可同时检测毒死蜱、异菌脲残留的荧光试纸条研制及其应用

本文利用毒死蜱单克隆抗体、异菌脲单克隆抗体,研制出一种能够检测果蔬加工副产品类饲料中毒死蜱、异菌脲的荧光免疫层析矩阵试纸条。毒死蜱检测限为叶菜类加工副产品类饲料0.5 mg/kg,根茎类加工副产品类饲料1 mg/kg;果蔬加工副产品类饲料中异菌脲检测限为5 mg/kg,检测时间为5 min,假阳性率和假阴性率均为0,符合《兽药残留检测试剂盒(条、卡)备案技术资料要求及审查工作程序》要求,试纸条能够应用到基层实验室的大批量样本检测,具有实际意义,并且未见同时检测毒死蜱、异菌脲的二合一荧光免疫层析试纸条的相关文献报道,具有创新性。

量子点掺杂荧光凝胶标准试纸条研制及荧光免疫分析仪校准应用

利用微流控技术和量子点技术,将量子点与PDMS均匀混合并压入毛细管中固化成型,研制成量子点掺杂荧光凝胶标准试纸条。通过对量子点浓度的控制,制备了高、中、低共3种荧光强度的荧光凝胶标准试纸条,并对试纸条的光漂白性、均匀性、稳定性等方面进行了考察,评估了不确定度。结果表明该荧光凝胶标准试纸条具有良好的抗光漂白性、均匀性,可在室温避光下稳定保存180天。通过对多家荧光免疫分析仪进行校准实验,证明了该荧光凝胶试纸条具有良好的适用性,为荧光免疫分析仪的校准提供了可靠的参考依据。

时间分辨荧光免疫层析试纸条在油料饼粕黄曲霉毒素B_1检测中的应用

采用黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条及配套的时间分辨荧光速测仪,对油料饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测进行了应用研究。该时间分辨荧光免疫分析技术是基于时间分辨荧光免疫层析试纸条和载有Eu（Ⅲ）标记特异性单克隆抗体的样品瓶建立的检测技术。时间分辨荧光速测仪可内置标准曲线,直接输出检测结果。对6种油料饼粕做黄曲霉毒素B1添加回收率实验,回收率在70%~120%之间,批间、批内变异系数〈15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术与液相色谱-串联质谱法相比,检测结果相对误差〈15%。时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术测定快速、准确,技术稳定、可靠,设备经济、小型,适用于大批量油料饼粕样品的快速检测和风险评估。

番茄环斑病毒纳米荧光颗粒试纸条的研制

目的:研发一种快速、便捷检测番茄环斑病毒(ToRSV)的方法。方法:以荧光纳米颗粒为标记物,采用免疫层析试验方法制备ToRSV荧光纳米颗粒试纸条,在紫外灯下观察试纸条上的荧光信号,作为结果判定依据。结果:用制备的荧光纳米颗粒试纸条检测包括ToRSV在内的9种病毒,仅ToRSV有阳性反应,其余待测样品均呈阴性,表明该试纸条具有较好的特异性;用该荧光试纸条与传统胶体金试纸条进行灵敏度测试时,其灵敏性高于胶体金试纸条1倍以上,且稳定性试验结果良好。结论:ToRSV荧光纳米颗粒试纸条的研制,为快速检测ToRSV提供了有效手段,该方法可用于现场检验,具有广阔的应用前景。

禽流感病毒荧光免疫层析检测试纸条的研制

禽流感是重要的人兽共患病,建立现场快速灵敏的检测方法是防控其发生和流行的前提和基础。本研究采用不同亚型流感毒株交叉免疫小鼠法来免疫小鼠,通过多个亚型的NP表达蛋白来筛选杂交瘤阳性细胞株,获得分泌针对NP蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞4株。通过抗体的两两配对,基于荧光量子点作为免疫层析抗体的标记探针,借助免疫层析试纸条双抗夹心法原理,筛选出了适用于免疫层析的两株单克隆抗体,研制了禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV )荧光免疫层析检测试纸条[A lateral-flow immunoassay strip with quantum dots(QDs)against AIV , AIV -QD-LFIA],并对该试纸条进行了特异性、敏感性、可重复性及可靠性分析。试验结果显示:本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条检测禽流感标准抗原H5N1-HK的敏感性达到104 EID50 ,检测标准抗原H9N2-HK的灵敏度为102 EID50 ,比商品化的禽流感病毒抗原检测卡灵敏度高100倍,比国家标准实时荧光RT-PCR(rRT-PCR)灵敏度低约100倍;可特异性地检测出H5亚型、H7亚型、H9亚型、H1亚型、H3亚型等A型流感病毒,与 IBV 、 NDV 等常见禽呼吸道传染病病原无交叉反应,且经过了国家流感中心标准样本盘的样品测试,特异性强;同时该法具有良好重复性,连续4周检测20个样品重复结果均为阳性;小规模田间试验显示该法用于禽流感病毒的普查监测结果可靠。可见本研究所建立的 AIV -QD-LFIA试纸条可满足禽流感病毒快速、高灵敏的检测需求,具有广阔的应用空间。

