微滴式数字PCR中低浓度荧光微滴分类

数字PCR检测过程中,确定微滴是否为阳性直接影响最终浓度,也是影响仪器准确度的重要因素之一。目前的自动分类方法并未考虑到数字PCR技术中浓度对结果误差的影响,导致在低浓度下自动设置的方法与实际结果偏差较大。本文设计了一种基于广义帕累托分布的荧光微滴分类方法,讨论了不同浓度下误分类对结果可能的影响,据此确定了分布模型参数,并在自行研制的微滴式数字PCR仪上进行验证。实验结果显示:经本文方法分类后,样品中目标拷贝数在5~5 000的范围内线性回归的r_2=0.995 6,这意味着广义帕累托分布较好地拟合了微滴荧光强度边界分布,本文提出的荧光微滴自动分类方法在低浓度下取得了较好的效果。

左氧氟沙星与牛血清白蛋白相互作用的液滴荧光法研究

采用液滴荧光技术与紫外-可见光度法研究了生理pH值条件下左氧氟沙星和牛血清白蛋白的相互作用机制。左氧氟沙星对牛血清白蛋白产生荧光猝灭,且猝灭过程是由于复合物形成而引起的静态猝灭。根据Frster偶极-偶极非辐射能量转移理论算出供体-受体的结合距离为2.68nm。由Linewear-Burk方程求出不同温度下反应时复合物的形成常数KLB和结合位点数n及对应温度下结合反应的热力学参数,证明二者主要靠疏水作用力结合。同时采用同步荧光分析技术,对蛋白质与药物结合时构象的变化进行了探讨。

超声萃取-流动注射液滴荧光增敏法测定苦荞中芦丁

基于Al3+-芦丁形成络合物的荧光增敏特性,建立了超声萃取-流动注射液滴荧光增敏法测定苦荞中芦丁含量的方法。称取2.000 0g样品,加入10mL甲醇并搅拌均匀,超声振荡萃取15min,以6 000r·min-1转速离心5min后移出上层清液,重复此操作2次后合并3份上清液,旋转蒸发除去甲醇溶剂,用90%(体积分数)乙醇溶液溶解,过滤,加入0.1mol·L-1 Al(NO3)3溶液5μL后定容至10.0mL,静置60~70min。流动注射速率保持4~5mL·h-1,激发和发射波长分别为239,507nm时测定荧光强度。Al3+与芦丁的络合比为1∶2,Al3+-芦丁络合物的质量浓度与其荧光强度在0.10~5.00 mg·L-1内呈线性关系,检出限(3s)为0.02 mg·L-1,回收率在86.0%~104%之间,测定值的相对标准偏差(n=5)在3.1%~6.1%之间。方法适合于苦荞中芦丁的常规检测。

维生素B_6与牛血清白蛋白相互作用的液滴荧光法研究

利用荧光及紫外光谱法研究了生理pH条件下水溶液体系中维生素B6与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用机制。维生素B6对牛血清白蛋白的荧光有较强的猝灭作用,其猝灭类型为静态猝灭。根据F rster的偶极-偶极非辐射能量转移理论算出供体-受体的结合距离为2.72 nm。由Linewear-Burk方程求出不同温度下反应时复合物的形成常数KLB和结合位点数n及对应温度下结合反应的热力学参数,证明二者主要靠氢键和范德华力结合。同时采用同步荧光分析技术,对蛋白质与药物结合时构象的变化进行了探讨。

液滴荧光传感与计算机联用技术在微量分析中的应用

通过在LS55型荧光-磷光-发光分光光度计上加装液滴产生及调节附件,采用计算机采集与分析处理数据,成功地研制了双通道液滴光化学传感装置.利用葡聚糖凝胶对复合维生素B中不同组分的选择性吸附来达到分离与同时检测的目的,并将其用于复合维生素B药片的分析,取得了满意的结果.

