5-异硫氰酸酯荧光素的合成与荧光性能研究

对标题化合物的合成进行了系统研究,以4-硝基邻苯二甲酸、间苯二酚为原料,甲磺酸为缩合剂,乙酸酐为酰化剂、九水硫化钠为还原剂,经缩合、乙酰化、还原制得5-氨基荧光素,再在二硫化碳-三乙胺-铁盐体系下经异硫氰酸化制得。目标产物结构经1HNMR、13CNMR、MS及IR表征,并测试了其荧光性能。与文献报道醇碱皂化再还原路线相比,采用"一锅法"合成5-氨基荧光素减少分离纯化合成步骤与设备数量,具有效率高、成本低、绿色环保等优点。

利用荧光素异硫氰酸酯检测季铵盐阳离子表面活性剂的方法

使用荧光素异硫氰酸酯(FITC)实现了对季铵盐阳离子表面活性剂(QAS)在水溶液中临界胶束浓度(CMC)的准确测量及其在CMC以下的浓度定量。用该法测得十二烷基三甲基溴化铵(DTAB)和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)在水中的CMC分别为12～13mmol·L-1和0.70～0.96mmol·L-1,与电导率法、表面张力法和芘荧光法的检测值相近。对DTAB和CTAB的检测下限分别是0.11mmol·L-1和1.7μmol·L-1,定量范围分别为0.11～9.73mmol·L-1(0.034～3.0g·L-1)和1.7μmol·L-1～0.27mmol·L-1(6.2×10-4～0.1g·L-1)。结果表明,使用FITC荧光探针检测QAS具有安全、简便、灵敏度和准确度高的优点。

芯片胶束毛细管电动色谱分离荧光素异硫氰酸酯衍生的氨基酸

研究了用芯片毛细管电泳-激光诱导荧光检测系统分离多种荧光素异硫氰酸酯(FITC)衍生氨基酸的实验条件.通过实验优化了夹流式进样的电压条件.采用以乙醇作有机添加剂的胶束毛细管电动色谱分离体系(50mmol/LSDS,15%乙醇,5mmol/LpH9.2的硼砂缓冲液),在72mm长的通道上实现了10种常见氨基酸的分离,一次分离的时间小于5min.

银二氧化硅核壳增强异硫氰酸荧光素酯滤纸基质室温磷光法检测赖氨酸

银二氧化硅核壳(Ag@SiO2)可使异硫氰酸荧光素酯(FITC)产生金属增强室温磷光(MERTP)。当所研究体系加入赖氨酸时,其MERTP猝灭。据此,建立了检测赖氨酸的新方法。在FITC和Ag@SiO2的加入量之比为1∶1.5,pH=8.0时,本方法检测赖氨酸的检出限为0.270μmol/L;线性范围为1.50～90.5μmol/L,人工合成样品加标回收率为97.0%～108.0%;相对标准偏差为2.1%(n=9)。本方法用于检测赖氨葡锌颗粒和赖氨酸磷酸氢钙片中的赖氨酸,结果满意。

异硫氰酸荧光素在荧光标记领域的应用

异硫氰酸荧光素是近年来在荧光标记技术领域应用最广泛的荧光标记物,借助于荧光显微镜、流式细胞仪、激光扫描共聚焦显微镜等荧光检测技术和仪器,可将其用于蛋白质、核酸、多糖、小分子药物及纳米粒、微球等靶向制剂的荧光标记及活性示踪.因此,阐述了近5 a来异硫氰酸荧光素在荧光标记领域的应用进展,并对其研究趋势和应用前景进行展望.

扁豆碳量子点/异硫氰酸荧光素比率荧光探针测定氯诺昔康的研究

以天然生物质扁豆为唯一碳源,一步水热法合成了荧光性能优良、水溶性好的扁豆CQDs(HBCQDs)。在pH 5.80的HAc-NaAc缓冲溶液中,该HB-CQDs可与异硫氰酸荧光素(FITC)复合,在λ_(ex)=326 nm单一波长激发下,HB-CQDs/FITC复合物于400 nm和510 nm处呈现两个独立的荧光峰。MnO^(-)_(4)的加入可使该两处的荧光信号发生明显猝灭,信号“关闭”;加入氯诺昔康(LNXC)后,510 nm波长处的信号重新“开启”,荧光恢复;而400 nm处的荧光强度维持不变,由此构建了基于HB-CQDs/FITC双发射比率荧光探针测定LNXC的新方法。实验探讨了MnO^(-)_(4)对HB-CQDs/FITC探针的荧光猝灭机理。对体系分析特性进行了优化,LNXC在1.0×10^(-7)~1.0×10^(-5) mol/L浓度范围内与探针HB-CQDs/FITC于510 nm和400 nm两处的荧光强度比值(I_(510 nm/400 nm))有良好的线性关系,检出限为9.0×10^(-8) mol/L(3σ/k)。此探针可用于实际样品中LNXC的测定。

