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非特异性脂质转移蛋白突变体的构建及在两种硫氧还蛋白表达载体中的表达比较
被引量:
5
1
作者
葛晓春
陈继超
+2 位作者
王文漪
曹凯鸣
孙崇荣
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第2期167-171,共5页
对水稻非特异性脂质转移蛋白 (Nospecificlipidtransferprotein ,nsLTP)LTP110中结构重要的 5个氨基酸位点进行了定点突变 ,测序结果证实了突变体构建成功。在尝试了多种大肠杆菌表达系统进行表达之后 ,发现硫氧还蛋白融合表达载体适合...
对水稻非特异性脂质转移蛋白 (Nospecificlipidtransferprotein ,nsLTP)LTP110中结构重要的 5个氨基酸位点进行了定点突变 ,测序结果证实了突变体构建成功。在尝试了多种大肠杆菌表达系统进行表达之后 ,发现硫氧还蛋白融合表达载体适合于LTP110野生型及突变体的表达。将编码野生型LTP110及突变体Y17A ,P72L ,R46A ,D45A ,C5 0A蛋白的cDNA顺序克隆进两种硫氧还蛋白表达载体并对其表达情况进行了比较 :pTrxFus载体可以在宿主菌GI72 4中以较低水平表达野生型LTP110及突变体Y17A ,P72L ,R46A融合蛋白 ,但不能表达D45A和C5 0A融合蛋白 ;pET32a(+)载体可以在宿主菌BL2 1(DE3)trxB- 中以可溶蛋白的形式表达野生型及所有突变型融合蛋白 ,且表达量比在pTrxFus载体 GI72 4突主菌中表达量高。对pET32a(+)载体中表达的LTP110融合蛋白进行了纯化 ,并利用带有荧光标记的脂肪酸分子对其测活 。
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关键词
NSLTP
定点突变
硫氧还蛋白
融合表达载体
荧光标记脂质
非特异性
脂
质
转移蛋白
突变体
植物
下载PDF
职称材料
题名
非特异性脂质转移蛋白突变体的构建及在两种硫氧还蛋白表达载体中的表达比较
被引量:
5
1
作者
葛晓春
陈继超
王文漪
曹凯鸣
孙崇荣
机构
复旦大学生命科学学院生物化学系
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第2期167-171,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目 (No .30 0 0 0 0 37)~~
文摘
对水稻非特异性脂质转移蛋白 (Nospecificlipidtransferprotein ,nsLTP)LTP110中结构重要的 5个氨基酸位点进行了定点突变 ,测序结果证实了突变体构建成功。在尝试了多种大肠杆菌表达系统进行表达之后 ,发现硫氧还蛋白融合表达载体适合于LTP110野生型及突变体的表达。将编码野生型LTP110及突变体Y17A ,P72L ,R46A ,D45A ,C5 0A蛋白的cDNA顺序克隆进两种硫氧还蛋白表达载体并对其表达情况进行了比较 :pTrxFus载体可以在宿主菌GI72 4中以较低水平表达野生型LTP110及突变体Y17A ,P72L ,R46A融合蛋白 ,但不能表达D45A和C5 0A融合蛋白 ;pET32a(+)载体可以在宿主菌BL2 1(DE3)trxB- 中以可溶蛋白的形式表达野生型及所有突变型融合蛋白 ,且表达量比在pTrxFus载体 GI72 4突主菌中表达量高。对pET32a(+)载体中表达的LTP110融合蛋白进行了纯化 ,并利用带有荧光标记的脂肪酸分子对其测活 。
关键词
NSLTP
定点突变
硫氧还蛋白
融合表达载体
荧光标记脂质
非特异性
脂
质
转移蛋白
突变体
植物
Keywords
NsLTP, site\|directed mutagenesis, thioredoxin fusion expression system, fluorescence labeled fatty acid
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
非特异性脂质转移蛋白突变体的构建及在两种硫氧还蛋白表达载体中的表达比较
葛晓春
陈继超
王文漪
曹凯鸣
孙崇荣
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
5
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