抗核抗体荧光滴度判读参考标准的建立

目的建立一套简单实用的人工判读抗核抗体荧光滴度结果的参考标准。方法选择卫生部室间质评质控品:均质型1∶1000,颗粒型1∶320。通过3.2倍稀释获得:均质型1∶320、均质型1∶100、颗粒型1∶100样本。随机用四个批次的试剂分别对样本进行测定,运用EUROIMMUN全自动判读仪读取并记录每个样本滴度的灰度值和图像。按照实验室室内质控的建立方法,计算灰度值的均值,该灰度值对应图像作为参考标准图像,并对该图像进行临床验证。结果计算所得各核型不同滴度的灰度值均值,得到相应图像作为参考标准图像。临床验证,参考标准图像前后人工判读的准确性有所提高(P<0.05),一致性有所提高(P<0.05)。结论通过参考标准的建立能够提高人工判读结果的准确性和一致性,有利于标准化的建立。

流动注射连续可更新液滴荧光法用于药物制剂中叶酸含量的测定

在酸性条件下,用高碘酸钾作氧化剂,将叶酸氧化成强荧光物质,结合流动注射连续可更新动态液滴荧光法测定叶酸的含量。在优化条件下,体系的荧光强度与叶酸的浓度成线性关系,线性范围为0.02～2.84 mg/L,检测限为0.001 mg/L。该方法灵敏度高,重现性好,操作简便,将其应用于片剂中叶酸含量的测定,结果满意。

基于荧光检测的高通量筛选技术和装备助力细胞工厂构建

微生物工业制造是以微生物细胞工厂为核心,利用低成本、可再生资源为原料,实现高附加值化合物的绿色生产。依赖于“设计-构建-测试-学习”(DBTL)循环的微生物细胞工厂开发过程中“测试”阶段已成为制约合成生物学和代谢工程发展的瓶颈之一。基于微量滴定板(MTP)高通量自动化筛选平台极大降低了高通量筛选过程的劳动强度,流式细胞术和液滴微流控技术的发展大幅度提高了筛选通量。尤其是荧光激活液滴分选(FADS)高通量筛选技术的开发为自动化、高通量和低消耗筛选工作提供了新的解决方案。本文综述了不同高通量筛选技术在合成生物学和代谢工程领域应用的主要进展,重点介绍了近几年荧光激活细胞分选技术(FACS)和FADS在微生物细胞工厂和酶定向进化方面的应用实例,关注了待测分子与荧光信号偶联的常用策略,并简单介绍目前国内外基于液滴微流控技术高通量筛选装备的研发情况。

热敏荧光法用于蒸发液滴近接触线的温度测量

探究静置液滴蒸发的动力学原理在众多的相关工业应用中举足轻重。在过去的数十年间,尽管相关领域的学者进行了大量的研究工作,但仍有一个关键的问题尚未解决,即液滴接触线附近的温度在蒸发过程中到底是如何变化的。通过直接测量的实验方法,报道了液滴在接触线固定不动的蒸发阶段,其接触线附近温度的详细变化过程。利用显微热敏荧光测温技术,其结果表明:液滴接触线附近自由界面的温度将沿径向发生急剧变化,并伴随一组在蒸发过程中不断发生演变的荧光同心圆环,这种荧光条纹带是由于液滴边缘的几何差异性所导致的局部强化蒸发冷却与一组热浮力驱动的对流辊相互作用产生的结果。本研究将为蒸发动力学提供新的认识,并有望在各种对传热系统的应用领域中促成新的进展。

