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荧光环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)技术在病毒性出血性败血症(VHS)诊断中的应用 被引量:9
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作者 安元龙 吴斌 +1 位作者 林长军 肇慧君 《中国动物检疫》 CAS 2012年第12期23-25,38,共4页
运用GenieII实时荧光等温扩增检测系统,以LAMP法荧光检测为基础,建立了对病毒性出血性败血症病毒进行荧光实时反转录环介导等温扩增检测方法。根据对VHSV病毒N基因序列的分析,针对病毒的高保守区域的6个特异性序列,设计了3对特异性引物... 运用GenieII实时荧光等温扩增检测系统,以LAMP法荧光检测为基础,建立了对病毒性出血性败血症病毒进行荧光实时反转录环介导等温扩增检测方法。根据对VHSV病毒N基因序列的分析,针对病毒的高保守区域的6个特异性序列,设计了3对特异性引物,同时加入dsDNA混合染料,对核酸扩增过程进行实时荧光监控。该方法的特异性良好,与其他鱼类弹状病毒无交叉反应。敏感度高,检测限为20fgRNA模板。实验结果表明该方法是一种操作简单、快速高效、高特异性高灵敏度的病毒检测方法。 展开更多
关键词 病毒性出血性败血症病毒 荧光逆转录lamp法 诊断
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传统方法、荧光定量PCR法、LAMP法检测痰液标本中肺炎链球菌的价值
2
作者 段影杰 张皓 黄利美 《医学理论与实践》 2024年第16期2806-2808,共3页
目的:分析传统方法、荧光定量聚合酶链反应(PCR)法、环介导恒温扩增技术(LAMP)法检测痰液标本中肺炎链球菌的价值。方法:选取2022年1月—2023年7月医院收治的100例肺炎患者,均按相同方法严格采集患者的痰液标本后,采用痰培养法、荧光定... 目的:分析传统方法、荧光定量聚合酶链反应(PCR)法、环介导恒温扩增技术(LAMP)法检测痰液标本中肺炎链球菌的价值。方法:选取2022年1月—2023年7月医院收治的100例肺炎患者,均按相同方法严格采集患者的痰液标本后,采用痰培养法、荧光定量PCR法、LAMP法检测肺炎链球菌,分析不同检测方法的检测价值。结果:100例肺炎患者痰液标本经痰细菌培养法、荧光定量PCR法、LAPM法检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05),与痰细菌培养法相比,荧光定量PCR法、LAPM法对肺炎链球菌检测一致性高(Kappa=0.826、0.830,P<0.05)。以痰细菌培养法作为金标准,荧光定量PCR法、LAPM法对肺炎链球菌检测价值比较,无统计学差异(P>0.05)。结论:传统方法、荧光定量PCR法、LAMP法检测痰液标本中肺炎链球菌均有较高价值。 展开更多
关键词 痰培养 荧光定量PCR lamp 肺炎链球菌
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的比较 被引量:1
3
作者 姜红涛 姚秀林 《中外医疗》 2015年第8期192-193,共2页
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法 ,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病... 目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法 ,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病毒分离的阳性数为26份,实时荧光定量RT-PCR的阳性数为36份,好=8.1,P<0.005。结论 通过该实验,验证了实时荧光定量RT-PCR的确快速敏感,适用于实验室快速诊断。 展开更多
关键词 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 细胞培养 流感病毒
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荧光定量PCR与逆转录PCR检测HCV RNA的比较分析 被引量:8
4
作者 张英哲 金仁顺 +1 位作者 朴东明 沈哲式 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第11期1349-1350,共2页
