荧光金纳米簇的制备及对水杨醛的高灵敏检测

开发了一种新型荧光传感器,即利用甲硫氨酸(Met)作为保护剂和还原剂,微波辅助快速合成了具有橙色荧光的金纳米簇(Met-AuNCs),用于检测水杨醛(SA)。在检测中,SA的醛基和AuNCs上的氨基发生亲核加成,形成席夫碱,与此同时Met的表面状态被改变,使AuNCs失去氨基酸配体的保护发生聚集。随着SA浓度的增加,AuNCs的特征荧光峰消失,而席夫碱的荧光强度逐渐增强,荧光由橙色变为绿色。用于SA检测的荧光传感器具有简单、快速、肉眼检测、高灵敏度等优点。该方法检测SA的线性范围为0.1~9.4μmol/L,检测限(LOD)低至7.4nmol/L。

蛋白质杂化荧光金纳米簇的制备及在汞离子快速检测中的应用

以牛血清白蛋白为稳定剂和还原剂,采用一步法合成荧光金纳米簇,并对其进行了表征。制备的荧光金纳米簇呈较规则的球形,粒径均一,约为(2.00±0.05)nm,在紫外灯下发出明显的红色荧光,最大激发波长和发射波长分别为360和635 nm。Hg^(2+)可与制备的荧光金纳米簇特异性结合而使其荧光猝灭,基于此建立了"turn-off"型的荧光光谱法快速检测Hg^(2+)含量。优化了荧光金纳米簇的用量、p H值、检测体系等条件。荧光强度与Hg^(2+)浓度有良好的线性关系,在0.5~75.0μg/L范围内的线性方程为y=-26.76lgx+803.1(R2=0.9951),在75~900μg/L浓度范围内的线性方程为y=-0.27x+762.02(R2=0.9959),检出限为0.14μg/L(3σ)。在最优条件下,本方法可在3 min内完成检测。可快速、灵敏、简便地检测自来水中的Hg^(2+),自来水样品加标回收率在86.8%~113.4%之间(n=3),相对标准偏差小于15%。

利用荧光金逆行示踪技术评价视神经不完全损伤后视网膜神经节细胞的存活率

目的 利用荧光金逆行示踪技术评价正常及视神经不完全损伤后的视网膜神经节细胞 (retinalganglioncells,RGCs)的数目。 方法 正常成年LongEvans大鼠 2 0只 ,体重(2 70± 2 0 ) g ,雌雄不限。按对照组、损伤后 7d、14d、2 1d分组 ,每组 5只大鼠。在球后视神经钳夹伤前 7d行荧光金逆行标记。 7d后损伤组大鼠用反向血管夹于左眼球后 2mm处夹视神经 10s。对照组大鼠只暴露视神经不行钳夹 ,分别于各时间点将大鼠用 4 %多聚甲醛灌注固定后 ,行全视网膜铺片 ,3h内在荧光显微镜下观察。在每张视网膜的上、下、鼻、颞侧距视盘 1/ 6、1/ 2、5 / 6半径处共拍摄 12张荧光照片。对照片上标记的RGCs进行计数 ,求平均值 ,计算损伤后各时间点剩余的RGCs与正常视网膜中RGCs的百分比。结果 视网膜铺片的RGCs边界清晰 ,并可见明显的细胞突起 ,血管走行区未见节细胞分布。正常组每张铺片的平均节细胞数为 (2 0 31± 2 87)个·mm-2 ,损伤后 7d的RGCs存活率为 71% ,14d存活率为 5 1% ,2 1d存活率为 35 %。结论 荧光金逆行标记是评价视神经损伤后RGCs存活率可靠并且有效的方法。

大鼠吻侧前扣带皮层的传入投射纤维联系——荧光金逆行追踪法研究

本文采用荧光金(FG)逆行束路追踪技术研究了大鼠前扣带皮层吻侧(rostralanteriorcingulatecortex,rACC)的传入投射纤维联系。将0.2μl的3%荧光金注入到大鼠单侧rACC,7d后灌注取材,将切片贴于载玻片上,在荧光显微镜下观察FG标记神经元的分布。FG标记神经元主要位于注射区同侧的许多皮层和皮层下结构,如丘脑中线核群和板内核群、杏仁核、次级视皮层、次级听皮层、外嗅皮层和嗅周皮层等。上述结果表明rACC不但接受来自丘脑的伤害性信息传入,也接受来自视、听、嗅皮层等的环境信息的传入。本研究的结果为rACC参与痛的情绪反应提供了形态学证据。

