半抗原直接包被的四环素酶联免疫吸附分析法的建立

为建立更优的四环素(tetracycline,TC)酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),将TC与蛋白质偶联制备人工完全抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗TC的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)。采用酸性高锰酸钾羧化酶标板,将TC直接包被在酶标板上,并对ELISA反应体系条件进行优化,构建一种半抗原直接包被的TC ELISA检测方法。所制备的MAb特异性良好,交叉反应率低。所构建的检测方法最低检测限IC_(10)值为0.306 ng/mL,半数抑制率IC_(50)值为9.26 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为96.46%~101.89%、96.84%~102.50%。与人工完全抗原包被的检测方法相比(IC_(10)值:0.624 ng/mL,IC_(50)值:28.24 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为93.86%~105.12%、94.04%~105.56%),检测灵敏度有明显提高,并可用于实际样品中TC含量的检测,具备良好的应用前景。

电化学发光免疫分析与酶联免疫吸附测定法应用于乙型肝炎病毒血清学检验中的效果分析

目的对比乙型肝炎病毒血清学检验过程中采用电化学发光免疫分析(ECLIA)与酶联免疫吸附测定法(ELISA)的效果。方法90例乙型肝炎患者,分别以电化学发光免疫分析、酶联免疫吸附测定法进行病毒血清学检验。对比两种诊断方法对乙型肝炎病毒[乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)]阳性检出率以及不同浓度下两种检验方法HBsAg重复性。结果电化学发光免疫分析对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg、HBeAb的阳性检出率分别为85.56%、33.33%、48.89%、31.11%、64.44%;酶联免疫吸附测定法对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg、HBeAb的阳性检出率分别为83.33%、32.22%、45.56%、27.78%、44.44%。两种检验方法对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg的阳性检出率对比无统计学差异(P>0.05),电化学发光免疫分析对HBeAb的阳性检出率明显高于酶联免疫吸附测定法(P<0.05)。两种检验方法在高浓度HBsAg批次间重复性相近,而电化学发光免疫分析在高浓度HBsAg批次内及中、低浓度HBsAg批次间、批次内重复性均明显低于酶联免疫吸附测定法。结论乙型肝炎患者接受病毒血清学检验可首选电化学发光免疫分析,其具有检出率高、结果准确等优点,值得临床运用并推广。

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法在乙型病毒性肝炎诊断中的效能比较

目的:比较化学发光免疫分析(CLIA)法与酶联免疫吸附(ELISA)法在乙型病毒性肝炎(乙肝)诊断中的效能。方法:选取2020年5月至2022年5月该院收治的154例疑似乙肝患者为研究对象,均行CLIA法、ELISA法检测乙肝血清标志物[乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)]水平,以荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测结果为金标准,比较CLIA法与ELISA法在乙肝中的诊断效能及对低水平HBsAg的检出率。结果:154例疑似乙肝患者中,荧光定量PCR法诊断阳性92例,阴性62例;HBsAg水平0.06~0.10 U/mL 5例,0.11~0.50 U/mL 5例,0.51~2.50 U/mL 8例,2.51~3.00 U/mL 2例。CLIA法诊断阳性89例,阴性65例;ELISA法诊断阳性78例,阴性76例。CLIA法诊断乙肝的灵敏度、准确度、阴性预测值均高于ELISA法,漏诊率低于ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。CLIA法对HBsAg水平0.06~0.10 U/mL的检出率高于ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CLIA法在乙肝中的诊断效能高于ELISA法。

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法在乙肝病毒标志物检测结果的比较分析

探讨比较化学发光免疫分析法(ECLlA法)与酶联免疫吸附法(ELISA法)在乙肝病毒标志物检测中的结果。方法 选取我院2023年1月至2023年12月收治的110例乙肝病毒感染患者,所有患者均同时采用ECLlA法与ELISA法进行血清标志物检测,比较两种检测结果及成本。结果 检测结果显示,ECLlA法检测中HBsAg、HBeAb、HBeAg阳性检出率高于ELISA法检测(P<0.05);ECLlA法检测的检测准确性为95.45%,高于ELISA法检测的77.27%(P<0.05);ECLlA法检测的成本为(112.36±8.35)元,高于ELISA法检测的(30.45±2.54)元(P<0.05)。结论 相较于ELISA法来讲,ECLlA法的乙肝五项阳性检出率更高,更有利于乙肝病毒感染的早期诊断,但其检测成本相对会高点,需根据患者个体情况选择合适检测方式。