目的:用荧光定量PCR(FQ—PCR)和逆转录PCR(RT—PCR)法检测抗-HCV阳性血清中的HCVRNA,探讨两种方法检测结果的临床意义.方法:抗-HCV阳性血清样本1062份,其中481份用RT-PCR法检测,465份用FQ-PCR法检测,另有116份同时用两种PCR法检测.结果... 目的:用荧光定量PCR(FQ—PCR)和逆转录PCR(RT—PCR)法检测抗-HCV阳性血清中的HCVRNA,探讨两种方法检测结果的临床意义.方法:抗-HCV阳性血清样本1062份,其中481份用RT-PCR法检测,465份用FQ-PCR法检测,另有116份同时用两种PCR法检测.结果:RT—PCR法检测HCVRNA的阳性率为49.90%(240/481),FQ-PCR法的阳性率为62.58%(291/465),两种方法的阳性率有显著性差异(P<0.001).同时用两种方法检测116份,RT—PCR法阳性率为49.14%(57/116),FQ—PCR法阳性率为65.52%(76/116),也有显著性差异(P<0.05).FQ-PCR法检测的40份阴性中RT-PCR法检测出4例HCVRNA阳性.结论:FQ—PCR检测HCVRNA比RT-PCR特异性高,但RT—PCR的敏感性较FQ—PCR高,部分FQ—PCR检测的阴性结果不能排除HCVRNA阳性的可能性. 展开更多
关键词 荧光定量PCR 逆转录 比较分析 FQ-PCR检测 PCR检测 FQ-PCR HCVRNA HCV阳性血清 抗-HCV阳性 RT-PCR 显著性差异 阳性率 血清样本 临床意义 检测结果 阴性结果 特异性 敏感性 可能性
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人CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体构建及鉴定 被引量:3
5
作者 贺伟峰 吴军 +5 位作者 易绍萱 罗高兴 陈希炜 郑峻松 马兵 雷晓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期782-785,共4页
目的 构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)双基因共表达逆转录病毒载体。方法 利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中 ,脂质体法将重组质粒pCTLA4Ig IRES2 EGFP转染PA31 7细胞 ,在G41 8... 目的 构建并鉴定人CTLA4Ig和增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)双基因共表达逆转录病毒载体。方法 利用基因重组技术将IRES序列与CTLA4Ig和EGFP基因构建到逆转录病毒载体中 ,脂质体法将重组质粒pCTLA4Ig IRES2 EGFP转染PA31 7细胞 ,在G41 8选择压力下 ,通过流式细胞检测筛选得到高效共表达CTLA4Ig和EGFP并能产生高滴度重组逆转录病毒的PA31 7细胞克隆 ,MTT法测定CTLA4Ig生物学活性。结果 成功构建出含IRES序列的CTLA4Ig和EGFP双基因共表达逆转录病毒载体 ,生物学活性测定表明CTLA4Ig生物学活性没有受到影响。 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 CTLA4IG基因 EGFP基因 IRES2 逆转录病毒 双基因共表达 基因重组 脂质体 增强型绿色荧光蛋白
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逆转录-套式PCR检测汉坦病毒感染的实验研究 被引量:1
6
作者 朱子犁 刘建军 +2 位作者 阳帆 汪洪富 何建凡 《中国卫生检验杂志》 CAS 2007年第3期416-418,共3页
目的:探讨逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)检测汉坦病毒(Hantavirus,HV)感染的准确性和敏感性。方法:用RT-nested-PCR和直接免疫荧光法(direct immunofluorescence,FA)分别检测深圳市2005年肾综合征出血热宿主动物监测中捕获的... 目的:探讨逆转录-套式聚合酶链反应(RT-nested-PCR)检测汉坦病毒(Hantavirus,HV)感染的准确性和敏感性。方法:用RT-nested-PCR和直接免疫荧光法(direct immunofluorescence,FA)分别检测深圳市2005年肾综合征出血热宿主动物监测中捕获的鼠类中HV的感染情况。结果:在76份特异性总抗体阳性的鼠肺标本中,用RT-nested-PCR检出61份抗原阳性,而FA仅检出47份阳性。结论:RT-nested-PCR是一种比较准确的检测汉坦病毒感染的方法,其敏感性高于FA。 展开更多
关键词 汉坦病毒 逆转录-套式聚合酶链反应 直接免疫荧光
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食蟹猴(Macaca Fascicularis)血清中三种逆转录病毒抗体调查 被引量:1
7
作者 周亚敏 李绍东 段幸生 《中国实验动物学杂志》 1997年第2期73-74,共2页