荧光金逆行标记检测CNTF基因眼内转移对视神经损伤大鼠的影响

目的通过荧光金逆行标记的方法,检测腺病毒(adenovirus,Ad)介导的睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)对视神经钳夹伤大鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)数目的影响。方法采用钳夹视神经法制作大鼠视神经损伤模型,夹伤后向大鼠伤眼内注射Ad-CNTF,在取材前7d进行荧光金逆行标记RGC,于伤后28d,对大鼠的视网膜铺片进行荧光金标记的RGC记数。结果伤后28d,单纯损伤组、PBS组、Ad-LacZ组视网膜标记RGC数均较低;CNTF处理组视网膜标记RGC数为每视野(12.11±2.29)个(n=9),高于前3组,且差异非常显著(P<0.01)。Ad-CNTF组视网膜标记RGC数为每视野(20.93±2.67)个(n=8),在各组标记RGC数中最多,也好于CNTF组,2组间差异非常显著(P<0.01)。结论视神经损伤后眼内单次注射Ad-CNTF,可明显增加钳夹伤后28d大鼠视网膜的标记RGC数。与单次注射CNTF相比,对损伤的RGC具有更加显著的神经保护作用。

荧光金逆行标记观察正常大鼠视网膜神经节细胞及轴突

使用荧光金通过立体定位仪逆行标记对正常大鼠视网膜神经节细胞及其轴突进行观察研究。成年SD大鼠6只(12眼),体重250±20g,按照标记后1周,2周分为2组,每组3只(n=6眼)。将荧光金注射到大鼠的外侧膝状体和上丘,观察视网膜神经节细胞(RGCs)的数量和视网膜神经节细胞及其轴突的形态。结果显示:视网膜铺片的节细胞边界清楚,易于观察和计数。荧光金标记1周后,RGCs密度为2210±128个/mm2;标记后2周,RGCs密度为2164±117个/mm2。视网膜神经节细胞的轴突内荧光分布均匀,呈线性。结论是使用荧光金逆行标记能够可靠、有效地研究视网膜神经节细胞及其轴突。

犬自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经荧光金逆行示踪标记实验

目的采用荧光金逆行示踪方法来评价自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经修复狗坐骨神经缺损,再生神经的物质运输功能。方法在自体骨髓间充质干细胞组织工程化神经桥接狗坐骨神经5cm缺损,术后6个月,将5%荧光金(Fluoro-Gold,FG)注射入桥接侧的远段坐骨神经干内,2周后取相应的脊髓节段和背根节进行冰冻切片,并在激光共聚焦显微镜下观察结果,并进行了计量分析。结果桥接侧相应脊髓灰质前角和背根神经节切片中观察到被FG逆行标记的神经元。结论再生神经修复了缺损,恢复了神经干的连续性,再生神经具有良好的物质运输功能。

荧光金在视神经损伤研究中的应用

目的 研究荧光金在视神经损伤中的应用。方法 荧光金注射到正常及不完全视神经损伤后大鼠的外侧膝状体和上丘 ,观察视网膜铺片中视网膜神经节细胞的形态和数量 ;荧光金注射到大鼠玻璃体腔内 ,观察视网膜神经节细胞轴突的损伤情况。结果 视网膜铺片的节细胞边界清晰 ,易于计数和形态的观察。损伤 2周时视网膜神经节细胞剩余 5 7% ,相对应的损伤 2周的轴突远端的线形荧光明显减少。结论 荧光金是视神经损伤中视网膜神经节细胞数目变化和轴突损伤、分布和投射的可靠有效方法。