酶联免疫吸附法与核酸检测技术在血站血液标本乙肝病毒筛查中的应用

目的探究酶联免疫吸附法(ELISA)与核酸检测(NAT)技术在血站血液标准乙肝病毒(HBV)筛查中的应用。方法选取2022年1月—2022年12月血站采集的血液标本12282份作为研究对象,所有标本均接受ELISA、NAT检测,以电化学免疫发光法(ECLIA)检测结果作为金标准,对两种检测方法的检测结果做一致性分析,并比较两种检测方法的窗口期、准确度、灵敏度、特异度2、阳性率、漏诊率差异,比较不同HBV感染状态患者HBV-DNA阳性率差异。结果ELISA检测HBV的窗口期高于NAT(P<0.05),准确度、灵敏度低于NAT,漏诊率高于NAT(均P<0.05);ELISA、NAT检测HBV的特异度、阳性检出率比较,无明显差异(均P>0.05);大三阳的HBV-DNA阳性率均高于小二阳、小三阳(均P<0.05);小二阳、小三阳两者的HBV-DNA阳性率比较,无差异(P>0.05)。结论ELISA与NAT均可良好应用于HBV检测,且NAT具备更高的准确度、灵敏度和更低的漏诊率,可良好反映HBV的传染性,是ELISA的有效补充。

水产品中氯霉素酶联免疫吸附分析法的构建与应用

以氯霉素(CAP)为研究对象,通过系统优化反应条件,构建CAP的间接竞争酶联免疫分析法,并应用于水产品中CAP残留量的检测。氯霉素间接竞争酶联免疫分析方法的最佳工作条件为:0.05μg/孔包被量(CAP-OVA),4℃包被14 h,0.5%脱脂乳粉封闭液,CAP抗体稀释倍数为1∶16000。结果表明:构建的间接竞争酶联免疫分析方法的灵敏度(IC50)为4.88μg/mL,检测限(IC15)为0.29μg/mL,方法特异性良好,对氯霉素结构类似物和同类抗生素的交叉率低于0.1%。对大黄鱼、缢蛏、牛蛙进行5.0,10.0μg/kg和20.0μg/kg加标回收试验,回收率在83.90%~100.73%范围。本方法的日内和日间变异系数范围为2.28%~6.96%,该检测结果与LC-MS/MS分析结果具有良好的一致。本研究构建的CAP酶联免疫吸附分析法操作简单,灵敏度高,可应用于多种水产品中氯霉素残留量的快速定量检测,同时也为其它小分子危害物的酶联免疫分析方法的构建提供技术借鉴。

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附试验检测外周血γ-干扰素诊断结核分枝杆菌感染的结果分析

目的对化学发光免疫分析法(CLIA)检测外周血γ-干扰素(IFN-γ)结果为阴性、灰区、弱阳性、不确定和阳性标本进行分析,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行复测,同时对γ-干扰素释放试验(IGRA)辅助诊断结核分枝杆菌(MTB)感染的临界值设定及应用价值进行探讨。方法将行CLIA-IGRA检查的患者标本共299例纳入研究,根据检测结果分为3组,A组(T-N<14 pg/mL)118例,B组(T-N:14~50 pg/mL)138例,C组(T-N>50 pg/mL)43例,T为测试培养管,N为本底对照培养管。利用ELISA进行复测,比较两种检测方法的结果一致性。计算不同临界值下的灵敏度和特异度,Kappa检验评价两种检测方法的一致性、灵敏度、特异度;ROC曲线分析两种检测方法的诊断性能。结果两种检测方法对于A组和C组样本的检测结果一致性较高,符合率分别为96.61%和93.02%,与B组样本检测得到的IGRA阳性率比较,差异有统计学意义(χ2=142.04,P<0.001)。CLIA和ELISA检测确诊结核患者、潜伏性MTB感染患者、非结核患者的阳性率分别为68.97%、72.60%、49.23%和44.83%、32.88%、14.21%,两者对潜伏性MTB感染和非结核患者检测的阳性率比较差异具有统计学意义(P<0.05)。当以40 pg/mL为临界值时,两种检测方法的特异度均较高,分别为88.80%和91.37%,一致性较好(总符合率94.60%,Kappa=0.779)。结论两种检测方法在检测MTB感染的样本具有较好的一致性,但对于易与结核混淆的非MTB感染者标本需要提高临界值来判定IFN-γ的结果,CLIA检测具有检测时间短、自动化优势,在MTB感染筛查方面具有较高的临床应用价值。