本文用免疫荧光法(IFA)对657只食蟹猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴T淋巴细胞性病毒Ⅰ型(STLV-1)和D型逆转录病毒Ⅰ型(SRV-1)的血清抗体作了检查。SIV抗体阳性猴为95只(14.5%),STLV-1抗体阳性猴为98只(14.9%),SRV-1抗体... 本文用免疫荧光法(IFA)对657只食蟹猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴T淋巴细胞性病毒Ⅰ型(STLV-1)和D型逆转录病毒Ⅰ型(SRV-1)的血清抗体作了检查。SIV抗体阳性猴为95只(14.5%),STLV-1抗体阳性猴为98只(14.9%),SRV-1抗体阳性猴为119只(18.1%)。本文还比较了经不同饲养时间的猴群中三种逆转录病毒抗体的阳性检出率,结果表明:三种逆转录病毒抗体阳性率随饲养时间的增长而增高。同时查出了一种以上逆转录病毒抗体阳性的动物。 展开更多
关键词 逆转录病毒 抗体阳性率 SIV 血清抗体 食蟹猴 猴免疫缺陷病毒 免疫荧光 饲养时间 动物 阳性检出率
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多重荧光LAMP法在食源性致病菌风险监测中的应用 被引量:1
8
作者 田浩 李光耀 史笑娜 《食品工程》 2017年第3期23-27,共5页
为解决食源性致病菌传统检测方法耗时长、工作量大问题,利用金黄色葡萄球菌femA序列和沙门氏菌invA序列设计了两套LAMP引物,添加荧光染料建立混合体系,通过恒温荧光检测仪对目标DNA进行扩增得到相关曲线,同时对扩增产物进行电泳分析,并... 为解决食源性致病菌传统检测方法耗时长、工作量大问题,利用金黄色葡萄球菌femA序列和沙门氏菌invA序列设计了两套LAMP引物,添加荧光染料建立混合体系,通过恒温荧光检测仪对目标DNA进行扩增得到相关曲线,同时对扩增产物进行电泳分析,并且对100批次食品样品进行了效果验证。试验结果表明,该检测方法的普筛性与特异性良好,灵敏度达到71 CFU/mL,检测过程不易污染、耗时短。该方法可应用于部分食源性致病菌的快速初筛。 展开更多
关键词 多重荧光lamp 致病菌 食品检测 快速检测
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人类内源性逆转录病毒E跨膜糖蛋白在正常人、银屑病及异位性皮炎皮肤中的表达不同
9
作者 Bessis D. Molè s J.P. +1 位作者 Basset-Sé guin N. 崔荣 《世界核心医学期刊文摘(皮肤病学分册)》 2005年第3期50-51,共2页
Background: Psoriasis is a common inflammatory skin disease characterized by uncontrolled proliferation of keratinocytes and recruitment of T lymphocytes int o the skin. The possible role of human endogenous retroviru... Background: Psoriasis is a common inflammatory skin disease characterized by uncontrolled proliferation of keratinocytes and recruitment of T lymphocytes int o the skin. The possible role of human endogenous retroviruses (HERVs) in the in duction of psoriasis has been suggested, based upon the previous observations of retrovirus-like particles in psoriasis from skin lesional plaques, urine and stimulated lymphocytes. Objectives: To investigate the expression of HERV-E tr ansmembrane envelope glycoprotein (HERV-E env) in normal, psoriatic and atopic human skin, and to examine the influence of ultraviolet (UV) B irradiation onHE RV-E env expression in normal human epidermal keratinocytes. Methods: The anal ysis was performed on both skin biopsies and organotypic skin cultures using imm unofluorescence andWestern immunoblotting. UVB irradiation (312 nm) of cultured normal human keratinocytes was performed using a dose of 30 mJ cm- 2. Results: Positive staining was observed in most of the psoriatic and atopic skin samples, whereas only 15% of the normal skin samples were faintly