GFP阳性细胞在不同荧光通道下的凋亡检测比较

目的比较GFP阳性细胞在不同荧光通道下的凋亡检测效果。方法使用流式细胞技术选用Annexin V-PE/7-AAD双标法检测GFP阳性细胞的凋亡,采用三色均用488 nm激光激发,和GFP用488 nm激光激发,PE、7-AAD用561 nm激光激发两种方案。结果仅使用488 nm激光器,可见GFP/PE/7-AAD三色之间漏光严重,均需补偿且补偿值极大,样品管补偿前后的PE/7-AAD双参数散点图形态改变极大。而第二种方案可见GFP往PE和7-AAD漏光少,补偿值极小甚至不用补偿,PE与7-AAD之间补偿极大,样品管补偿前后的PE/7-AAD双参数散点图形态改变大,但形态改变明显小于均用488 nm激光器激发的图形。用两个方案检测的凋亡率基本一致。结论实验室应根据所拥有流式细胞仪的激光和荧光通道滤光片的配置来选择最适合的凋亡试剂盒。如果仪器允许,尽量采用多激光激发减少光谱重叠。若有561 nm激光器,其拓展了荧光通道的选择,减少了补偿带来的麻烦,有更多的优势。若只有488 nm未配561 nm激光的小型流式细胞仪,可通过齐全的单阳管设置,合适的荧光补偿调节也可以获得满意的检测结果。

双通道原子荧光法同时测定地表水中砷和汞含量

建立了双通道原子荧光法同时测定地表水中砷和汞含量的方法。采用0.2%(质量分数)氢氧化钾-2%(质量分数)硼氢化钾溶液为还原剂,5%(质量分数)盐酸-10%(质量分数)硫脲-10%(质量分数)抗坏血酸为介质液,双通道原子荧光仪在线监测。结果表明,砷元素在1.0~20.0μg/L、汞在0.10~2.00μg/L范围内线性关系良好,方法检出限分别为0.125、0.012 5μg/L,加标回收率为90.6%~109.0%,精密度RSD为1.48%~3.89%。该方法操作简便,同时测定地表水中砷和汞含量准确高效,适用性强。

基于反向荧光增强双信号通道免疫层析方法检测动物源食品中克百威残留

本研究建立了可视化-反向荧光增强双信号通道免疫层析技术(V-rFICTs),通过观察多巴胺包金的显色减弱以及量子点荧光的反向增强,实现对克百威的双信号、半定量检测。通过设计合成半抗原制备获得特异性单克隆抗体,以多巴胺包金核壳纳米材料标记抗体作为检测探针,将量子点(QDs-OVA)与包被原(CAR-OVA)喷涂于硝酸纤维膜(NC膜)上作为检测线(T线),同时喷涂兔抗鼠IgG抗体作为质控线(C线),组装成免疫层析试纸条。当样品不含克百威时,标记抗体结合在T线,裸眼可见明显紫红色条带,荧光猝灭,当克百威存在时,T线紫红色条带变弱或消失,而紫外下绿色荧光显现并随着克百威浓度的升高而增强。方法研究结果显示,V-rFICTs在可见光检测模式下的检测限为50 ng/mL,在荧光模式下的检测限为3.13 ng/mL,灵敏度提升15倍以上,15 min内可完成检测,与其他结构类似物无交叉反应。经方法验证,检测结果与液相色谱-串联质谱方法一致,具有较好的应用潜力。

液相色谱-双通道原子荧光检测联用法同时测定砷和硒的形态

建立了一种利用高效液相色谱-双通道原子荧光检测联用同时进行砷和硒形态分析的方法。以10mmol/LNH4H2PO4溶液（pH5.6）（添加2.5%（体积分数）的甲醇）为流动相,在12min内同时分离了三价砷（As（Ⅲ））、一甲基砷（MMA）、二甲基砷（DMA）、五价砷（As（Ⅴ））、硒代胱氨酸（SeCys）、硒代蛋氨酸（SeMet）和四价硒[Se（Ⅳ）]等化合物。As（Ⅲ）、DMA、MMA、As（Ⅴ）、SeCys、SeMet和Se（Ⅳ）的检出限分别为1,3,2,3,4,18和3μg/L（进样量为200μL）,5次测定的相对标准偏差为1.9%-6.1%（As100μg/L,Se300μg/L）。应用该方法对人体尿样及硒酵母片中砷和硒的形态进行了分析,目标物在尿样中的加标回收率为83%～108%,在硒酵母片中的加标回收率为88%～105%。实验结果表明,该方法可用于尿样及药品中砷和硒形态的日常分析。该方法减少了样品的分析时间和试剂用量,降低了工作强度,提高了工作效率。