表面连接与核-壳型键合FITC荧光纳米硅球的制备及性能比较

以异硫氰酸荧光素(FITC)为荧光分子,二氧化硅为生物相容性载体制备荧光纳米硅球.为增强硅球的稳定性,引入γ-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)做桥梁分子,由于FITC、SiO_2与APTES连接顺序的非单一性,分别制备了表面连接型和核-壳型键合FITC的荧光硅球,并对其形貌和光漂白性进行了比较.实验结果表明,核-壳型和表面连接型荧光硅球形貌相似粒径接近,但表面连接型光漂白性严重.进而,对核-壳型中典型的包硅方法——St9ber法和反相微乳液法进行比较,结果表明,反相微乳液法制备的核-壳型键合FITC的荧光硅球荧光信号更强、粒径更小且分散性良好,同时在7h内荧光染料泄漏程度小于8%,30min内荧光强度仅降低2.2%,具备低染料泄露、光稳定性好等优点.

传统与光谱流式细胞仪对自发荧光样本检测的比较

目的比较传统与光谱流式细胞仪检测自发荧光样本的性能。方法以annexin V(AV)/碘化丙啶(PI)染色检测细胞凋亡为模型,制备带有自发荧光的单细胞样本,分别用传统与光谱流式细胞仪采集同一样本荧光信号。结果自发荧光干扰异硫氰酸荧光素(FITC)通道荧光信号,传统流式细胞仪应避免使用FITC通道的荧光素;而光谱流式细胞仪可以清楚分辨FTIC通道的荧光素和自发荧光。同时优化了样本制备方法和annexin V/PI染色方案。结论光谱流式细胞仪对于自发荧光样本的检测在一定条件下具有相对优良的性能。

FITC标记重组灵芝免疫调节蛋白(rLz-8)在NB4细胞中的动态定位

实验发现,重组灵芝免疫调节蛋白(rLz-8)可直接杀伤人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4.利用异硫氰酸荧光素(FITC)标记rLz-8,其相关的活性实验结果和晶体结构分析都表明,FITC没有影响rLz-8已知生物学功能.通过激光共聚焦显微镜观察FITC-rLz-8在NB4细胞内的动态过程发现,FITC-rLz-8可识别细胞膜上的受体,并可进入细胞质,并最终富集在细胞核区域内.Annexin V-FITC双染检测结果显示,rLz-8对NB4细胞杀伤作用的可能机制是对NB4细胞凋亡的诱导作用,在一定浓度范围内,剂量与凋亡诱导率成正相关.因此rLz-8能够诱导肿瘤细胞NB4发生凋亡的亚细胞学机制可定位在细胞核上.

红芪多糖3的荧光标记及其组织分布研究

目的对红芪多糖3(HPS-3)进行荧光标记,并研究其在小鼠组织中的分布特征。方法以异硫氰酸酯FITC为探针,对HPS-3进行标记;采用荧光分光光度法测定荧光标记的红芪多糖(HPS-3-FITC)在小鼠各组织中的质量浓度,并以FITC为阴性对照,探讨HPS-3-FITC在小鼠体内的组织分布特征。结果实现FITC对HPS-3的荧光标记,其取代度为1.71%;小鼠心、肝、脾、肺、肾、胃、肠和脑的药时曲线下面积(AUC)分别为31.51,291.81,23.67,103.65,326.14,21.89,23.53和0.36μg·mL^(-1)·h。结论成功实现了HPS-3的荧光标记,绝大多数药物聚集在肾和肝,有明显肾肝靶向性。

一种异硫氰酸荧光素标记脂多糖的新方法

目的 介绍一种异硫氰酸荧光素 (FITC)标记脂多糖 (LPS)的新方法。方法 用三乙胺将 4mgLPS双链离解为单链结构后 ,再用FITC标记LPS ,通过分光光度计测定其标记率 ,并与旧式FITC标记LPS的方法进行比较。同时测定标记后FITC LPS的生物活性、刺激单核细胞分泌肿瘤坏死因子 α(TNF α)的能力及与单核细胞膜的结合能力。结果 新方法FITC标记LPS的标记率为1molLPS中FITC占 0 .980mol,原方法FITC的标记率为 1molLPS中FITC占 0 .0 2 5mol,两者比较差异有显著性 (P <0 .0 5)。而FITC LPS与标准LPS的生物学活性、刺激单核细胞分泌TNF α的能力及与单核细胞膜的结合能力差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论 新式FITC标记LPS的方法其标记率高 ,方法简单 ,且保存LPS的生物学特性 。

芯片毛细管电泳分离多种FITC衍生的氨基酸

用芯片毛细管电泳激光诱导荧光检测系统研究了分离多种荧光素异硫氰酸酯(FITC)衍生氨基酸的实验条件.采用以乙醇为有机添加剂的胶束毛细管电动色谱分离体系(50 mmol/L SDS,体积分数为15%的乙醇,5 mmo1/L pH 9.2的硼砂缓冲液),在72 mm长的通道上实现了10种常见氨基酸的分离,一次分离的时间小于5 min.