positive. In additio n, the pattern of expression of HERV- E env differed markedly in psoriasis vs. atopy. By Western blotting analysis, two main proteins of 54 and 57 kDa were det ected in extracts of normal skin, normal keratinocyte cultures and reconstructed epidermis from psoriatic and normal punch biopsies. An increased level of expre ssion of these proteins was noted in extracts from psoriatic vs. normal reconstr ucted epidermis. The overexpression of the 57- kDa protein in normal human cult ured keratinocytes was dramatically reduced by UVB irradiation. Conclusions: The se data suggest for the first time that HERV-E env is expressed in normal and pathological human skin. Further studies are now required to elucidate the role of such viral proteins in the pathogenesis of psoriasis. 展开更多
关键词 异位性皮炎 银屑病 逆转录病毒 内源 人角质形成细胞 蛋白印迹 正常皮肤组织 活检标本 组织培养 免疫荧光
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经典方法与LaSRT法测定绿色荧光蛋白标记重组病毒滴度的研究 被引量:15
10
作者 江千里 王健民 +2 位作者 江汕 温丽敏 周虹 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第10期1101-1103,共3页
目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl... 目的以带有绿色荧光蛋白(GFP)标记基因的重组逆转录病毒为例,对经典方法与批量快速病毒滴度法(LaSRT)测定病毒滴度进行比较研究。方法(1)经典方法:于6孔培养板分别接种NIH3T3细胞2×105/孔,培养12 h 后分别以0.5 ml、50 μl和5 μl带有GFP 标记基因的病毒感染,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以流式细胞仪检测细胞eGFP+率。病毒滴度(TU/ml)=(2×105×细胞eGFP+率)/病毒原液体积。(2)LaSRT法:NIH3T3 细胞以5 000/孔接种于96 孔板,12 h后更换成完全培养液90 μl/孔,以8孔为一组,第1 孔中加入病毒液10 μl,此后每孔依次10∶1 倍比稀释,聚凝胺终浓度为8 μg/ml,48 h后以浓度自高到低的方向,在荧光倒置显微镜下确定计量孔(第n孔),计数孔中的阳性细胞数m。病毒滴度(TU/ml)=m×10n+1。(3)对7批病毒以LaSRT法研究,探讨冻存/复苏过程对重组病毒滴度的影响。结果经典方法测定的重组病毒滴度为(1.54±0.38)×106 TU/ml,LaSRT法测定的病毒滴度为(1.33±0.57)×106 TU/ml,两者无统计学差异(P>0.05)。LaSRT法可以大批量、快速地测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度。单次冻存/复苏后的病毒滴度为冻存前的(18.1±9.9)%(n=7)。结论LaSRT法和经典方法测定以GFP为标记基因的重组病毒滴度,结果无统计学差异; 展开更多
关键词 经典方 LaSRT 测定 绿色荧光蛋白 病毒滴度测定 基因重组逆转录病毒
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间接免疫荧光法与RT-PCR法检测鼠肺汉坦病毒带毒率 被引量:2
11
作者 杨洋 张振 +1 位作者 张旭 白梅 《中华卫生杀虫药械》 CAS 2020年第1期36-38,共3页
