荧光衍生试剂1-[2-(对甲苯磺酸酯)乙基]-2-苯基咪唑[4,5-f]9,10-菲的合成及其在长链脂肪酸分析中的应用

合成了新的荧光衍生试剂1-[2-（对甲苯磺酸酯）乙基]-2-苯基眯唑[4，5-f]9，10-菲（TSEPIP），并将其作为柱前衍生化试剂，在EclipseXDB—C。色谱柱上采用梯度洗脱实现了11种长链（C20～C30）游离脂肪酸（FFA）衍生物的基线分离。利用柱后在线的串联质谱并以大气压化学电离源（APCI）的正离子模式实现了各组分的质谱定性。对土壤及3种苔藓（东亚毛灰藓、锦丝藓、羽平藓）中FFA组分的定量结果表明，苔藓植物从土壤中富集了大量的长链游离脂肪酸。荧光检测的激发波长和发射波长分别为260nm和380nm。线性回归系数大于0．9996．检测限为26．19～76．67fmol。所建立的方法具有良好的重现性．对实际样品的测定结果令人满意。

新型荧光衍生试剂用于氨基酸的毛细管电泳分离

采用新合成的荧光衍生试剂咔唑＿9＿乙基氯甲酸酯(CEOC)作为柱前衍生试剂,利用毛细管电泳仪对游离氨基酸进行了分离,研究了该试剂用于氨基酸分离的几个关键的条件,从而实现了对14种氨基酸的基线分离.

新荧光衍生试剂N-羟基琥珀酰亚胺-α-萘乙酸酯的合成及其应用研究

报道了新荧光衍生试剂Ｎ－羟基琥珀酰亚胺－α－萘乙酸酯（ＳＩＮＡ）的合成。ＳＩＮＡ的乙腈溶液在λｅｘ／λｅｍ＝２８０ｎｍ／３３９ｎｍ处有最强荧光。在碱性水溶液中，ＳＩＮＡ易与胺、氨基酸等氨基化合物进行衍生反应，生成有荧光的酰胺化合物，过量试剂在１ｈ内完全水解为相应的α－萘乙酸，衍生产物及水解物易在反相键合色谱柱上分离。研究表明，ＳＩＮＡ易制备，性能稳定，与氨基化合物易衍生，可用于柱前衍生ＨＰＬＣ分离－荧光检测氨基酸、生物胺等生物活性物质。

新型紫外、荧光衍生试剂——对酞内酰胺苯甲酰氯

介绍了对酞内酰胺苯甲酰氯作为高效液相色谱柱前衍生试剂在分析含氨基、羟基化合物方面的应用。

新型荧光衍生试剂TMDEPAB-Ⅰ的设计合成及其在HPLC分离荧光检测巯基化合物中的应用

本研究以二氟化硼二吡咯甲烷（BODIPY）为荧光团,碘乙酰胺为衍生基团,设计并合成了新型巯基化合物荧光衍生试剂1,3,5,7-四甲基-2,6-二乙基-8-苯基-（4-碘乙酰胺）-二氟化硼二吡咯甲烷（TMDEPAB-I）。以TMDEPAB-I作为柱前衍生试剂,建立了高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FD）测定谷胱甘肽、L-半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、高半胱氨酸、谷氨酰半胱氨酸、半胱氨酰甘氨酸和6-巯基嘌呤7种巯基化合物的新方法。TMDEPAB-I和巯基化合物在pH=11.0的NaOH-H3BO3缓冲溶液中,温度40℃下25min即可衍生完全。利用反相C18色谱柱,以pH=6.0的柠檬酸-NaOH缓冲溶液为流动相,梯度洗脱,各巯基化合物的衍生产物在22min内可实现基线分离,检测限（S/N=3）为1.0∽3.0nmol/L,回收率在94%∽102%之间。

用于HPLC法测定多胺类化合物的4种荧光衍生试剂的合成及其性质

设计并合成了4种相对分子质量较小、疏水性较低的荧光衍生试剂:邻氨基苯甲酸酐、N-甲基邻氨基苯甲酸酐、2-氨基烟酸活性酯和水杨酸活性酯。系统研究了这些衍生试剂与己胺的反应性能,并合成了相应的衍生物标准品,测定了衍生物的荧光性质。结果表明:4种衍生试剂中邻氨基苯甲酸酐适合用作高效液相色谱荧光检测多胺的衍生试剂。

儿茶酚胺荧光衍生试剂及其应用

较全面地评述了在HPLC－FD中应用的多种儿茶酚胺的荧光衍生试剂，比较了它们的特性、操作条件等多方面的优劣点，给出了这些试剂在HPLC中的应用概况．引用文献35篇．