多通道海洋荧光激光雷达溢油监测系统

主要介绍了可用于海上溢油监测的多通道海洋荧光激光雷达系统及实验研究。该激光雷达系统采用Nd：YAG激光器三倍频激光（355 nm）作为探测光源,使用口径为20 cm的卡塞格林望远镜接收海面返回的荧光信号,经光栅光谱仪分光后对380~690 nm范围内的荧光信号进行采集。通过实验室激光诱发油样本的荧光数据分析,研究了不同溢油种类的荧光光谱特征,并给出了区分溢油污染程度的快速分析方法。2009年以来在青岛近海进行多次实验并分析不同的海面污染类型和污染程度,实验结果表明,该雷达系统海面溢油监测性能可靠,能够准确判别溢油种类,并可区分溢油污染程度。最后讨论了雷达探测中存在的噪声影响。

生物微流控PCR荧光芯片微通道动态检测系统研究

研究和建立了生物微流控PCR荧光芯片微流控微通道动态检测系统,对该系统的多光路光纤校准进行了研究,获得了荧光检测的重复性(偏差:2.6%)和稳定性(偏差》2.7%)等.实验结果表明:该系统可用于准分子激光制备高聚物基生物微流控PCR荧光芯片最佳工艺激光制备参数的优化设计;可用于生物微流控PCR荧光芯片生物分析时的实时荧光定量检测;也可用于对激光荧光检测微型化技术与生物芯片光谱检测集成化提供多功能实验基础和性能评估体系.

多通道实时荧光定量PCR检测HPV DNA结果分析

目的探讨多通道实时荧光定量PCR检测HPVDNA的效果，并应用于日常检测工作。方法对临床1100例宫颈分泌物标本采用多通道实时荧光定量PCR仪进行8种高危HPVDNA分型及定量检测。8种高危HPV型别为主要高危型HPV16、18、45、31和次要高危型HPV33、52、58、67。结果在1100例标本中排除了14例B球蛋白为阴性的标本，剩余1086例标本总体的内标平均值为3．71×10^6IU／ml。随机重复性试验和对每个型别的各浓度标本进行的重复性试验每次扩增均为阳性，型别符合率为100％。共检测出阳性标本287例，HPV16、HPV18／45、HPV31、次要高危型和合并感染各有46、17、14、146和64例，分别占总阳性标本的16％、6％、5％、51％和22％。所有标本绝对定量值的分布近似于正态分布。结论多通道荧光定量PCR检测HPVDNA灵敏度高、复性好，可用于临床HPV感染的筛查与宫颈病变程度预测以及患者术后疗效观察。

双通道-原子荧光光谱和固体进样-冷原子吸收光谱测定岩石中痕量汞

岩石中的痕量汞检测往往因内部晶胞结构复杂,使得热水浴酸解提取不彻底、挥发损失以及接触污染等引起结果偏差和不稳定。本文在前人研究的基础上,采用中国研制的双通道-原子荧光光谱仪和固体进样-冷原子吸收光谱仪分析岩石中的痕量汞,以探索最佳检测方案。双通道-原子荧光光谱分析中,优化的实验条件为:以80%王水溶液对样品沸水浴提取50min,灯电流30mA,负高压280V,载气流速600mL/min,屏蔽气流速1000mL/min。测定痕量汞浓度范围为0.05~2μg/L,线性相关系数r>0.999,取样量为0.2g下方法检出限为0.285μg/kg,相对标准偏差为7.3%~15.3%。固体进样-冷原子吸收法光谱分析中,避免了化学消解处理直接进样测定,主要实验条件为:载气流速180mL/min,裂解程序700℃保持60s。测定痕量汞浓度范围为0.05~5ng,线性相关系数r>0.999,取样量为0.1g下方法检出限为0.046μg/kg,相对标准偏差为1.3%~4.2%。通过实验结果对比表明,固体进样-冷原子吸收光谱法的操作性、检出限以及稳定性均优于双通道-原子荧光光谱法,更适用于岩石中的痕量汞测定。

恒温PCR双通道荧光读数仪的系统设计

针对传统PCR检测仪在检测速度和精度上存在的问题,文中设计了恒温PCR双通道荧光读数仪系统,系统采用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT),大幅提高了扩增反应时间。然而考虑到SAT技术仍无法避免假阴性,文中在此基础上提出了双通道的光学系统设计,在检测样品阴阳性的同时对阴性样品进行实时监控。结果表明,该系统最快可在30 min内完成检测,可有效指示假阴性现象的出现,并具有检测速度快、精确度高、且稳定性好等优点。