目的对间接免疫荧光法(IFA)和逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)两种检测鼠肺汉坦病毒(HV)的实验方法进行比较,为进一步完善出血热病毒实验室检测方案提供依据。方法采用IFA和RT-PCR对2018年收集的200份鼠肺进行HV检测、分型,统计鼠种和数量... 目的对间接免疫荧光法(IFA)和逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)两种检测鼠肺汉坦病毒(HV)的实验方法进行比较,为进一步完善出血热病毒实验室检测方案提供依据。方法采用IFA和RT-PCR对2018年收集的200份鼠肺进行HV检测、分型,统计鼠种和数量。结果锦州市鼠带汉坦病毒率2014年最高为5.42%(11/203),2010年最低为0.95%(1/105)。人间肾综合征出血热发病率2014年最高为6.77/10万,2010年最低为2.27/10万。鼠带毒指数与人间出血热发病率正相关(r=0.75,P<0.05);IFA检测鼠肺HA抗原阳性率为2.00%(4/200);RT-PCR检测鼠肺HA核酸阳性率为4.00%(8/200),两种方法检测结果有统计学差异(χ~2=13.01,P<0.01);锦州地区主要流行株为汉城(SEO)型HV。结论 RT-PCR检测鼠肺HV核酸的敏感性高于IFA检测鼠肺HV抗原的敏感性,可以推广应用RT-PCR检测鼠肺带毒率的实验室检测技术。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 汉坦病毒 间接免疫荧光 逆转录聚合酶连反应
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LAMP法鸟类性别鉴定的研究与应用 被引量:7
12
作者 李巍 杨卓 +5 位作者 陈明非 高东梅 刘佳 苍真伟 程淑晶 王德强 《现代畜牧兽医》 2017年第3期12-18,共7页
本研究利用鸡W染色体中EE0.6序列上的Eco R片段为靶序列,进行引物设计,建立了基于LAMP法的快速鸟类性别鉴定方法。试验表明,该引物可用于多属种鸟类的性别鉴定,在64℃条件下,60 min即可完成检测。同时利用实时浊度法和荧光目视法两种LAM... 本研究利用鸡W染色体中EE0.6序列上的Eco R片段为靶序列,进行引物设计,建立了基于LAMP法的快速鸟类性别鉴定方法。试验表明,该引物可用于多属种鸟类的性别鉴定,在64℃条件下,60 min即可完成检测。同时利用实时浊度法和荧光目视法两种LAMP检测法对体系进行了敏感性试验,并与PCR方法进行比较,实时浊度法与荧光目视法敏感性相近,是PCR方法的100倍。方法建立后,在大连老虎滩鸟语林进行了11目14科35种鸟类的性别鉴定临床试验,符合率为100%。 展开更多
关键词 lamp 鸟类 性别鉴定 实时浊度 荧光目视
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与RT-PCR法及细胞培养法检测甲_3型流行性感冒病毒的比较 被引量:14
13
作者 李婵 卢亦愚 +3 位作者 严菊英 冯燕 史雯 茅海燕 《中国计划免疫》 2005年第5期360-363,共4页
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性。方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检... 目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性。方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检的60份疑似流感标本检测甲3型流感病毒。结果细胞病毒分离的阳性数为10份,RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR的阳性数分别为12份和15份。实时荧光定量RT-PCR的灵敏度达0.01TCID50,且对甲1型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征冠状病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论实时荧光定量RT-PCR由于检测在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中最为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断。 展开更多
关键词 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 逆转录-聚合酶链反应 细胞培养 甲3型流行性感冒病毒
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直接免疫荧光法与多重逆转录聚合酶链反应对呼吸道感染常见病毒的诊断价值 被引量:3
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作者 孔梅 邢长永 王莺 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第23期5422-5423,共2页