呼吸道合胞病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条检测效能评价

目的评估呼吸道合胞病毒(RSV)荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度和特异性等检测效能。方法以培养的RSV和其他呼吸道病原体以及280例具有上呼吸道感染症状的患者作为标本来源。分别anjiang采用RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条和胶体金快速检测试纸条检测同一份标本,分析两种检测试纸条的检测效能。结果荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度高于胶体金快速检测试纸条;对甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道腺病毒和肺炎支原体无特异性反应。结论 RSV荧光纳米颗粒快速检测试纸条在检测性能上高于胶体金快速检测试纸条。

同时检测玉米中黄曲霉毒素B_(1)和赭曲霉毒素A的时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制

研究制备了一种可同时快速定量检测黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))和赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的二联时间分辨荧光免疫层析试纸条。采用铕系时间分辨荧光微球分别标记AFB_(1)和OTA单克隆抗体,优化荧光微球活化pH值、标记的抗体浓度、荧光探针使用量、检测线包被原浓度、质控线羊抗鼠IgG浓度、样品前处理条件等因素。结果表明:检测AFB_(1)和OTA的IC_(50)分别为1.58、3.91μg/kg,线性范围分别为0.26~9.73、1.14~13.29μg/kg,肉眼检测限分别为3.70、5.55μg/kg;与黄曲霉毒素类似物交叉率为12%~62%,与赭曲霉毒素B交叉率为58%,与其他真菌毒素无明显交叉反应;选择玉米样品进行添加回收实验,2种毒素回收率在92%~103%之间,变异系数小于15%;对实际样品的检测与高效液相色谱法和市售胶体金试纸检测结果一致;且该试纸条可在4℃稳定保存5个月以上,稳定性较好。本研究所制备的时间分辨荧光免疫层析试纸条具有灵敏、准确、快速和简便等特点,非常适用于玉米等食品和农产品中AFB_(1)和OTA的现场快速筛查。

上转换荧光猝灭试纸条检测牛奶中磺胺喹恶啉

目的:根据荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)的原理,构建一种基于上转换荧光纳米材料的新型免疫标记荧光猝灭试纸条检测牛奶中的兽药磺胺喹恶啉(sulfaquinoxaline,SQX)残留。方法:通过热分解方法合成上转换纳米荧光材料,通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒。将合成的上转换荧光颗粒固定在试纸条C线上,并将上转换荧光颗粒与SQX包被抗原的混合物固定在T线上,将胶体金标记的SQX单克隆抗体喷涂在金标垫上。滴加样品后,随着样品液的流动,金标抗体会移动到T线处并与SQX包被抗原结合,这种结合会导致抗体上的纳米金颗粒(受体)与T线上的上转换颗粒靠近(供体),从而发生FRET,产生荧光猝灭。在980 nm激发器激发波长下通过目测检测荧光强弱变化,从而实现对SQX的检测。结果:该免疫荧光猝灭试纸条检测SQX的方法检测限为1μg/L,牛奶样品的检测限为8μg/L。整个检测过程不超过15 min。结论:该方法操作简便、灵敏度高、检测时间短、结果易于判断,可以满足牛奶中SQX残留的现场快速检测的要求。

腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条应用评价

目的评估腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度和特异性。方法以培养的腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原体以及70例具有上呼吸道感染症状的患者的鼻拭子作为标本，分别同时用腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条和腺病毒胶体金快速检测试纸条检测。结果腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条的灵敏度高于胶体金快速检测试纸条；对甲、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和肺炎支原体无交差反应。结论腺病毒荧光纳米颗粒快速检测试纸条检测灵敏度高于胶体金快速检测试纸条，特异性良好。

基于BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2荧光稀土二氧化硅纳米颗粒的免疫层析试纸条检测卡那霉素