PLT-F通道在异常血小板计数检测中的应用进展

准确的血小板计数对于止血异常的诊断和处理至关重要。阻抗法是目前临床实验室检测血小板计数的主流方法,该方法虽然能够正确计数正常血液标本中的血小板,但往往会对一些异常血液标本中血小板进行错误计数。血小板的数值极高或极低及各种干扰因素都会影响血小板计数的准确性。据此,Sysmex-XN系列血液分析系统的荧光血小板(PLT-F)通道采用了流式检测的原理,用荧光恶嗪与富含核酸的血小板细胞器特异性结合,专门染色血小板。该文对PLT-F通道在各种异常血小板计数检测中的性能做一综述,阐述其与传统血小板计数方法相比的优势,以及目前存在的局限性,以期最大限度地发挥PLT-F通道的临床应用价值。

多通道荧光PCR技术检测HPV在宫颈癌筛查中的临床价值

目的探讨多通道荧光聚合酶链反应(PCR)技术检测HPV在宫颈癌筛查中的临床应用价值。方法应用多通道荧光PCR技术对临床1 039例宫颈细胞标本进行18种高危HPV DNA分型及定量检测,并与PCR-反向斑点杂交法(PCR-RDB)的检测结果进行比较,两种方法检测结果不一致的标本采用序列分析方法进行验证。结果在1 039例标本中,多通道实时荧光PCR法阳性检出率为14.24%(148/1 039),PCR-RDB法阳性检出率为18.94%(196/1 039),两种方法检测结果一致率为99.4%(Kappa值为0.976)。结论多通道荧光PCR技术检测HPV可作为宫颈癌的初筛方法,值得临床推广使用。

湿法消解-双通道原子荧光光谱法同时测定海洋沉积物中汞和砷

建立了湿法消解-双通道原子荧光光谱法同时测定海洋沉积物中汞和砷含量的方法。将海洋沉积物样品风干后研磨,过筛,取0.15 g样品,加入体积比为1∶3∶4的硝酸-盐酸-水混合溶液5 mL,沸水浴加热1 h后冷却,加入50.0 g·L^(-1)硫脲-50.0 g·L^(-1)抗坏血酸混合溶液5 mL,用水定容至25 mL,供配有汞和砷空心阴极灯双通道原子荧光光度计分析。载流介质为10%(体积分数)盐酸溶液,还原剂(含2 g·L^(-1)氢氧化钠的15 g·L^(-1)硼酸化钠溶液)通过在线方式加入,以仪器自动稀释的方式配制混合标准溶液系列,外标法定量。结果显示:汞和砷的质量浓度分别在5.00μg·L^(-1)内和100μg·L^(-1)内与其对应的荧光强度呈线性关系,检出限(3s/k)分别为0.002,0.03 mg·kg^(-1)。对6个样品进行加标回收试验,回收率分别为90.3%~96.0%和90.5%~97.8%,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于5.0%。

双通道原子荧光法同时测定复方丹参片中砷和汞的含量

目的:建立双通道原子荧光法同时测定复方丹参片中砷和汞的含量。方法:样品采用浓硝酸和过氧化氢混合液进行预消化,再采用微波消解仪在3种条件下进行消化。优化的仪器工作参数:光电倍增管负高压为270V,砷空心阴极灯总电流为60mA,汞空心阴极灯总电流为30mA,原子化器高度为8mm,载气流量为400ml·min^(-1),屏蔽气流量为800ml·min^(-1)。结果:本方法砷和汞的线性范围分别为0～60ng·ml^(-1)和0～5ng·ml^(-1),相关系数分别为r=0.999 8(n=6)和r=0.999 5(n=6),检出限分别为1.38μg·kg^(-1)和0.078μg·kg^(-1),回收率分别为99.34%和98.38%。结论:本法可用于复方丹参片中砷和汞含量的测定。

基于多通道信息融合的激光扫描共聚焦显微镜图像分割

针对LSCM多通道成像的特点,提出一种将可见光通道图像统计信息作为先验知识的通道信息融合分割荧光通道图像的方法。该方法在LSCM图像上进行测试,并与Chan-Vese方法进行比较。

PLT-F通道在异常血小板计数检测中的价值

目的通过荧光血小板(PLT-F)通道对异常血小板(PLT)计数样本进行检测,分析PLT-F通道在异常PLT计数检测中的价值。方法采集空腹静脉血样本158例,将样本分为低值PLT组、小红细胞干扰组、大PLT组和PLT聚集组。采用电阻抗法(PLT-I)、荧光法(PLT-F)检测PLT计数,并将其检测结果与人工镜检法(PLT-M)结果进行比较。结果低值PLT组、大PLT组及小红细胞干扰组PLT-F通道检测PLT计数及幼稚血小板分数(IPF)的批内重复性[变异系数(CV)]分别为4.94%、1.70%、0.80%与4.81%、1.30%、2.74%。低值PLT组、小红细胞干扰组及大PLT组PLT-F与PLT-M的决定系数(r2)值分别为0.856 8、0.822 3与0.771 0;PLT-I与PLT-M的r2值分别为0.679 1、0.775 4与0.592 6。结论PLT-F通道批内重复性好,可通过PLT-F通道对异常PLT计数样本进行快速复检。

