基因编码钙指示剂在药物反应性细胞核钙信号实时动态检测中的应用

目的探讨新型基因编码钙指示剂(genetically-encoded calcium indicators,Ge CIs)在药物反应性细胞核钙信号实时动态检测中的应用。方法将常用的Ge CI变体——GCa MP6s用核定位序列(nuclear localization sequence,NLS)标记以用于细胞核钙的检测;同时在其C端与红色荧光蛋白td Tomato融合作为分子内的定量参照。将构建的质粒分别转染至He La细胞和U87MG细胞中,利用活细胞共聚焦显微成像技术对核钙信号的实时变化进行动态监测。结果蕈青霉素(Paxilline)能够引起在40 min连续记录中核钙水平的持续增加,并且增加的动力学模式在不同的细胞系中差异存在统计学意义;同时在药物处理后细胞反应的筛选中显示,青蒿素可以引起细胞核钙浓度的明显改变,其变化的幅度与持续情况与蕈青霉素及过氧化氢的作用有所不同。此外,笔者还发现利用核钙的变化指标可以对细胞在接受应激性刺激后的异质性表现进行统计聚类分析。结论在非兴奋细胞中,不同药物刺激可以引起细胞核钙离子浓度的升高。

电压门控钙通道蛋白在循经部位组织细胞兴奋传导中的作用研究

目的:探索循经感传的物质基础。方法:SD大鼠60只,雌雄各半,随机分为常态组、常态针刺组、维拉帕米阻断组和0.9%NaCl溶液阻断组(对照组),每组15只。常态组及常态针刺组大鼠首先于足阳明胃经股骨段循经受观测部位(简称循经受观测部位)及邻近非经受观测部位(简称非经受观测部位)注射Fluo 3-AM(钙离子荧光探针)后孵育;维拉帕米阻断组先于循经受观测部位及非经受观测部位用维拉帕米注射液局部注射,再在循经和非经受观测部位注射Fluo3-AM后孵育;对照组用0.9%NaCl溶液局部注射,再在循经和非经受观测部位注射Fluo 3-AM后孵育。分别记录各组注射后的循经与非经受观测部位细胞内Ca^(2+)成像变化大于20min。后3组均在上述操作完成后,立即针刺"后三里",并连接电针1min,记录循经受观测部位和非经受观测部位细胞内Ca^(2+)成像变化大于20min。结果:常态组循经受观测部位细胞内Ca^(2+)荧光强度高于非经受观测部位;常态针刺组循经受观测部位针刺后细胞内Ca^(2+)荧光强度较针刺前明显增强,非经受观测部位针刺前后细胞内Ca^(2+)荧光强度未见明显变化;维拉帕米阻断组维拉帕米注射液局部阻断后,循经受观测部位细胞内Ca^(2+)荧光强度针刺后未见增强,非经受观测部位针刺前后细胞内Ca^(2+)荧光强度未见明显变化;对照组0.9%NaCl溶液局部注射后,循经受观测部位及非经受观测部位细胞内Ca^(2+)荧光强度未见明显变化,针刺前后细胞内Ca^(2+)荧光强度未见明显变化。结论:循经部位电压门控钙通道(voltage-gated calcium channels,VGCCs)状态与循经部位组织细胞兴奋传导具有高度相关性。

小脑星形胶质细胞功能的最新进展

许多研究有助于我们了解小脑星形胶质细胞,特别是伯格曼细胞(BG)。但是,直到最近没人知道它们的功能。在完整小脑内,荧光钙指示器结合星形胶质的标志物SR101多细胞药物填充剂可使星形胶质细胞成像。另外,荧光钙蛋白标记星形胶质细胞的选择靶向作用能够研究它们的功能,不混淆其他神经纤维网的效应与多细胞药物填充和SR101的着色。小脑皮质的2种星形胶质细胞:BG细胞和有缘膜的原浆性星形细胞,在亚细胞水平上钙的浓度到钙的波形,它们显示不同的信号肽指令。许多星形胶质细胞是由嘌呤能物质释放和嘌呤能物质介导所触发的。通过神经元活动和全局血流量的改变证实大量星形胶质细胞的钙浓度是增加。在这篇综述中,概述BG细胞和原浆性胶质细胞的功能。希望一些工具研究它们的钙离子动力学及功能。

细胞凋亡显像的研究现状及发展前景

对不同放射性核素、不同螯合剂和配体合成凋亡显像剂annexinV的标记、合成、各自的生物学特性作了全面的评价，并对实验结果和临床应用作了总结和分析，体外试验及体内显像表明，放射性核素标记annexinV及其衍生物能较灵敏地探测凋亡事件，细胞凋亡在心肌梗死、动脉粥样硬化及肿瘤形成等病理过程中发挥重要作用。凋亡显像能较好地评价心肌缺血再灌注损伤诱发的心肌凋亡，可早期评价和预测肿瘤放疗、化疗疗效，有助于指导建立个体化治疗方案。同时，对磁共振、超声、近红外线显像探测细胞凋亡作了分析，比较了不同影像学检查在探测细胞凋亡的优势和不足。