荧光示踪分析法测定酸化液中酸浓度

实验测得，当盐酸浓度在0．1--0．7mol／L时，异硫氰酸荧光素（FITC）盐酸溶液的相对荧光强度Fr与氢离子浓度C（H^＋）之间有良好的线性关系。据此，以已知浓度的现场土酸样为标准溶液，直接或加入AlCa3使氢氟酸解离后测Fr，建立了Fr～盐酸浓度和Fr～总酸浓度工作曲线。随机取8份现场土酸样，分别稀释20倍和10倍，测定Fr，利用工作曲线求得总酸浓度和其中的盐酸浓度，与滴定法测定值的相对误差最大为8．72％。采用溶胶-凝胶法，即通过高化学活性组分正硅酸四乙酯的水解、综合反应制备含FITC的溶胶，加入适量表面活性剂Triton X-100后陈化适当时间（～7d），使之转变为凝胶，再干燥固化，得到了固定在玻璃探头表面的固态光化学传感膜。该膜外观均匀光滑无裂纹，SEM照片显示膜表面有含FITC的裂纹，AFM照片显示膜表面起伏不平。将该传感器放入盐酸中，测得Fr与盐酸浓度（0．1--0．4mol／L）之间有良好的线性关系。该传感膜可用于快速测定酸化液的C（H^＋）。图13表2参6。

FITC-BSA前房注入示踪法对兔眼葡萄膜巩膜途径的形态学研究

目的 :探讨兔眼葡萄膜巩膜途径 (Uveoscleraloutflow ,FU)的研究方法和从形态学方面观察兔眼FU。方法 :于前房内注入微量示踪剂异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白 (Fluororesceinisothiocyanate -bovineserumalbumin ,FITC-BSA)后 0 .5h ,2 .5h ,4 .5h ,6 .5h ,8.5h和 10 .5h各处死家兔 2只 ,摘除双侧眼球作冰冻切片 ,于荧光显微镜下观察并确定睫状体、脉络膜上腔、前、后巩膜和脉络膜的荧光强度等级。结果 :睫状体和脉络膜上腔的荧光强度最强 ,前巩膜次之 ,后巩膜和脉络膜最弱。结论 :FITC -BSA前房注入示踪法是一种从形态学方面研究FU的有效方法 ,在兔眼FU以前巩膜途径为主。

异硫氰酸四乙基罗丹明荧光素标记抗体检查病毒标本的研究

最近国外报告罗丹明在最好的激发条件下比荧光黄产生的荧光更敏感,即使在单色示踪中罗丹明也是一种较好的荧光素,认为在使用中应给于更多的考虑。本文以本所合成的异硫氰酸四乙基罗丹明荧光素为原料,选用不同方法制备抗体结合物.

壳聚糖纳米粒子荧光探针的制备和表征

通过低分子量的壳聚糖(LCS)聚阳离子与三聚磷酸钠(TPP)的静电作用制备纳米级壳聚糖微球,并利用壳聚糖链上丰富的氨基与荧光素异硫氰酸酯(FITC)反应从而制备纳米壳聚糖微球荧光探针(NFCS)。结果表明,当壳聚糖分子量为60000,LCS与TPP的质量比为6∶1时,可得到粒度均一的球形纳米粒子,平均粒径为40±3 nm。荧光倒置显微镜观察证实FITC结合到壳聚糖微球上。荧光光谱分析显示NFCS的最大激发波长、最大发射波长与游离态FITC无显著差异。光漂白实验证实NFCS的稳定性比游离态FITC有显著提高。

基于金纳米团簇的比率型pH荧光探针制备及表征

在合成牛血清白蛋白（BSA）修饰的金纳米团簇（金簇）的基础上,将荧光素异硫氰酸酯（FITC）与金簇偶联,构建一种新型比率型p H荧光探针。当体系p H值在4.0~10.0之间变化时,FITC的荧光强度逐渐增加,而金簇的荧光强度基本保持不变。在p H为5.5~8.0之间,该探针对于p H具有良好的线性关系,线性方程为Y=1.72X-8.8,相对标准偏差为0.994,同时该探针在p H为6.0~9.0之间还具有良好的可逆性。此外,将此p H荧光探针与PK15细胞共培养,通过MTT实验证明该比率型p H荧光探针对细胞几乎没有毒性。