间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析

目的:应用间接免疫荧光法(indirect immunofluoreseent assay,IF)与酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析。方法:IF法按说明书操作,在荧光显微镜下观察到特异的荧光核型为阳性;ELISA法按说明书操作,浓度≥18U/mL为阳性,12～18U/mL为可疑,≤12U/mL为阴性。结果:检测临床疑似自身免疫患者血清138份,IF法阳性50份,阴性88份,阳性率36.23%,ELISA法阳性78份,阴性60份,阳性率56.52%。经卡方检验P<0.01。其中IF法样本血清稀释倍数与ELISA法检测浓度的Spearman相关系数为0.499。结论:两种方法检测抗核抗体差异有显著性,ELISA法敏感度明显高于IF法。同时,IF法样本血清抗核抗体血清稀释倍数与ELISA法的浓度呈一定相关性。

免疫荧光测定与酶联免疫吸附法测定磷脂酶A2受体水平的一致性分析

目的分析磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)水平的诊断价值,并对免疫荧光测定(indirect immunofluorescence assay,IIF)法及酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunoSorbent assay, ELISA)测定PLA2R水平的一致性进行分析。方法将2018年1月至12月于内蒙古医科大学附属医院风湿免疫科行肾组织活检并确诊的96例肾病患者纳入研究,根据其病理结果分为膜性肾病组与非膜性肾病组,纳入同期健康体检人员为对照组,收集患者血清,比较患者肌酐、尿素等相关指标,分别采用IIF及ELISA测定患者PLA2R水平,对两种检测方法的相关性及一致性进行分析。结果采用ELISA法测得肾病患者的PLA2R明显高于对照组,且膜性肾病组患者的PLA2R水平明显高于非膜性肾病组,其中ELISA法及IIF法均检测出膜性肾病组有31例阳性患者,而非膜性肾病组及对照组则阳性例数为0(均P<0.05);采用ELISA法与IIF法检测PLA2R的一致率为94.87%(37/39)(Kappa=0.897,P=0.000),且两种检测方式结果明显相关(ρ=0.900,P=0.000);但ROC曲线示ELISA法的AUC为0.998明显高于IIF法、白蛋白、总蛋白、TC及TG的诊断效能(均P<0.05)。结论 IIF与ELISA测PLA2R水平具有较高的一致性及相关性,但ELISA在诊断膜性肾病的诊断效能更高,且操作简单,可供临床应用。

时间分辨荧光免疫分析和酶联免疫吸附实验检测乙型肝炎病毒血清标志物结果分析

目的探讨时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)检测乙肝病毒血清标志物(HBV-M)的临床价值。方法采用酶联免疫吸附实验(ELISA)和TRFIA对272例血清标本的HBV-M进行平行检测,对两种方法检测结果进行比较分析。结果 ELISA和TRFIA检测血清HBV-M各指标阳性率差异无统计学意义(P>0.05),HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb检测结果阳性符合率分别为96.9%、86.5%、94.6%、98.2%和96.8%。结论两种方法检测HBV-M阳性符合率除HBsAb外均高于90%,表明两种方法均适合应用于乙肝病毒的临床检测;ELISA易出现假阳性和假阴性结果;TRFIA检测HBV-M不仅特异性强、敏感性高,而且能够定量,值得临床推广应用。

化学发光免疫分析技术与酶联免疫吸附检验在乙肝病毒血清学检验中的检测效果

目的探究化学发光免疫分析技术与酶联免疫吸附检验在乙肝病毒血清学检验中的检测效果。方法选取2018年12月至2020年6月本院收治的50例疑似乙肝患者作为研究对象,入院后均采用化学发光免疫分析技术与酶联免疫吸附检验进行乙肝病毒血清学检验。以实时荧光定量PCR检验结果作为金标准,比较两种检测方法乙肝病毒检出情况、乙肝病毒血清学检验结果。结果化学发光免疫分析技术乙肝病毒阳性率为54.00%,高于酶联免疫吸附检验的34.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。化学发光免疫分析技术乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)阳性检出率均高于酶联免疫吸附检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结论化学发光免疫分析技术应用于乙肝病毒血清学检验中的检验效果优于酶联免疫吸附检验,可提高乙肝病毒阳性检出率,为后续临床制订合理诊疗计划提供可靠依据,且对临床疗效具有较高预测价值,值得临床推广应用。