香豆素类荧光衍生试剂的合成及其柱前衍生氟虫腈HPLC-FLD检测方法的建立

以4-(二乙氨基)水杨醛为原料,经缩合成环、水解反应合成一种结构新颖的香豆素类荧光衍生试剂7-(二乙氨基)-2-氧-2H-色酮-3-羧酸(记为L1);建立并优化L1与氟虫腈衍生化反应体系,优化后条件如下:催化缩合剂为1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/4-二甲氨基吡啶,反应溶剂为二氯甲烷,L1与氟虫腈用量比为11∶1,反应时间为60 min,衍生温度为45℃;对衍生产物N-(3-氰基-1-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-4-((三氟甲基)亚磺酰基)-1H-吡唑-5-基)-7-(二乙氨基)-2-氧-2H-色酮-3-甲酰胺(记为SF1)进行分离和鉴定;在此基础上,建立氟虫腈柱前衍生化高效液相色谱-荧光检测方法,方法的检出限达到0.01μg/L,定量限为0.036μg/L。该方法具有较好的灵敏度、精确性和可靠性,可应用于农产品中氟虫腈残留的检测。

一种氨基哌嗪功能化的丹磺酰氯荧光衍生试剂的合成及其在高效液相色谱法定量分析微藻油脂中的应用

自制氨基哌嗪功能化丹磺酰氯(DNS-CL)荧光衍生试剂(DNS-Pi-NH_(2)),并用其衍生化小球藻中碳原子数为10~20的典型脂肪酸[十二烷酸、十四烷酸、顺-9,12-十八(碳)烯酸、顺-7,10,13-十六(碳)烯酸、十六烷酸、顺-9-十八(碳)烯酸、十八烷酸、二十烷酸],用高效液相色谱法(HPLC)测定8种脂肪酸的含量。将小球藻脂肪酸甲酯样品用含氢氧化钾的乙醇溶液于79℃皂化60 min,滴加盐酸溶液,直至酚酞指示剂由红色变为无色。蒸发除去乙醇,所得固体经水清洗、离心、振荡、过滤,即制得小球藻脂肪酸样品。以DNS-CL和N-(2-氨基乙基)哌嗪为原料制备DNS-Pi-NH_(2),并用红外光谱、核磁共振碳谱、质谱对其结构进行表征。取制备好的DNS-Pi-NH_(2)、二丙基二硫醚、三苯基磷的乙腈溶液和1.0 mg小球藻脂肪酸样品在室温下振荡衍生10 min,所得溶液用90%(体积分数,下同)乙腈溶液稀释后,用HPLC测定其中脂肪酸衍生物的含量。以Eclipse XDB C_(8)色谱柱为固定相,以90%乙腈溶液为流动相进行等度洗脱,分离得到的目标物用荧光检测器检测。结果显示:8种脂肪酸衍生物在30 min内可实现完全分离;各脂肪酸的浓度在2.0×10^(-10)~2.0×10^(-4)mol·L^(-1)内与其对应的峰面积呈线性关系,检出限(3s/k)为21~65 pmol·L^(-1);对微藻培养液样品进行加标回收试验,所得回收率为95.3%~102%,测定值的相对标准偏差(n=5)为1.7%~2.6%;方法用于小球藻脂肪酸甲酯样品的分析,检出了十六烷酸、顺-9,12-十八(碳)烯酸、顺-7,10,13-十六(碳)烯酸、顺-9-十八(碳)烯酸,检出量分别为3.08,0.64,0.83,2.57 mg·g^(-1)。

荧光衍生化试剂2-(9-咔唑)乙酰氯的合成

以咔唑为起始原料,经氮烷基化、碱性水解、酰氯化反应,合成了荧光衍生化试剂2-(9-咔唑)乙酰氯,该试剂可用于胺、氨基酸、醇、多糖等的分析检测。以IR、FAB-MS和元素分析对目标产物进行了表征。

丹磺酰氯作为生物胺柱前衍生试剂衍生化条件的研究

报道了荧光衍生试剂丹磺酰氯同多种生物胺进行衍生化反应条件的实验研究。在丹磺酰氯浓度为9mg/mL、反应温度为60℃、反应时间为15min、缓冲体系的pH值为11.5时,衍生效果最佳。衍生试剂和衍生物的稳定性分别可达一个月和半年以上,即可以和伯胺反应又可以和仲胺反应。

脂肪胺荧光衍生物的高效液相色谱分离及质谱鉴定

采用新型荧光衍生试剂2-(9-吖啶酮)-乙酸(AAA)进行柱前衍生并经荧光检测对脂肪胺进行了高效液相色谱(HPLC)分离和在线质谱定性.衍生物荧光激发和发射波长为λex=404nm,λem=440 nm.30℃下在乙腈溶剂中用N-乙基-N'-[(3-二甲氨基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)做催化剂,衍生反应20 min后获得稳定的荧光产物.在Hypersil BDS C18(4.6 mm×100mm,5μm)色谱柱上,采用梯度洗脱对12种脂肪胺衍生物进行了优化分离.采用大气压化学电离源(APCI Source)正离子模式进行在线柱后质谱定性,实现了各种脂肪胺衍生物的快速、准确测定.该方法具有良好的重现性,多数脂肪胺的线性回归系数大于0.999 6,检测限为12.09～25.52fmol.