采用微波辅助合成的荧光稀土二氧化硅纳米颗粒(BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2)为标记物,建立了快速定量检测卡那霉素(Kana)残留的荧光免疫层析方法。实验结果表明,微波辅助合成的BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2纳米颗粒呈球形,粒径约36 nm,具有良好的荧光发射性能,最大吸收波长和最大发射波长分别为343和615 nm。将BHHCT-Eu^(3+)@SiO_2与卡那霉素抗体(Kana-ab)通过醛基化葡聚糖交联,合成了荧光标记抗体Eu^(3+)-Kana-ab,结合定量侧向层析读数仪,建立了牛奶中Kana残留的快速定量检测方法,对Kana的检出限(IC_(10))为0.85 ng/mL,半数抑制浓度(IC_(50))为12.76 ng/mL,检测范围(IC_(20)-IC_(80))为3.0~76.0 ng/mL,牛奶中的Kana的加标回收率范围为93.7%~97.4%,RSD为3.1%~4.6%,与Kana类似物的交叉反应均<1%。牛奶中Kana残留的测定结果与ELISA方法相关性良好。

免疫层析试纸条检测技术的研究进展

免疫层析试纸条检测技术是20世纪70年代兴起的适用于患者床旁检测或家庭检测的检验技术,相较于酶联免疫吸附试验(ELISA),其具有普适性、快捷性等优点。免疫层析试纸条检测技术具有操作简便、结果快速且稳定、不需要大型设备及成本低廉等优点,因此在临床诊断等领域迅速普及。免疫层析试纸条检测技术随着纳米标记材料的不断进步(从胶体金到荧光微球、量子点,再到纳米酶)而不断发展,展现出巨大的潜能。免疫层析试纸条的应用范围也从生物大分子检测扩展到环境监测、食品卫生检测、疾病筛查与诊断等多个领域。本文从多个方面对免疫层析试纸条检测技术的发展进行总结,并对其未来进行展望。

荧光纳米微球免疫层析技术检测新型冠状病毒研究

采用碳二亚胺(EDC)法将抗新冠病毒核衣壳蛋白(N蛋白)单克隆抗体与稀土铕荧光纳米微球共价偶联,合成荧光标记免疫探针,并用透射电子显微镜进行表征。开发了一种检测新型冠状病毒的荧光免疫检测试纸条,通过荧光检测仪测定检测线上的荧光强度,建立了定量检测新冠病毒的荧光免疫检测技术。本研究研制的新冠病毒荧光免疫层析试纸条,与荧光检测仪配套使用,对新冠病毒N蛋白的最低检出限达到0.01 ng/mL;对新冠病毒检测特异性强,与肺炎支原体、禽流感病毒等其它呼吸道肺炎病原物无交叉反应;对新冠灭活病毒的检测,用本研究开发的荧光免疫试纸条技术与荧光定量PCR进行比对验证,灵敏度为荧光定量PCR的1/100;与胶体金抗原检测试纸条相比较,比胶体金试纸条灵敏10倍以上。本研究开发的新冠病毒荧光检测试纸条,操作简便、快速、灵敏、成本低、体积小,适于现场快速检测。

鳗鱼中氯霉素荧光免疫层析快速检测方法研究

为建立鳗鱼中氯霉素残留荧光免疫层析快速检测方法,基于GSH-Mn-ZnS QD标记氯霉素单克隆抗体荧光探针,样品垫、NC膜、检测线(T线)包被量及质控线(C线)包被量等条件的优化,构建了氯霉素荧光免疫层析试纸条.结果表明,样品垫为玻纤GF-08,NC膜为Pall70 NC膜,检测线和质控线包被浓度为1.0 ng/mL为效果最佳.最优条件下,该试纸条检测检测限为100 ng/mL.该试纸条灵敏度高、特异性好、可用于鳗鱼样品中氯霉素的残留检测.

对硫磷等6种农药残留荧光免疫检测芯片的研发及应用

本文通过制备试纸条的核心结构——荧光免疫检测芯片,研制出一种能够同时检测对硫磷、毒死蜱、辛硫磷、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯这6种农药残留的荧光免疫层析矩阵试纸条。该试纸条的对硫磷检测限为果蔬0.02mg/kg,毒死蜱检测限为果蔬0.5mg/kg,辛硫磷检测限为果蔬10mg/kg,甲氰菊酯检测限为水果5mg/kg、蔬菜1mg/kg,氯氰菊酯检测限为果蔬0.5mg/kg,溴氰菊酯检测限为水果0.1mg/kg、蔬菜0.5mg/kg;检测时间为5min,假阳性率和假阴性率均为0。