水溶性香豆素荧光底物的制备及在液滴数字式检测中的应用

4-甲基伞形酮磷酸酯(4-MUP)是一类重要的荧光底物,由于具有较高的疏水性,荧光信号易在液滴间扩散而限制了其在液滴微流控芯片领域中的应用.本文首先通过修饰7-羟基香豆素-4-乙酸,制备了具有较高水溶性的新型底物分子7-二羟基磷酸酯香豆素-4-乙酸甲酯;进而以7-二羟基磷酸酯香豆素-4-乙酸甲酯为底物,以球刷酶(荷载大量碱性磷酸酶的聚电解质纳米颗粒, SP-AKP)为模式酶,建立了基于液滴微流控的单SP-AKP数字式检测体系.结果表明,该水溶性香豆素荧光底物具有与传统4-MUP底物相似的荧光光谱和酶催化性能.传统4-MUP酶促荧光产物5 min即在液滴中发生明显扩散,而该水溶性香豆素荧光底物酶催化后产生的荧光产物7-羟基香豆素-4-乙酸甲酯在24 h后仍未观察到明显扩散现象,具有优异的抑制荧光扩散性能.在基于液滴微流控芯片的单SP-AKP数字式检测中,对SP-AKP的检测限可达29.9 amol/L,同时有效提升了检测时间的可操作性与数字式信号读取的准确性.新型水溶性香豆素荧光底物有望替代4-MUP应用于以基于液滴数字式超敏生物检测为代表,在液滴分区实现酶促反应进行超灵敏检测的众多检测领域中.

大功率LED荧光粉涂覆中流场分布的数值研究

采用计算流体动力学(CFD)与数值模拟方法研究大功率发光二极管(LED)荧光粉喷涂过程中荧光粉胶的流动传输和雾化过程,建立了三维荧光粉流场模型与数学模型,用于描述两种不同的喷涂枪外部荧光粉胶流场的速度分布,最后通过喷涂实验验证了仿真结果与实验结果的一致性.研究表明:在不建立雾化过程模型的情况下,采用数值模拟能准确预测LED荧光粉喷涂过程中荧光粉微滴的轨迹和速度分布;在相同喷涂距离内,荧光粉微滴直径越小、速度越快,小荧光粉微滴加速和减速的距离就更短.

渤中M构造太古界潜山裂缝型储层流体性质随钻识别方法

渤中凹陷太古界潜山储层因受岩性和构造等多重因素影响,油气分布不均,储层非均质性强,流体性质复杂,录井过程中面临着流体性质难判断、储层含水不确定等难题。通过分析渤中M构造太古界潜山录井特征,建立了渤中M构造太古界潜山裂缝型储层流体性质随钻识别方法,采用气测组分纵向趋势法及图板法、裂缝含油气丰度交会图板法及图谱法,结合荧光显示情况,综合判断油层和水层,切实提高了太古界潜山流体性质识别的准确率。该方法在渤中M构造潜山储层流体性质评价中应用效果明显,能够为勘探决策提供重要依据,具有推广意义。

常规录井技术在冀东油田开发井中的应用

冀东油田位于渤海湾盆地黄骅坳陷南堡凹陷上,地质构造复杂。凹陷内沉积了巨厚的第三系陆相砂泥岩地层,油气资源丰富,但地层岩性变化大,横向对比性差,地质录井特别是常规录井油气显示发现难度大。本文讲述了冀东油田的地质背景,分析了冀东油田油气显示特点,提出了常规录井应注意的问题、采取的措施以及油气显示识别方法。

荧光定量RT-PCR滴度检测法在腮腺炎减毒活疫苗制造中的应用

目的:为促进荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)滴度检测法在腮腺炎减毒活疫苗制造中的实际应用提供参考。方法:建立滴度-ct值标准曲线回归方程;分别用微量细胞病变法和荧光定量RT-PCR滴度检测法对10批腮腺炎减毒活疫苗单次收获液及成品进行滴度检测,比较检测结果。结果:两种方法检测结果经配对t检验分析,P分别为0.743、0.868,差值均值分别在(-0.174,0.094)、(-0.113,0.153)之间,差异无统计学意义,可以认为等同。结论:荧光定量RT-PCR滴度检测法可用于腮腺炎减毒活疫苗制造过程中的单次收获液及成品滴度检测,有望进一步升级为《中国药典》方法。