目的探讨直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道常见病毒人鼻病毒(HRV)感染患者分泌物的检测,判断其临床诊断价值。方法选取2010年2月-2011年12月收集的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物210例,分别用DFA和RT-PCR进... 目的探讨直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道常见病毒人鼻病毒(HRV)感染患者分泌物的检测,判断其临床诊断价值。方法选取2010年2月-2011年12月收集的急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物210例,分别用DFA和RT-PCR进行检测,对两组测定方法的检测结果进行判定。结果多重RT-PCR检出112份阳性标本,阳性率为53.33%,DFA检测出89份阳性标本,阳性率为42.38%,两组比较,差异有统计学意义(χ2=27.623,P<0.01)。结论 DFA检测方法可以广泛适用于临床检测中;多重RT-PCR检测方法的敏感性高,检测病毒的范围广,可以做亚型鉴定方法,适用于呼吸道病毒流行病学的调查研究。 展开更多
关键词 直接免疫荧光 多重逆转录聚合酶链反应 呼吸道 人鼻病毒
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实时荧光RT-PCR法检测急性髓系白血病患者端粒酶逆转录酶mRNA的表达水平 被引量:1
15
作者 李一荣 吴健民 +4 位作者 王琳 王治萍 刘立新 王利君 胡丽华 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期441-442,共2页
关键词 实时荧光RT-PCR 急性髓系白血病 端粒酶逆转录酶MRNA 基因表达 荧光强度
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免疫荧光分析法诊断A、B型流感病毒中的临床应用情况 被引量:4
16
作者 孔凡明 《心血管外科杂志(电子版)》 2018年第3期528-528,共1页
目的分析免疫荧光分析法诊断A、B型流感病毒中的临床应用情况。方法研究时段自2016年7月-2018年7月,选定本院100例流感患者鼻咽拭子样本,采用GICA(胶体金免疫层析)法以及Sofia InfluenzaA+B FIA检测系统检测A、B型流感病毒。结果 Sofia ... 目的分析免疫荧光分析法诊断A、B型流感病毒中的临床应用情况。方法研究时段自2016年7月-2018年7月,选定本院100例流感患者鼻咽拭子样本,采用GICA(胶体金免疫层析)法以及Sofia InfluenzaA+B FIA检测系统检测A、B型流感病毒。结果 Sofia InfluenzaA+B FIA检测法的阳性检出率(95.00%)显著高于GICA检测法(62.00%)的,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Sofia InfluenzaA+B FIA检测系统具有较高的特异性、灵敏度,可迅速诊断A、B型流感病毒,值得借鉴。 展开更多
关键词 免疫荧光分析 流感病毒 逆转录聚合酶链反应
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PCR-荧光探针法在成人HIV/AIDS接受长期高效抗逆转录病毒治疗后的应用研究
17
作者 魏柯雯 王继宝 +3 位作者 高先 张园园 姚均 段松 《中国病毒病杂志》 CAS 2016年第6期444-447,共4页
目的探讨PCR-荧光探针法检测成人艾滋病病毒感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)后病毒储存库及病毒储存库与治疗效果的关系。方法对91例规范接受HAART治疗5~10年的HIV-1患者采集外周血标本进行横断面研... 目的探讨PCR-荧光探针法检测成人艾滋病病毒感染者和艾滋病患者(HIV/AIDS)接受高效抗逆转录病毒治疗(HAART)后病毒储存库及病毒储存库与治疗效果的关系。方法对91例规范接受HAART治疗5~10年的HIV-1患者采集外周血标本进行横断面研究。通过分支DNA(bDNA)法检测血浆HIV-1RNA病毒载量;用PCR-荧光探针法检测外周血HIV-1DNA水平;用流式细胞术检测外周血CD4+T细胞数量;对数据进行统计学处理。结果 91例接受5~10年HAART治疗的HIV-1患者外周血HIV-1RNA均低于检测下限(〈50CPs/ml);细胞中HIV-1前病毒DNA的平均含量为1.77±0.76(lgCPs/106个细胞);CD4+T细胞平均数量为(479.56±188.11)个/μl。结论在血浆HIV-1RNA低于检测下限时,PCR-荧光探针法能够检测出经过长期HAART治疗(5~10年)后成人HIV/AIDS的前病毒HIV-1DNA,对于抗病毒治疗疗效的判断以及病情进展的预测都有重要的意义。 展开更多
关键词 高效抗逆转录病毒治疗(HAART) HIV-1前病毒 病毒储存库 PCR-荧光探针
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上海市儿童下呼吸道感染常见病毒诊断方法比较 被引量:24
18
作者 王春 赵百慧 +1 位作者 张泓 张曦 《检验医学》 CAS 北大核心 2011年第9期589-592,共4页
