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题名肠上皮细胞紧密连接模型的建立与验证
被引量:1
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作者
陈婷
张娇
王晓鸽
康楠
王凤云
唐旭东
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机构
中国中医科学院西苑医院脾胃病研究所
北京市昌平区中医医院脾胃病科
河南中医药大学附属第一医院脾胃肝胆科
济宁医学院附属医院中医科
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出处
《山东医药》
CAS
2022年第35期1-4,共4页
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基金
国家自然科学基金面上项目(82074420)
中国科协青年人才托举工程专项(CACM-2019-QNRC1-02)
中国中医科学院优秀青年科技人才培养专项(ZZ13-YQ-009、ZZ13-YQ-009-C1)。
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文摘
目的 体外分化Caco-2细胞建立肠上皮细胞紧密连接模型,并对其进行综合评价。方法 将融合至90%的Caco-2细胞以8×104/孔接种于Transwell 24孔培养板上,每孔基底侧加入MEM培养基600μL,顶侧加入细胞悬液100μL;接种后第1周隔日更换培养液,第2周起每日更换培养液,直至培养第21天。细胞培养第3、5、7、15、19、21天,使用细胞电阻仪测定跨膜电阻(TER);细胞培养第5、15、21天,取细胞单层顶侧与基底侧培养基并检测其碱性磷酸酶(ALP)活力,计算顶侧与基底侧ALP活力比;取体外分化培养21天的Caco-2细胞,使用多功能酶标仪检测大分子物质荧光黄(FD-4)通过单层细胞的百分率(即FD-4通透率)及跨膜转运表观渗透系数(Papp),透射电镜下观察细胞形态。结果 Caco-2细胞体外分化培养第3、5、7、15天的TER均明显低于第19、21天(P均<0.05),Caco-2细胞体外分化培养第19和21天TER比较无统计学差异(P>0.05)。Caco-2细胞体外分化培养第5、15、21天顶侧与基底侧ALP活力比分别为1.43±0.16、2.43±0.28、4.85±0.25,Caco-2细胞体外分化培养第5、15天顶侧与基底侧ALP活力比均明显低于第21天(P均<0.05)。体外分化培养第21天的Caco-2细胞FD-4通透率为2.31%±1.12%,Papp为(1.95±0.90)×10^(-7)cm/s。透射电镜观察结果显示,体外分化培养第21天的Caco-2细胞由微绒毛形成的刷状缘排列整齐致密;细胞顶侧面分化出完整的紧密连接结构,表现为连续的融合点,呈“焊接线”样围绕在细胞膜的顶部,相邻细胞膜被“焊接”在一起,形成绳索样结构。结论 Caco-2细胞在Transwell板体外分化21天后可形成肠上皮细胞紧密连接结构,证实成功构建肠上皮细胞紧密连接模型。
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关键词
细胞紧密连接
肠上皮细胞
跨膜电阻
碱性磷酸酶
荧光黄通透率
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Keywords
tight junction
intestinal epithelial cells
transmembrane resistance
alkaline phosphatase
fluorescein permeability
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分类号
R574
[医药卫生—消化系统]
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