大鼠终纹床核卵圆核的传入纤维联系—荧光金和WGA-HRP逆行追踪法研究

终纹床核(BST)是边缘系统重要结构之一,参与多种生理功能的调节。BST是一个复杂的非均一性结构,但由于各个实验室对BST的划分、命名不一致,给文献结果的比较和生理活动机理的深入研究带来困难。最近,Ju和Swanson对大鼠BST进行了全面而细致的研究,把前外侧区背部的卵圆形均质结构命名为卵圆核(Ov)。本组实验选用Sprague-Dawley雄性大鼠,把荧光金(FG)和WGA-HRP加压注入一侧Ov,荧光显微镜(紫外线激发)下观察FG逆行标记细胞和明、暗视野下观察HRP逆行标记细胞(TMB法呈色)在中枢神经系统不同平面的分布情况。

荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞的实验研究

目的建立荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞的方法。方法选取出生1 d的SD大鼠乳鼠,腹腔注射水合氯醛麻醉后,剪开头部皮肤,向双侧上丘各注射4%荧光金注射液1μl,缝合皮肤,4 d后处死,提取视网膜,胰酶消化后培养,显微镜下观察被标记的视网膜神经节细胞。结果混合培养的视网膜细胞中,可见被荧光金标记的视网膜神经节细胞,大约占细胞总数的0.34%,视网膜神经节细胞可存活3周。结论荧光金逆行标记乳鼠视网膜神经节细胞是一种可行的方法,可用于视网膜神经节细胞的鉴定。

大鼠延髓网状背侧亚核传入投射的荧光金逆行追踪法研究

将荧光金注入单侧大鼠延髓网状背侧亚核进行该部位的传入投射研究。结果发现：在脊髓后角Ⅰ层、Ⅲ～Ⅳ层、Ⅹ层背侧有阳性标记细胞；中缝大核、线性核、中缝背核、中脑导水管周围灰质、丘脑室旁核等均有较多的标记细胞。表明延髓网状背侧亚核与内源性镇痛系统和脊髓之间有广泛的联系，提示该核与痛觉调节活动有关。

荧光金逆行追踪法观察小鼠听神经高级神经纤维传导通路

目的采用荧光金(FG)逆行追踪法观察小鼠听神经高级神经纤维传导通路,为放射性听力损伤的研究提供理论依据。方法正常成年小鼠20只,体重(25～30)g,雌雄不限。通过立体定位,插入吸有荧光金的微玻管,用微电流将荧光金导入内侧膝状体(MG)以追踪听觉传导通路高级神经元的分布。结果在进针点对侧的下丘中央核(CIC)、被盖背侧核、中央周围部(DTgP)、被盖背外侧核、腹侧部(LDTgV)、外上橄榄(LSO)、内侧上橄榄(MSO)、橄榄耳蜗束(ocb)、同侧的斜方体核(Tz)、蜗神经腹侧核、前部(VCA)和蜗神经核浅胶质带(SGI)等均可见FG细胞。结论听神经高级神经纤维传导通路四级神经元神经核团在脑内存在精确定位,为放射性听力损伤的研究提供了理论依据。

大鼠孤束核内含calbindin D-28K的内脏伤害性神经元向终纹床核的投射—荧光金标记结合免疫荧光技术研究

既往的研究证明孤束核和终纹床核参与内脏伤害性信息的传递和调控。Calbindin D-2 8K是钙结合蛋白家族的成员 ,为神经细胞特别是投射神经元的选择性标记物。应用荧光金逆行追踪和免疫荧光技术相结合的方法 ,对给予内脏伤害性刺激后大鼠孤束核内 FOS的表达并显示 Calbindin D-2 8K免疫阳性的神经元向终纹床核的投射进行了研究。结果显示 :将荧光金注入一侧终纹床核外侧部后 ,孤束核中尾段内双侧出现荧光金逆行标记细胞 ,注射区同侧占优势 :孤束核的相同平面可观察到双侧等量分布的免疫反应阳性的 Calbindin D-2 8K和 FOS细胞 :三种阳性细胞的分布有明显的重叠现象。在其重叠分布区可见荧光金 /Calbindin D-2 8K、FOS/Calbindin D-2 8K、荧光金 /FOS双重阳性以及荧光金 /Calbindin D-2 8K/FOS三重阳性细胞。除 FOS/Cal-bindin D-2 8K双重阳性细胞为双侧分布外 ,荧光金 /Calbindin D-2 8K、荧光金 /FOS双重阳性以及荧光金 /Calbindin D-2 8K/F OS三重阳性细胞的出现均以注射区同侧为主。荧光金 /Calbindin D-2 8K、F OS/Calbindin D-2 8K双重阳性和荧光金 /Calbindin D-2 8K/F OS三重阳性神经元占孤束核内 Calbindin D-2 8K免疫阳性神经元总数的百分比分别为 2 .79%、15 .3 %和 2 .5 6% ;