目的应用直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道感染患儿鼻咽分泌物的常见病毒进行检测,比较2种方法的符合率并评估其临床应用价值。方法选取急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物540例,分别用DFA和多重RT-PCR进行检测... 目的应用直接免疫荧光法(DFA)和多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对呼吸道感染患儿鼻咽分泌物的常见病毒进行检测,比较2种方法的符合率并评估其临床应用价值。方法选取急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物540例,分别用DFA和多重RT-PCR进行检测,分析其结果。结果 DFA检测阳性率为43.9%(237/540),多重RT-PCR检测阳性率为55.7%(301/540),多重RT-PCR阳性检出率显著高于DFA的阳性检出率(χ2=29.093,P<0.01)。DFA和多重RT-PCR同时阳性163例,DFA阳性而多重RT-PCR阴性74例,多重RT-PCR阳性而DFA阴性138例,DFA和多重RT-PCR同时阴性165例。DFA和多重RT-PCR同时为阳性的163例标本中,有15例标本两者检测结果不一致,符合率为91.0%。结论 DFA快速、简便、特异性及敏感性高,适用于临床检测。多重RT-PCR的敏感性高,检测病毒谱广,且可以做亚型鉴定,适用于呼吸道病毒流行病学的调查。 展开更多
关键词 呼吸道病毒感染 直接免疫荧光 多重逆转录聚合酶链反应 儿童
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hTERT转录调控区克隆及在人癌细胞的转录特异性分析 被引量:4
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作者 杨邵敏 张波 +1 位作者 廖松林 侯琳 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期470-474,共5页
目的 通过克隆人癌细胞中端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因上游转录调控区并观察其在不同人癌细胞和正常细胞中的转录活性 ,探讨人hTERT基因在细胞癌变中的激活机制。方法 用PCR方法克隆HeLa和PG癌细胞hTERT基因转录调控区 ,并进行DNA序列... 目的 通过克隆人癌细胞中端粒酶逆转录酶 (hTERT)基因上游转录调控区并观察其在不同人癌细胞和正常细胞中的转录活性 ,探讨人hTERT基因在细胞癌变中的激活机制。方法 用PCR方法克隆HeLa和PG癌细胞hTERT基因转录调控区 ,并进行DNA序列测定 ;将转录调控区重组于荧光酶报告载体 ,瞬时转染人癌细胞HeLa、PG、2 93和正常人二倍体细胞 2BS后 ,测定荧光酶活性以确定调控区转录活性。结果 于人HeLa和PG癌细胞分别克隆hTERT基因转录起始点附近 6 36bp(- 5 31~ +90 )和 95 0bp(- 5 31~ +40 4 )的转录调节区 ,其序列与GenBank人hTERT启动子序列相同。将两转录调控区分别重组于荧光酶报告载体pGL2 ,得到pGL2 6 36和pGL2 95 0 ,并同时构建了pGL2 X(- 5 31~ - 2 72 )和pGL2 S (第一内含子区 )。瞬时转染细胞后发现 :pGL2 6 36和pGL2 95 0在癌细胞中的转录活性明显增高 ,而在人二倍体 2BS细胞中几无转录活性。重组体pGL2 S和pGL2 X在端粒酶阳性肿瘤细胞中的转录活性明显降低 ,pGL2 S的转录活性略高于pGL2 X。结论 人HeLa和PG癌细胞中hTERT转录调控区无基因突变并高度保存 ;hTERT调控区具有癌细胞特异性转录调节活性 ,表明hTERT转录水平的激活与端粒酶阳性及细胞癌变密切相关 ;hTERT上游 2 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录 荧光酶分析 基因调控 基因克隆
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PCR方法检测食品中沙门氏菌研究进展 被引量:16
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作者 汪月霞 赵会杰 赵一丹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第24期11435-11436,11445,共3页
对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时... 对目前出现的一些具有代表性的食品中沙门氏菌的PCR检测方法做一综述,由此可以得出,目前开发出的检测食品中沙门氏菌的PCR方法正逐渐以多种PCR方法相结合、多重PCR技术以及食品样品预处理方法等为主,以开发出更快速、灵敏、简便、实时、低廉的食源性沙门氏菌PCR检测方法。 展开更多
关键词 沙门氏菌 多重逆转录PCR 毛细管PCR 荧光定量PCR DNA环介导的恒温扩增
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