糖谱法比较不同产地竹荪多糖结构特征

利用微波辅助水提取长裙竹荪水溶性多糖,高效凝胶排阻色谱联用多角度激光光散射和糖谱法联用荧光辅助凝胶电泳分析比较不同产地长裙竹荪多糖结构特征。结果表明:不同产地长裙竹荪多糖的高效凝胶排阻色谱图、重均分子质量及其分布均相似,并均含有α-1,4-、α-1,6-、β-1,3-和β-1,4-葡萄糖苷键,以及α-1,4-半乳糖醛酸苷键和β-2,1-果糖苷键,不同产地长裙竹荪多糖具有较高相似性。

基于糖谱法的半夏及其炮制品多糖结构特征分析及水/酶解前后抗氧化活性评价

目的:采用糖谱法,通过部分酸水解和特异性糖苷酶酶解结合高效薄层色谱法(HPTLC)和荧光辅助凝胶电泳法(PACE),分析半夏及其炮制品多糖的糖苷键结构特征,以及其水/酶解前后的抗氧化活性变化。方法:半夏及其炮制品多糖加入淀粉酶除淀粉后,超滤法除去3000 Da以下的小分子成分;精制后的多糖以酸水解和5种特异性糖苷酶酶解制备样品,采用HPTLC和PACE进行分析;以2,2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)和2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)自由基清除实验评价多糖水/酶解前后抗氧化活性的变化。结果:通过HPTLC和PACE分析发现,半夏及其炮制品多糖能被β-半乳糖苷酶、β-甘露糖酶、纤维素酶和果胶酶水解,而几乎不能被葡聚糖酶水解,表明半夏及其炮制品的多糖含有β-吡喃半乳糖苷键、β-1,4-甘露糖苷键、β-1,4-葡萄糖苷键和α-1,4-半乳糖醛酸苷键。通过体外抗氧化实验发现,半夏及其炮制品多糖经酸水解和果胶酶酶解后清除ABTS自由基能力减弱,而经纤维素酶,β-半乳糖苷酶和β-甘露糖酶酶解后,清除ABTS自由基能力增强;而半夏及其炮制品多糖经不同水/酶解后,清除DPPH自由基能力均明显增强。结论:该研究通过糖谱法分析了半夏及其炮制品多糖的糖苷键结构特征,并明确了其与抗氧化活性之间的关系,有利于进一步阐明半夏及其炮制品相关功效的物质基础,并为中药多糖结构特征分析提供新的思路与方法。

花椒多糖抗阿尔茨海默病作用及其糖谱法结构特征分析

目的:建立阿尔茨海默病(AD)小鼠模型,评价花椒多糖对AD的治疗作用并采用糖谱法分析其结构特征。方法:采用腹腔注射D-半乳糖联合灌胃三氯化铝建立快速衰老的AD小鼠模型,通过Morris水迷宫实验评价小鼠的学习记忆能力,苏木素-伊红(HE)染色和尼氏染色观察小鼠脑组织病理学状况和神经元损伤情况。对花椒多糖进行酸水解和不同糖苷酶酶解后,采用高效薄层色谱法(HPTLC)和荧光辅助凝胶电泳法(PACE)分析水解产物的结构特征。HPTLC色谱条件为采用硅胶60高效薄层色谱板,点样量5μL,展开剂乙酸乙酯-冰乙酸-水(2∶2∶1),展开2次,苯胺-二苯胺-磷酸溶液显色,在105℃加热10 min后日光下检视。PACE检测条件为34%分离胶和8%浓缩胶,电泳缓冲液为0.1 mol·L^(-1)三羟甲基氨基甲烷(Tris)-硼酸缓冲液(pH 8.2),电泳在0℃环境下进行,上样量3~6μL,用15 mA恒流跑至样品达凝胶前端,紫外灯365 nm下检视。结果:Morris水迷宫实验结果表明,花椒多糖明显改善了AD模型小鼠的学习和记忆能力,逃避潜伏期缩短,穿梭平台次数和目标象限停留时间明显增加。组织病理学实验结果表明,花椒多糖能改善AD小鼠海马组织CA1、CA3区的病理情况和神经元的损伤,且尼氏小体数量明显增加。糖谱法分析结果表明,HPTLC和PACE分析结果基本一致,花椒多糖主要能被纤维素酶和果胶酶催化酶解成小分子糖类,表明其主要含有β-1,4-葡萄糖苷键和α-1,4-半乳糖醛酸苷键,能被葡聚糖酶、β-半乳糖苷酶和β-甘露糖酶少量酶解,表明其含有少量α-1,6-葡萄糖苷键、β-吡喃半乳糖苷键和β-1,4-甘露糖苷键。结论:花椒多糖对AD小鼠有明显治疗作用,其结构中主要含有β-1,4-葡萄糖苷键和α-1,4-半乳糖醛酸苷键,可为中药多糖的结构解析提供有益借鉴。