大鼠脊髓向结合臂旁核的投射——HRP和荧光金逆行标记观察

将WGA-HRP和HRP的混合液或荧光金用压力或微电泳方法注入一侧结合臂旁核,观察脊髓各节段向结合臂旁核的投射起源。标记神经元见于双侧脊髓灰质及外侧脊髓核、外侧颈核等区域,其数目以对侧占优势。在脊髓灰质,标记细胞位于第Ⅰ、Ⅱ层,也见于第Ⅳ、Ⅴ及Ⅶ层;在脊髓中央管背侧的灰质连合中,亦常见到投射细胞。比较颈、胸、腰、骶各个脊髓节段标记神经元的区域分布,未发现各节段之间有明显的差异。

大鼠中央杏仁核内M-ENK和CCK免疫阳性神经元投射到终纹床核卵圆核——荧光金逆行标记结合免疫荧光双标记法研究

我们最近把荧光金(FG)和WGA-HRP注入雄性Sprague-Dawley大鼠一侧卵圆核(Ov),在中央杏仁核(Ce)等许多核团看到了大量逆行标记细胞。为了了解Ce至Ov投射神经元的化学性质,本组实验把FG逆行束路追踪法和间接免疫荧光法相结合,进行双标记法研究。实验选用雄性Sprague-Dawley大鼠,把FG注入一侧Ov区域,动物存活3~4天,常规方法灌注、取材,冰冻冠状连续切片,厚40μm。荧光显微镜下(紫外线激发)选择注射部位准确,且Ce内有较多FG标记细胞的切片进行免疫荧光反应,即先用M-ENK或CCK兔血清孵育,4℃2~3天;再用F1TC结合的羊抗免IgG孵育,37℃30—40分钟,荧光显微镜下观察结果。

大鼠脊髓损伤进行自体神经移植后荧光金逆行示踪观察

目的探讨大鼠脊髓损伤后使用自体腓肠神经组织移植修复后的荧光金逆行示踪变化。方法将实验动物分为自体腓肠神经移植组和非移植组两组,每组各18例。利用改良Allen撞击方法建立脊髓损伤模型,损伤4周后,移植组利用自体腓肠神经移植修复脊髓损伤段,非移植组仅暴露切口不做处理。分别于术后4、6、8周,行荧光金(fluoro gold,FG)逆行示踪了解脊髓损伤轴浆运输恢复情况。结果移植组术后4周,FG阳性标记神经元稀少;移植术后6周,FG阳性细胞逐渐增多;移植术后8周,FG阳性细胞密集。与非移植组各组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论大鼠脊髓损伤后自体神经移植修复,存活良好并促进脊髓损伤段轴浆运输功能恢复。

荧光金逆行示踪观察匹罗卡品致痫大鼠CA1区锥体细胞突触联系变化的研究

目的通过荧光金（FG）逆行示踪观察氯化锂-匹罗卡品致痫模型大鼠慢性自发发作期海马CA1区锥体细胞之间的突触联系变化。方法 SD大鼠2 0只随机分为实验组和对照组。癫痫持续状态后6 0 d左右,利用立体定位仪在活体内注射逆行性示踪剂FG至海马CA1区,术后常规喂养5~7 d后灌注取材。激光扫描共聚焦显微镜下观察FG的分布。结果 7只实验组大鼠中有5只可见有FG标记的锥体细胞,对照组未见。实验组中有2只大鼠在海马下托亦可见有FG标记的锥体细胞,而对照组未见。结论颞叶癫痫大鼠海马CA1区锥体细胞之间和下托至CA1区有异常兴奋性突触联系,其可能是构成异常兴奋性回路的解剖学基础。