诺如病毒抗原的异硫氰酸荧光素标记-酶联免疫吸附检测法

目的建立基于FITC-抗FITC放大系统的检测人粪便中诺如病毒抗原的ELISA方法,用于筛查或辅助诊断诺如病毒感染。方法以诺如病毒特异性单克隆抗体1包被微孔板,用异硫氰酸荧光素(FITC)标记配对的诺如病毒特异性单克隆抗体2,以辣根酶标记的抗FITC抗体作为示踪物,建立检测人粪便中诺如病毒抗原的ELISA方法,使用商业化酶联免疫法试剂盒和分型试剂进行比对分析。结果该方法的捕获抗体鼠抗诺如病毒单克隆抗体1的最佳包被量为1∶2 000,FITC标记的检测抗体鼠抗诺如病毒单克隆抗体2的最佳稀释度为1∶1 000,辣根酶标记的抗FITC抗体最佳稀释度为1∶1 200;临界值为0.368;板间和板内变异系数均小于5%;灵敏度和特异性均大于95%;对拜发酶联免疫法试剂盒与本方法进行了一致性(Kappa)检验,表明两种检测方法所得结果之间一致性良好(k=0.986)。收集231份住院腹泻患儿粪便标本经该方法检测,46份呈诺如病毒阳性,阳性率为19.91%;经酶联免疫法试剂盒(德国拜发公司)检测,45份呈阳性。与分型试剂盒(欧佩沦公司)比较,阳性符合率为91.3%(42/46),阴性符合率为97.9%(185/189)。结论基于FITC-抗FITC放大系统的ELISA方法适用于人粪便中诺如病毒抗原的监测,特异性和灵敏度较好,有助于诊断由诺如病毒引起的急性腹泻。

毛细管电泳—激光诱导荧光法分离四种神经递质类氨基酸的条件优化

目的探讨毛细管电泳分离神经递质类氨基酸的影响因素。方法采用毛细管电泳法分离4种神经递质类氨基酸的荧光素异硫氰酸酯(FITC-AAs)衍生物,分析电泳缓冲液、表面活性剂以及衍生条件对分离的影响。结果电泳缓冲液的组成、浓度、pH值、表面活性剂以及衍生条件对4种FITC-AA衍生物分离有很大影响,在以75 mm ol/L,pH 9.42硼酸盐含100 mm ol/LSDS为电泳缓冲液,50 mmol/LpH 9.8硼酸盐为衍生缓冲液,4种FITC-AA衍生物20 min内得到很好分离。结论通过条件优化,毛细管电泳-激光诱导荧光技术分离神经递质类氨基酸的分离效果能得到很大提高。

鸡白痢沙门菌噬菌体PC79-13的生物学特性及其荧光标记可视化检测宿主菌

目的:通过异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)标记分离得到的鸡白痢沙门菌噬菌体PC79-13,建立荧光噬菌体检测鸡白痢沙门菌的流程。方法:从污水中分离得到一株鸡白痢沙门菌(Salmonella pullorum)的烈性噬菌体,透射电镜表征其形貌,液体培养宿主后感染测定噬菌体一步生长曲线、热稳定性、pH稳定性、紫外线稳定性及最佳感染复数,以及利用生物信息学方法分析其基因组,了解其生物学特性和基因特征。最后用FITC标记此噬菌体获得一种荧光噬菌体探针。结果:此株鸡白痢沙门菌噬菌体(命名为PC79-13)可在鸡白痢沙门菌C79-13双层琼脂平板上形成大小均一、清晰而透亮的噬菌斑。电镜观察显示:噬菌体PC79-13头部为直径约60 nm的正二十面体,长尾,属于有尾噬菌体属长尾噬菌体科。以鸡白痢沙门菌C79-13为宿主菌测得该噬菌体最佳感染复数为0.01,一步生长曲线显示噬菌体PC79-13的潜伏期为30 min,爆发期为80 min。此外,噬菌体PC79-13对酸碱环境皆有较大耐受性,pH=7.0为其最适酸碱度。其抗紫外线照射和高温能力也较强。FITC标记的荧光PC79-13,宿主鸡白痢沙门菌C79-13感染滴度有少量损失(小于10%)。荧光标记的噬菌体PC79-13能高效结合鸡白痢沙门菌C79-13及其他3株鸡白痢沙门菌,在荧光显微镜下显示绿色荧光棒状结构。荧光PC79-13不结合实验室保存的4株鼠伤寒沙门菌、4株肠炎沙门菌及52株大肠杆菌菌株。结论:分离到一株特异性裂解鸡白痢沙门菌的噬菌体PC79-13。荧光标记的PC79-13仍然保持特异性吸附实验室保存的4株鸡白痢沙门菌菌株的能力,在暗场显微镜下可见目标沙门菌呈现亮绿色荧光,检测限为10 CFU/mL,检测时间少于20 min。因此,构建的荧光噬菌体快速检测法,有潜力未来应用于临床常见鸡白痢沙门菌快检。