酶联免疫吸附结合荧光分析法测定乳粉加速贮藏过程中的褐变产物

在65℃封闭的加速贮藏条件下,对3种不同类型乳粉(全脂乳粉、脱脂乳粉和酪乳粉)的褐变产物——末端糖基化产物(AGEs)进行研究和检测。在确立酶联免疫吸附(ELISA)法测定末端糖基产物含量的基础上,结合荧光分析测定乳粉中蛋白末端糖基化所产生的荧光物质。结果表明:AGEs产生的荧光物质和AGEs含量随着贮藏时间的延长而增加。酶联免疫吸附法采用初级抗体和酶标二抗稀释倍数均为2500倍时可以有效测定褐变乳粉中AGEs含量,其中加速贮藏20d后乳粉中AGEs含量最高,可达到0.61ng/mL。最低检出质量浓度达到0.006ng/mL,最大误差率在5%左右,重复性良好。因此,乳粉褐变的荧光强度和AGEs含量的ELISA检测可以作为评价乳粉质量的有效方法。

时间分辨荧光免疫分析技术与酶联免疫吸附试验检测乙肝病毒血清标志物结果比较

随机抽取。临床就诊和体检检测乙肝病毒血清标志物2455例，同时用时间分辨荧光免疫分析技术和酶联免疫吸附试验检测，比较分析HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe和抗-HBc检测结果。时间分辨荧光免疫分析技术检测结果更有利于临床应用，更有利于互认。

荧光免疫分析法、酶联免疫吸附试验和乳胶增强免疫比浊法检测胃蛋白酶原的敏感度和特异性分析

目的观察分析检测胃蛋白酶原(PG)使用荧光免疫法(TRFIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、乳胶增强免疫比浊三种检测方法分析其特异性和敏感性。方法使用以上三种检测方式检测129名胃癌患者称之为胃癌组和147名正常患者称之为正常组,对比分析其血清当中的PG亚群PG1和PG2的含有量以及两者之间的比值(PGR)。结果在敏感度上TRFIA为76.79%,ELISA为72.88%,乳胶增强免疫比浊为74.57%,差异无统计学意义(P>0.05)。在特异度上TRFIA为74.15%,ELISA为82.99%,乳胶增强免疫比浊为76.87%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论三种检测方式特异性敏感度差异无意义,无可比性,因此三种检测方式的选择主要看医院已有的设备和检测费用,ELISA成本较低可作为基层医院首要选择,有全自动生化分析仪的规模较大医院可选择乳胶增强免疫比浊方法,而配有先进荧光免疫分析仪的医院可选择TRFIA方式。

时间分辨荧光免疫分析与酶联免疫吸附分析检测血清甲胎蛋白的比较

目的比较测定甲胎蛋白（AFP）的2种方法，即时间分辨荧光免疫分析（TrF）与酶联免疫吸附分析（ELISA）。方法分别进行线性、相关性、回收与重复性试验。结果线性范围、回收率、批内CV%、批间CV％TrF分别为0．721～1089ng／L、97．03％、3．21％与5．79％；ELISA分别为4．21～530ng／L、95．68％、4．05％与6．20％。TrF与ELISA两种方法差异无统计学意义（P〉0．05），相关性好，r=0．921。结论TrF定量测定AFP，在方法学上要优于ELISA。

氨基甲酸酯类杀虫剂速灭威酶联免疫吸附分析方法研究

利用间-甲酚和β-丙氨酸合成了速灭威半抗原β-（间-甲基苯氧基羰基）氨基丙酸（HOM）。通过活泼酯法将HOM交联于牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）上；HOM—BSA为免疫原制备了速灭威的兔抗血清，ELISA法测得其效价高达1．28×10^6，交叉反应测定表明抗体方法特异性识别速灭威。对离子强度等影响因素进行了研究，确定了速灭威酶联免疫吸附分析方法（ELISA）的最佳工作条件，建立了定量测定速灭威的间接竞争ELISA方法，结果表明，该方法检测线性范围为1—10000μg／L；IC50为40．74μg／L；检出限为0．08—0．10μg／L；批内相对标准偏差为2．9％；批间相对标准偏差4．6％。土壤、稻谷和水中的平均添加回收率分别为80％、93．4％和107％。本研究建立了一种快速检测环境和农产品中速灭威残留的有效方法。

