大鼠吻侧前扣带皮层的传入投射纤维联系——荧光金逆行追踪法研究

本文采用荧光金(FG)逆行束路追踪技术研究了大鼠前扣带皮层吻侧(rostralanteriorcingulatecortex,rACC)的传入投射纤维联系。将0.2μl的3%荧光金注入到大鼠单侧rACC,7d后灌注取材,将切片贴于载玻片上,在荧光显微镜下观察FG标记神经元的分布。FG标记神经元主要位于注射区同侧的许多皮层和皮层下结构,如丘脑中线核群和板内核群、杏仁核、次级视皮层、次级听皮层、外嗅皮层和嗅周皮层等。上述结果表明rACC不但接受来自丘脑的伤害性信息传入,也接受来自视、听、嗅皮层等的环境信息的传入。本研究的结果为rACC参与痛的情绪反应提供了形态学证据。

荧光逆行追踪结合离体固定脑片细胞内Lucifer Yellow染色和荧光免疫组化──共聚焦激光扫描显微镜观察

本文介绍一种由多种方法组合的技术，包括荧光素（FastBlae）逆行追踪．离体固定脑片细胞内LuciferYellow染色、荧光免疫组织化学染色和共聚焦激光扫描显微镜观察。通过这项组合技术．可以在1μm厚度的光学切片和连续光学切片三维重构图象中同时显示传出神经元的结构和免疫阳性传入纤维及其终未．进而可判断两种成分之间的联系。在单细胞水平的突触学研究中．此项技术提供了一个简单、有效的定性和初步定量相结合的实验方法．

人工组织神经移植物修复狗坐骨神经缺损后荧光素逆行追踪试验

目的 :用荧光素逆行追踪试验了解人工组织神经移植物辅加神经再生素桥接缺损坐骨神经后 ,神经再生修复的情况。方法 :人工组织神经移植物辅加神经再生素桥接狗缺损的 30 m m坐骨神经手术后 6个月时 ,于原远端吻合口下 10 mm处注射快蓝 (FB) ;取脊髓及相应背根神经节 ,观察神经元被荧光素标记情况。结果 :脊髓及背根神经节中均出现数量不等的被 FB标记的神经元胞体。结论

荧光逆行追踪结合离体固定脑片细胞内染色技术

本文介绍一种简便易行并可在光、电镜下研究单个神经元形态和神经元回路的方法。此法主要包括荧光逆行标记、固定脑片细胞内电泳ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ和ＤＡＢ光转化三个步骤。它主要具有以下优点；（１）利用送行追踪确定神经元投射部位；（２）进一步细胞内注射可充分显示神经元的树突构筑，尤其是远端树突和树突棘；（３）经ＤＡＢ转化的神经元形象能长久保存，克服了荧光易褪色的缺点，可供详细观察和分析；（４）转化后的细胞，因已经过良好固定，结构保存较好；故可在电镜下进一步观察研究；（５）结合免疫荧光，通过Ｃｏｎｆｏｃａｌ显微镜可更清晰地观察ＬｕｃｉｆｅｒＹｅｌｌｏｗ标记的细胞与其它神经纤维的联系；（６）此外还可用于病理检查的标本，研究人体脑组织神经元的形态特征。为此，此方法不失为一种研究单个神经元形态（尤其是树突构筑）和神经元回路的良好方法。

黄鳝卵原细胞移植研究

【目的】明确黄鳝卵原细胞是否能迁移、整合到斑马鱼生殖嵴上,为建立黄鳝异体生殖途径打下研究基础。【方法】通过酶消化法制备黄鳝卵原细胞悬液,经PKH26标记卵原细胞后显微注射到受体斑马鱼胚胎中,在荧光显微镜下追踪受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞的迁移、整合及增殖情况;采用组织形态学方法检测移植受体斑马鱼胚胎的发育情况,并以半定量PCR和荧光原位杂交检测受体斑马鱼胚胎中供体黄鳝卵原细胞标记基因nanos3的表达情况。【结果】黄鳝卵巢经蛋白酶消化后,分离得到的卵原细胞悬液浓度为2.4×10^(6)个/mL,以PKH26染色后在红色荧光下呈橙黄色。荧光追踪观察结果显示,在移植后0、12、24和48 hpt的受体斑马鱼胚胎中均能检测到供体黄鳝卵原细胞,且黄鳝卵原细胞迁移至受体斑马鱼胚胎的生殖嵴上进行整合及增殖,但72 hpt受体斑马鱼出膜后荧光信号丢失。组织形态学观察结果表明,黄鳝卵原细胞注入受体斑马鱼胚胎中48 hpt后其细胞质结构松散,生殖细胞由动物极向两端迁移而分化形成组织,72 hpt和30 dpt的移植受体斑马鱼与对照组斑马鱼无明显差别。半定量PCR检测结果显示,在48 hpt受体斑马鱼胚胎中能检测黄鳝nanos3基因表达,而在72 hpt和30 hpt受体斑马鱼中表达微弱。荧光原位杂交检测结果显示,48 hpt、72 hpt和30 dpt的移植受体斑马鱼均有黄鳝nanos3基因表达。【结论】黄鳝卵原细胞在48 hpt后仍存在于受体斑马鱼胚胎内,但72 hpt后在受体斑马鱼胚胎未检测到黄鳝卵原细胞,即黄鳝卵原细胞在斑马鱼受体中迁移并最终整合到生殖嵴上,但在斑马鱼出膜后无法继续存活。因此,为了提高黄鳝生殖细胞移植成功率应选择亲缘关系近的鱼种或构建性腺不育种质作为受体。