辛酸TSEPIP荧光衍生物制备及荧光光谱研究与分析应用

合成了荧光衍生试剂1-[2-(对甲苯磺酸酯)乙基]-2-苯基咪唑[4,5-f]9,10-菲(TSEPIP),经衍生化和固相萃取制得了TSEPIP的辛酸衍生物(TSEPIP-C8)。研究了TSEPIP-C8在包括溶剂极性、温度、卤素离子、重金属离子等不同的溶液环境因素影响下的荧光光谱性质,为高效液相色谱荧光分析检测提供了依据。在EclipseXDB-C8反相色谱柱上,在380nm检测波长下采用梯度洗脱,实现了26种脂肪酸(FFA)TSEPIP衍生物的基线分离,应用该法完成了丹参中脂肪酸的含量分析。借助柱后串联质谱APCI大气压化学电离源正离子模式,能够实现各组分的快速定性。26种脂肪酸的线性回归系数均>0.9996,检出限为3.824～47.13fmol(进样量10μL,信噪比为3:1)。

N-羟基琥珀酰亚胺-荧光素-O-乙酸酯柱前衍生HPLC分离荧光检测肽及其水解产物

探索了N-羟基琥珀酰亚胺-荧光素-O-乙酸酯(SIFA)与氧化型谷胱甘肽(GSSG)、三甘肽(Gly-Gly-Gly)、二甘肽(Gly-Gly)和组成它们的氨基酸-谷氨酸(Glu)、胱氨酸(Cys2)、甘氨酸(Gly)反应的衍生条件以及其衍生物的色谱分离条件。于含pH8.5的0.2 mmol/L H3BO3-Na2B4O7缓冲溶液中衍生25 min,衍生反应液直接进样,采用C18柱,以含42％甲醇的pH5.0 10mmol/L H3cit-Na2HPO4缓冲溶液为流动相,在λex/λem=492/513 nm处荧光检测,分离测定了六种肽及其组成氨基酸的衍生物,检出限为O.64～12 fmol。该方法具有流动相体系简单、灵敏度更高等优点。

手性荧光衍生化反相高效液相色谱法分离肾上腺素对映体

以R (- ) /S (+) 4 (N ,N dimethylaminosulfonyl) 7 (3 iso thiocyanatopyrrolidino) 2 ,1,3 benzoxadiazole(DBD PyNCS)为手性荧光衍生化试剂 ,用反相高效液相色谱法 (RP HPLC)对 DL 肾上腺素对映体进行分离。衍生化反应是在含有 7%吡啶的溶剂中 ,6 5℃温度条件下反应 35min ,生成具有荧光特性的肾上腺素非对映体衍生物(λex=4 6 0nm ,λem=5 5 0nm)。生成的非对映体衍生物在流动相为乙腈 水 (体积比为 2 8∶72 ) ,流速为 1 0mL/min时 ,在DiamonsilTMC18色谱柱 (15 0mm× 4 6mmi d ,5 μm)上分离度可达 2 6。肾上腺素对映体在 0 0 7g/L～ 0 5 0g/L时与峰面积呈良好的线性关系 (r =0 9995 ) ,峰面积测定结果的相对标准偏差为 4 3% (n =7) ,最低检测限为12ng/L(S/N =3)。

手性荧光衍生化反相高效液相色谱法分析多巴胺

以R(-)-4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(3-isothiocyanatopyrrolidino)-2,1,3-benzoxadiazole(R(-)-DBD-PyNCS)作为手性荧光衍生化试剂,用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)定量分析多巴胺.衍生化反应是在含有7%吡啶溶剂中,75℃温度条件下,进行40min,生成具有荧光特性的多巴胺衍生物(λex=460 nm,λem=550nm).生成的衍生物在流动相为乙腈-水(体积比35:65),流速为1.0mL/min,在DiamonsilTM C8(150 mm×4.6mm,i.d.,5 μm)色谱柱上保留时间约为15min.多巴胺衍生物在60～1 200ng/mL时与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 6),多巴胺浓度为1 mmol/L时,峰面积测定结果的相对标准偏差(RSD)为2.4%,检出限为12 ng/L(S/N=3).检测了盐酸多巴胺注射液中多巴胺的含量.

