段长度多态性分析

细胞质雄性不育是小麦杂种优势利用的重要途径,为了鉴定3例小麦雄性不育系的细胞质类型,对其线粒体DNA(mtDNA)进行扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析。文中利用差速离心法和不连续蔗糖密度梯度超速离心法提取纯化小麦线粒体。结果表明:通过该提取方法获得的mtDNA,其质量和纯度能够满足PCR反应和遗传学分析。在64对选扩引物中,筛选到了4对特异性引物,其中引物E1/M7在ms(Kots)-90-110不育系扩增出3条特异条带;引物E4/M2在ms(Ven)-90-110不育系扩增出2条特异条带;引物E7/M6在ms(S)-90-110不育系中扩增出2条特异条带;引物E6/M4在ms(Kots)-90-110不育系中扩增出2条特异条带。这些特异引物可以用来作为鉴定具有粘果山羊草Aegilops kotschyi、偏凸山羊草Ae.ventricosa、斯卑尔脱小麦Triticum spelta 3类不育细胞质型小麦雄性不育系的细胞质分子标记,为研究小麦细胞质雄性不育机理奠定了分子基础。

帘蛤科4种养殖蛤群体遗传多样性和种间关系的fAFLP分析

利用荧光标记扩增片段长度多态性（fAFLP）技术对文蛤（Meretrix meretrix）、青蛤（Cyclina sinensis）、菲律宾蛤仔（Ruditapes philippinarum）和硬壳蛤（Mercenaria mercenaria）4种帘蛤科贝类的群体遗传多样性和种间关系进行了研究。选择EcoRⅠ／MseⅠ进行酶切，使用6个E＋3／M＋3引物组合进行扩增，共获得1096个位点，多态位点比率95．1％，片段长度50-456bp。其中，文蛤、青蛤、菲律宾蛤仔和硬壳蛤分别得到681，715，702和694个位点，相应的多态位点比率为76．8％，81．7％，83．0％和75．1％，得到17个种特异性位点，可作为4物种特征标记。分析了群体遗传相似系数和遗传多样性指数以及种间遗传相似系数。结果表明，硬壳蛤群体遗传相似系数最高（0．6709），遗传多样性指数最低（0．2360）；菲律宾蛤仔群体遗传相似系数最低（0．5925），遗传多样性指数最高（0．2618）；根据遗传相似系数采用UPGMA法构建了4物种32个体的聚类图，表明文蛤与菲律宾蛤仔遗传关系最近，青蛤与其他3物种遗传关系较远。

亚麻抗枯萎病基因FuJ7(t)的分子标记

用高抗枯萎病亚麻品种“晋亚 7号”与高感枯萎病品种“晋亚 1号”配制杂交组合 ,接种鉴定其正反交F1代以及F2 代分离群体的枯萎病发生情况 ,结果表明 ,晋亚 7号对枯萎病的抗性属于细胞核遗传 ,受 2个显性基因控制。用 4 8个EcoRI/MseI引物组合对“晋亚 7号”、“晋亚 1号”两个亲本及其F2 代抗病和感病基因池进行AFLP分析 ,共扩增出约 330 0条可分辨的带 ,其中 3条为稳定的差异。用“晋亚 7号”和“晋亚 1号”杂交产生的F2 代分离群体对 3个特异条带与目的基因的遗传连锁性进行分析 ,发现特异条带AG/CAG与暂定名为FuJ7(t)的抗枯萎病基因紧密连锁 ,二者之间的遗传距离为 5 .2cM。将AG/CAG片段回收、克隆和测序 ,成功地将其转化为SCAR标记 ,可以更加方便地用于对FuJ7(t)基因的分子检测和标记辅助选择。

AFLP分子标记及其应用

扩增片段长度多态性 Amplifiedfragmentlengthpolymorphism,AFLP ,是Zabeau等 1992 发展的一种新DNA指纹技术.该技术原理简单,引物设计巧妙,既具有RFLP技术的可靠性又具有RAPD技术的高效性,被称为 最有力的分子标记 .系统介绍了AFLP分子标记的基本原理、技术流程和优化措施,对AFLP标记在植物居群生物学、保护生物学、分子系统学等领域中的应用作了简要介绍,并对其应用前景进行了展望.