大鼠下丘脑腹内侧核与海马神经纤维联系研究

目的:探讨大鼠下丘脑腹内侧核与海马的传入、传出神经纤维联系,为摄食和能量代谢等内脏活动的神经调节机制的深入研究提供形态学依据。方法:参考大鼠脑立体定位图谱,借助脑立体定位仪将逆行示踪剂伊文思蓝(EB)分别注入SD大鼠左侧下丘脑腹内侧核(A组,18只)或海马CA2区(B组,18只),大鼠存活3 d后,4%多聚甲醛心脏灌注,冰冻切片,荧光显微镜下观察。结果:A组双侧海马的CA2,CA3处均显示有荧光标记细胞,且对侧荧光强于同侧;B组下丘脑腹内侧核处未见荧光标记细胞。结论:下丘脑腹内侧核与海马有广泛的纤维联系,可接受来自双侧海马CA2,CA3区的神经纤维投射,两者可能在内脏活动调节中发挥重要作用。

大白鼠中缝背核的组织结构及其向尾壳核复合体的定位投射

本实验应用Nissl法、单胺荧光组织化学法和逆行荧光标记与单胺荧光组织化学结合技术对大白鼠中缝背核的组织结构及其向尾壳核(CP)复合体的定位投射进行了观察。结果表明,中缝背核(NRD)可分为五个细胞群:尾侧细胞群、背内侧细胞群、腹内侧细胞群、外侧细胞群和前侧细胞群;大量的5-羟色胺细胞分布于NRD的各个细胞群,少量儿茶酚胺(CA)细胞只见于外侧细胞区。在CP复合体注射逆行荧光化合物快兰(Fast Blue 253/50以下简称FB)之后,中缝背核内出现不少FB标记的5—HT细胞,这些投射于CP复合体的细胞主要位于背内侧细胞群和腹内侧细胞群。本实验结果为进一步研究NRD的功能提供了形态学依据。

依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓横断损伤的修复作用

目的在体内实验中观察钙依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓损伤以及神经干细胞移植的作用。方法在成年大鼠全横断脊髓损伤的局部微量注射AnnexinⅡ,观察其对损伤的脊髓神经细胞存活、神经纤维生长和损伤后的功能恢复的影响,以及对联合移植的胚胎神经干细胞移植后存活和迁移的影响。结果在动物脊髓横断损伤6周,神经干细胞移植4周后,损伤局部微量注射AnnexinⅡ+NSC移植组实验动物的运动评分结果较空白对照组和单独进行NSC移植组都有明显增高(P<0.01),脊髓损伤处的空洞面积也较上述两组显著减小(P<0.01);注射AnnexinⅡ+NSC组损伤节段以上荧光金标记神经细胞数目较空白对照组明显增多(P<0.01)。结论AnnexinⅡ蛋白可能具有减小局部损伤空洞面积,保护损伤的神经元和神经纤维并防止其走向变性和死亡的效应,并对神经干细胞的移植效应有一定的促进和协同作用,使脊髓损伤大鼠的功能得到一定程度的恢复。

冻融循环作用下非饱和粗颗粒填料水热汽迁移追踪及规律研究

为研究高铁路基非饱和粗颗粒填料水-热-汽效应,研发了适用于冻融循环作用下水-热-汽迁移特征追踪的试验装置,采用荧光素为示踪剂追踪外界补水中液态水上升的高度和变化规律。首先开展一系列关键性技术试验验证了试验方法和装置的有效性。而后在试验装置研发的基础上,开展试验研究冻融循环过程中,恒温降温模式下开放补水的非饱和粗颗粒填料中的水-热-汽效应。试样每次冻结时长72 h,融化12 h,分为3次冻结和2次融化。试验结果表明,恒温冻结模式下,冻深随着冻结次数的增加而增加。冻结过程中,粗颗粒填料外界水分补给主要以气态水的形式向土样内部迁移,融化时土样内部水分会向外界迁移。最大补水量出现在第2次冻结中。试验结束时,上冷浴盘顶部出现冰层,已冻区含水率的增幅相对比较均匀。反复冻融循环作用下,高铁路基粗颗粒填料的水、汽迁移和相变可导致路基中冰层的形成和强度的改变。