手性荧光衍生化反相高效液相法分离DL-异丙肾上腺素

目的探讨R(-)-4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(3-isothiocyanatopyrrolidino)-2,1,3-benzoxadiazole(DBD-PyNCS)为手性荧光衍生化试剂,建立DL-异丙肾上腺素对映体的柱前衍生反相高效液相色谱法(RP-HPLC)高灵敏分离及分析的最佳方法。方法分别取DBD-PyNCS乙腈溶液(36mmol/L)、异丙肾上腺素对映体水溶液(1mmol/L)、20%吡啶乙腈溶液各10μL混合于聚丙烯管中,用涡旋搅拌器搅拌1min,在金属恒温仪遮光65℃条件下,反应35min。取衍生产物10μL进样于HPLC中。结果生成的非对映体衍生物(λex=460nm,λem=550nm)在流动相为乙腈-水(35∶65,v/v),流速为1.0mL/min,在Diamon-silTMC18(150mmx4.6mm,i.d.,5μm)色谱柱上分离成两个完全独立的峰,D-异丙肾上腺素、L-异丙肾上腺素的保留时间分别为26min、31min。异丙肾上腺素对映体在3.23×10-4mol/L^2.63×10-3mol/L范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997),峰面积测定结果的相对标准偏差为1.83%(n=7),最低检测限为2.1×10-11mol/L(S/N=3)。结论利用柱前衍生反相高效液相色谱法可以使DL-异丙肾上腺素对映体得到快速、高效的分离。

对酞内酰胺苯甲酰氯荧光衍生法液相色谱测定苯酚和氯代酚

近年来气相色谱法、薄层色谱法和高效液相色谱法已成为应用最广的测定酚类的方法。Tsuruta等提出了对酞内酰胺苯甲酰氯(4-2(phthalimidyl)benzoyl chloride,简称PIB-Cl)的合成方法,并将PIB-Cl作为胺类和醇类化合物的荧光衍生化试剂,但将它与酚类化合物进行衍生反应及相应的色谱应用还未见报道。本文提出了PIB-Cl与酚的反应。

L-乙酰半胱氨酸对映体的手性荧光衍生化高效液相色谱法分析

以R-（-）/S-（＋）-4-N,N-二甲基磺酰胺-7-（3-异氰酸吡咯烷）-2,1,3-苯并氧杂咪唑[R-（-）/S-DBD-PyNCS]为荧光手性衍生化试剂,用反相高效液相色谱法（RP/HPLC）对乙酰半胱氨酸（NAC）对映体进行分析。在含有1%吡啶溶液中,50℃下衍生化反应60 min,生成具有荧光特性的NAC非对映体衍生物,其结构用质谱（MS）表征。该衍生物在流动相为25 mmol/L磷酸钾缓冲溶液（pH5.9）-甲醇（体积比50∶28）,流速1 mL/min时,在ODS HYPERSIL C18（200 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱上进行分离,并在荧光检测器（λex=450nm,λem=550 nm）上检测。L-NAC在0.4~40 mg/L范围内与峰面积呈良好线性关系,回归方程为Y=2.716×104X＋2.959×106,r=0.999 8,检出限（S/N=3）为0.4 ng。该方法可用于乙酰半胱氨酸制剂含量的测定。

柱前手性荧光衍生反相高效液相色谱法分离甲状腺素对映体

以R(-)-4-N,N-二甲基磺酰胺-7-(3-异氰酸吡咯烷)-2,1,3-苯并氧杂咪唑(R(-)-DBD-PyNCS)为手性荧光衍生化试剂,成功地拆分了甲状腺素对映体D,L-四碘甲状腺原氨酸(T4)和L-三碘甲状腺原氨酸(T3)。在反应温度为40℃、反应时间为20min时,R(-)-DBD-PyNCS在碱性介质中可与甲状腺素对映体生成稳定的非对映体衍生物。该衍生物在以乙腈-水-醋酸(体积比为60∶40∶1)为流动相,流速为1.0mL/min,色谱柱为Intersil(-ODS-3C18柱(150mm×4.6mm,5μm)的色谱条件下得到了充分的分离。采用荧光检测器在激发波长460nm、发射波长550nm下检测。D,L-T4和L-T3分别在0.016～0.30μg/μL和0.0067～0.22μg/μL范围内,峰面积与浓度呈良好的线性关系(r>0.999)。D,L-T4和L-T3的最低检出限分别为0.02μg/mL和0.85μg/mL(S/N=3)。在D-T4、L-T4、L-T3质量浓度分别为0.10μg/μL下测得峰面积的相对标准偏差分别为3.40%,1.63%,3.30%(n=7)。该方法成功地应用于甲状腺片中T4和T3的含量测定。