头孢氨苄残留荧光免疫层析试纸条的研制

目的建立快速、灵敏的头孢氨苄残留荧光免疫层析试纸条检测法。方法以Eu-SiO2荧光纳米颗粒作为标记物,共价偶联于头孢氨苄单克隆抗体,将头孢氨苄-卵清蛋白全抗原和羊抗小鼠抗体喷涂于硝酸纤维素膜分别作为检测线和质控线,以竞争性免疫抑制反应模式制备了头孢氨苄残留荧光免疫层析试纸条。结果通过优化实验后制备的免疫层析试纸条对头孢氨苄残留的检测限为25 ng·mL-1,可在30 min内判读结果,与头孢菌素类、青霉素等的12种抗生素均无交叉反应,具有良好的特异性。结论本实验所制备的头孢氨苄残留荧光免疫层析试纸条具有操作简便、快速灵敏、便于普及等优点,为该类抗生素的检测提供了一种新型的检测方法。

H7N9禽流感病毒纳米荧光颗粒试纸条的研制

为建立一种快速、敏感的H7N9禽流感病毒检测方法,以荧光纳米颗粒为标记物,采用免疫层析法制备H7N9荧光纳米颗粒试纸条,通过紫外灯下观察试纸条上的荧光信号来进行结果判定。结果表明:用制备的荧光纳米颗粒试纸条检测多个亚型禽流感病毒,只有H7N9禽流感病毒结果呈阳性,证实该试纸条具有较好的特异性;用该荧光试纸条与国家标准禽流感RT-PCR方法同时对200份样品进行检测,符合率达到935%。本试验研制的纳米颗粒荧光试纸条可用于H7N9禽流感病毒现场快速检测,具有广阔的应用前景。

大田软海绵酸和鳍藻毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制与应用

腹泻性贝类毒素主要包括大田软海绵酸(okadaic acid,OA)、鳍藻毒素-1(dinophysis toxin-1,DTX-1)和鳍藻毒素-2(dinophysis toxin-2,DTX-2)。被贝类毒素污染的海产品可对食用者的健康构成危害。在我国近岸海域OA常有检出,DTX-1和DTX-2偶有检出。本文用荧光免疫微球标记抗OA单克隆抗体,利用牛血清白蛋白合成高偶联比的包被抗原,以硝酸纤维素膜为载体,运用免疫层析技术,研制了能够同时快速准确检测OA、DTX-1和DTX-2的时间分辨荧光免疫层析试纸条,定量限分别为90.6μg/kg、115.4μg/kg和69.8μg/kg。实验验证结果表明:本文研制的时间分辨荧光免疫层析试纸条对含有OA、DTX-1和DTX-2中的一种、两种或三种组分的毒素样品检测结果,与液相色谱-串联质谱法检测结果的相关性良好。该时间分辨荧光免疫层析试纸条灵敏、准确、操作简便,成本低,在我国海洋环境监测及海产品食用安全检测中,应用前景良好。

基于分子模拟优化筛选甲磺隆特异性多肽

该研究通过分子模拟技术优化筛选甲磺隆的高特异性多肽,并应用量子点荧光淬灭免疫层析试纸条验证模拟筛选结果。运行CDOCKER程序对乙酰乳酸合成酶晶体结构与甲磺隆分子进行对接,结合蛋白中对甲磺隆的活性空腔结构和受配体相互作用的关键氨基酸设计多肽。运行虚拟氨基酸突变对所有多肽进一步优化并建库。根据结合能初步筛选出S1、S2和S3三条多肽,应用试纸条方法进一步验证3条多肽可成功识别甲磺隆目标物并筛选出S1为最优序列,试验结果与模拟结果一致性良好。

两种检测百草枯中毒的免疫层析试纸条研制

目的 研制可直接对微量生物样本(血液、尿液等)中痕量百草枯进行快速定量检测的免疫试纸条。方法以4,4-联吡啶为原料,通过半抗原制备、动物免疫、抗体筛选和样品垫材料优化,研制两种可对血液、尿液样本中痕量百草枯进行直接检测的胶体金免疫层析试纸条(GICA)和时间分辨荧光免疫层析试纸条(TRFICA),并与高效液相色谱串联质谱和表面增强拉曼光谱技术在样品前处理要求、灵敏度、检测时间和样本适用性等多方面进行比较。结果 筛选的抗体特异性较好,对百草枯的结构类似物1,1’-亚乙基-2,2’-联吡啶二溴盐和4,4-联吡啶均无明显交叉干扰。匹配手持式荧光试纸条读卡仪,TRFICA在一定浓度范围内具有较好的定量能力,对全血样本中的检测限可达0.05 ng/ml,检测时间<10 min。相比液质联用和表面增强拉曼光谱的检测技术,具备造价低廉、操作简便、检测速度快、结果易判别且灵敏度高等优势。结论 研制的GICA和TRFICA为百草枯临床中毒患者的即时检测和预后评估提供了新的筛查确证方法。