酶联免疫吸附分析法测定食品中的苏丹红Ⅰ号

本研究建立了测定食品中苏丹红Ⅰ号含量的间接竞争酶联免疫分析法。首先对苏丹红Ⅰ号分子作了的修饰,再与载体蛋白交联制得免疫原和包被抗原,经动物免疫制得抗苏丹红Ⅰ号的抗体。在包被抗原为100μg/L,抗体为1:100,000倍稀释,标记二抗为1:15000倍稀释的优化条件下,测得检出限为0.12μg/L,IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.74μg/L。苏丹红Ⅰ号在番茄酱和辣椒面中的回收率分别为106%和110%。样品仅需甲醇萃取再用缓冲液简单稀释就可以直接进行ELISA测定。

酶联免疫吸附分析法测定水产品及水中孔雀石绿和无色孔雀石绿

本文报道一种同时测定水产品及水样中孔雀石绿（MG）和无色孔雀石绿（LMG）的间接竞争酶联免疫吸附分析法。对无色孔雀石绿分子进行修饰，使其与载体蛋白交联，得到免疫原和包被抗原，经过多次免疫动物制得抗无色孔雀石绿的多克隆抗体。在优化的实验条件下，IC50值（标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50％时所对应的待测物浓度）为0．9～2．6μg／L，检出限为0．02—0．10μg／L，无色孔雀石绿在水样及水产品中的回收率为76．2～95．0％，与孔雀石绿的交叉反应率为95．25％。真实样品测定中，两种食用鱼养殖水样及一个鱼样中未检出孔雀石绿和无色孔雀石绿，但在观赏鱼养殖水样及另一鱼样中检出孔雀石绿和无色孔雀石，浓度分别为1．84μg／L和1．38μg/L。

酶联免疫吸附方法分析海水和贝类中的滴滴涕及代谢物

采用间接竞争酶联免疫吸附分析（Ind irect Competitive Enzym e-linked Immunosorbent Assay,ELISA）方法测定海水样品和海洋贝类中的有机氯农药滴滴涕及其主要代谢产物的含量。采用碳二亚胺法,将半抗原DDA分别与载体蛋白牛血清白蛋白（Bovine serum album in,BSA）和卵清蛋白（Ovalbu-m in,OVA）偶联,得到包被抗原和免疫抗原。以DDA-OVA作为免疫抗原,免疫雌性BALB/c小鼠,免疫数次后,测定血清中抗体效价。以DDA-BSA为包被抗原,免疫多克隆抗血清为多克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附方法分析检测海水样品和海洋贝类中的有机氯农药二氯二苯三氯乙烷（DDT）及其代谢产物2,2-双（4-氯苯基）乙酸（DDA）、2,2-双（4-氯苯基）-1,1-二氯乙烷（DDD）、2,2-双（4-氯苯基）-1,1-二氯乙烯（DDE）的方法。最低检出限分别为DDT：25 ng/m l,DDA：1.56 ng/m l,DDD：25 ng/m l,DDE：25 ng/m l。贝类样品DDA回收率为96.37%~100.88%,批内变异系数为2.28%～5．13％；贝类样品DDT回收率为93．86％～100．08％，批内变异系数为4．71％～7．68％；海水样品DDT回收率88．23％，批内变异系数6．60％。

对硫磷化学发光酶联免疫吸附分析方法的建立和评价

建立了基于多克隆抗体的对硫磷间接竞争化学发光酶联免疫吸附分析方法(icCLEIA)。以三氯硫磷为原料,经三步取代反应合成对硫磷半抗原,通过活泼酯法将半抗原分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备免疫抗原和包被抗原。经免疫新西兰大白兔,获得对硫磷抗血清。通过优化条件参数,建立了对硫磷的icCLEIA分析方法。本方法的检测线性范围为0.24～15.83!g/L;半抑制浓度IC50为1.14!g/L;检出限为0.09!g/L;对蔬菜样品和水样品的平均添加回收率为74.6%～121.0%。本方法可用于实际样品中痕量对硫磷残留检测。