血小板计数检测方法学研究进展

血小板计数是临床诊断与治疗决策的重要依据,准确的血小板计数能够辅助临床做出正确诊断和采取有效的治疗措施。综述用于血小板计数的常用检测方法,包括外周血涂片血小板估测法、鞘流阻抗法、光学法、显微镜数字化成像技术和流式细胞仪间接计数法,分析上述方法的优劣和适用条件,介绍血小板计数的新型检测技术,以期为血小板计数检测方法的选择提供参考意见,为研发新的血小板计数方法提供思路。

PLT-I、PLT-F、RDW、MCHC指标变化与检验标本不同保存条件的关系

目的探讨电阻抗法血小板计数(PLT-I)、荧光通道血小板计数(PLT-F)、红细胞分布宽度(RDW)和红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)指标变化与检验标本不同保存条件的关系。方法选取2017年1月至2018年10月体检的健康者460例,均采集静脉血标本,每个标本等分2份,在4℃、25℃下保存,分别于即刻、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h检测PLT-I、PLT-F、RDW和MCHC水平。结果 4℃条件下,保存24 h后PLT-I和MCHC水平与即刻检测时的比较,差异有统计学意义(P<0.05),即刻、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h PLT-F和RDW比较差异无统计学意义(P>0.05);25℃条件下,保存6 h、12 h和24 h后RDW和MCHC明显高于即刻检测时的,差异有统计学意义(P<0.05),保存24 h后PLT-I明显低于即刻检测时(P<0.05),即刻、1 h、3 h、6 h、12 h和24 h PLT-F比较差异无统计学意义(P<0.05);保存6 h、12 h和24 h时,25℃条件下,RDW水平明显高于4℃下的水平(P<0.05);保存12 h、24 h时,25℃下MCHC明显高于4℃下的水平(P<0.05)。结论 PLT-I、PLT-F、RDW和MCHC指标变化与样本保存的温度、时间有关,以4℃,保存24 h内为宜,日常检测中应注意样本保存的时间和温度。

Sysmex XN-9000血细胞分析仪在血小板复检中的应用价值

目的:评估Sysmex XN-9000血细胞分析仪在血小板复检中的应用价值。方法:收集2018年7月—2019年11月苏州大学附属第一医院静脉血样本606份,采用Sysmex XN-9000全自动血细胞分析仪(日本sysmex公司)及配套试剂,其中低血小板、大血小板、小红细胞和红细胞碎片样本均采用电阻抗法(PLT-I)、光学法(PLT-O)和荧光法(PLT-F)通道检测,同时与涂片人工镜检(PLT-M)结果进行比较。对血小板聚集样本进行分析,采用受试者工作(ROC)曲线,计算血小板Clumps警示值最佳阈值。收集低于血小板Clumps警示阈值样本,以验证血小板Cumps警示阈值设立后漏检率。结果:低血小板、小红细胞和红细胞碎片干扰、大血小板样本的PLT-F、PLT-O通道与PLT-M的相关性优于PLT-I通道;低血小板、小红细胞和红细胞碎片干扰样本的PLT-F通道与PLT-M相关性优于大血小板样本;在存在小红细胞和红细胞碎片干扰的样本复检中PLT-O和PLT-F通道具有明显优势。血小板Clumps警示值≥115时,其敏感性和特异性分别为83.6%和91.7%,AUC为0.914,所以设立血小板Clumps警示值最佳阈值为115,对血小板Clumps警示值<115的样本(300份)进行验证,以PLT-M为标准,验证其阈值设立后漏检率为2.33%。结论:Sysmex XN-9000血细胞分析仪在处理日常工作中遇到的低血小板、小红细胞和红细胞碎片、大血小板干扰情况时,可采用PLT-O和PLT-F通道进行快速复检;当血小板Clumps警示值≥115时,建议现场重新采血或更换抗凝剂进行复检,必要时需进行手工充池计数,避免由于血小板聚集造成假性减低情况发生。但是,其他实验室应根据自己的实验室检测系统,建立符合实际的血小板Clumps判断值,并在实际工作中周期性地进行验证,适当调整,避免由于仪器原因造成异常标本的漏检。

微波消解-双通道原子荧光光谱法同时测定家禽内脏中的硒和汞

最佳分析条件下,采用微波消解样品,以HCl为预还原剂和测定介质,用氢化物发生-原子荧光法同时测定了家禽内脏中硒汞的含量。硒、汞的质量浓度分别在12.00～24.00μg/L范围与相应的荧光强度呈线性关系,方法的检出限分别为0.065μg/L和0.010μg/L,相对标准偏差(RSD)分别在1.3%～2.8%和2.4%～4.3%(n=5)之间,回收率范围分别为93.6%～101.1%和92.2%～98.6%。