上饶早梨道地性农家种遗传多样性与亲缘关系的荧光AFLP分子标记分析

为了探讨上饶县花厅镇和田墩镇这两个相邻乡镇上饶早梨道地性农家种的遗传多样性与亲缘关系，采用6对EcoRⅠ／MseⅠ引物组合对其20个样本进行荧光AFLP分子标记分析。结果表明，上饶早梨2个道地性农家种20个样本6对引物组合扩增的平均位点数为84．83，平均多态性位点数为23．83，平均多态性百分率为28．09％。上饶早梨2个道地性农家种20个样本6对引物组合扩增位点的平均观测等位基因数Na为1．2809，平均有效等位基因数Ne为1．2076，平均Nie’s基因多样度H为0．1149，平均香农信息指数Ⅰ为0．1661，遗传多样性水平较低。上饶早梨2个道地性农家种20个样品的遗传相似系数为0．7485～1．0000，平均值为0．8906，个体间相似度较高。通过UPGMA聚类分析，上饶早梨2个道地性农家种20个样本被分为两大类。第Ⅰ类包括“花厅六月雪”和“花厅黄皮消”，第Ⅱ类包括“田墩六月雪”，表明上饶县花厅镇和田墩镇这两个相邻乡镇上饶早梨的道地性农家种（“六月雪”）虽然具有相似的遗传物质基础，但也存在明显的种植地差异。根据6对EcoRⅠ／MseⅠ引物组合扩增位点的特异性，并依据其扩增模式图进行编码组合，构建了上饶早梨2个道地性农家种20个样本的DNA分子指纹图谱，可以用于上饶早梨各种植地农家种分子水平上的鉴定。

应用STR荧光标记分析烟台地区草莓种质资源遗传多样性

本研究以烟台地区1份野生草莓种质和6份常规栽培品种为试材,选取已发表具有扩增多态性的11对STR荧光标记引物进行扩增,采用多重荧光毛细管电泳检测,分析了该地区草莓种质的遗传多样性,并构建了其分子身份证.结果表明,用这11对引物从7份草莓种质中共检测到60个STR等位基因位点,平均每对引物5.45个,扩增片段长度在90~270 bp之间,多态信息含量平均为0.676,可用于草莓种质的多态性检测.聚类分析显示7份草莓种质间的遗传相似系数为0.077~0.842,在遗传相似系数为0.257时,7份种质被分为3个类群,W1(野生草莓)与S2(丰香种质)同源性较高.对7份草莓种质进行不同等位基因编码,构建了分子身份证.本研究结果可为烟台地区草莓种质资源鉴定、保护和开发利用提供重要依据.

东北春播区糜子核心种质的荧光微卫星标记鉴定

优异种质资源是糜子新品种选育和产业发展的基础。本研究以190份东北春播区糜子核心种质为材料,利用前期构建的SSR标记在5'端标注荧光,进行PCR扩增和毛细管电泳。根据毛细管电泳检测的片段有无采用“0/1”表示,利用ID Analysis4.0进行区分,使用PopGene、PowerMarker、MEGA、Structure、NTSYS进行遗传多样性分析。试验结果表明,3个荧光SSR标记组合(RYW3+RYW6+RYW28)可区分190份材料,共检测出等位变异73个,平均为24.3333;有效等位基因数(Ne)为5.4728(RYW3)~15.8922(RYW6),平均为9.6496;检出Shannon多样性指数(I)为2.0851(RYW3)~2.9457(RYW6),平均为2.4896;观测杂合度(Ho)为0.7529(RYW6)~0.9574(RYW28),平均为0.8876;期望观测杂合度(He)为0.8194(RYW3)~0.9398(RYW6),平均为0.8765;Nei’s基因多样性指数(Nei)为0.8173(RYW3)~0.9371(RYW6),平均为0.8741;多态性信息含量(PIC)为0.8656(RYW3)~0.9722(RYW6),平均为0.9198。基于UPGMA将190份资源划分为3个群组。基于Structure的遗传结构分析(K=3)将糜子核心种质分为3个类群,来源于东北地区的4个基因库(黑龙江、吉林、辽宁和内蒙古的一部分)。基于主成分分析将材料分为4个类群,与地理来源一致。利用在线二维码技术(https://cli.im/)构建了190份东北糜子核心种质的DNA分子身份证。

应用STR荧光标记分析烟台地区菊花种质资源遗传多样性

【目的】探明烟台地区菊花种质资源的遗传多样性,为烟台地区菊花种质的分类鉴别、资源保护及品种培育提供依据。【方法】应用荧光STR分子标记和毛细管电泳检测技术分析烟台地区非洲菊、秋菊、洋甘菊等12份菊花种质,结合主要表型性状观察进行聚类分析并构建分子身份证。【结果】10对引物共检测到103个STR等位基因位点,平均每对引物的位点数10.3个,扩增片段长度在118~376 bp之间,引物多态性信息(PIC)平均0.795 8。聚类分析依照遗传相似系数将12份菊花种质分为四大类,其中,Ⅰ类群包括秋菊、雏菊、野菊(1)、杭菊(白)、杭菊(黄)、翠菊、野菊(2)共7份种质,占总数的58.3%,含大菊1份、小菊6份,平瓣2份、匙瓣3份、管瓣2份;Ⅱ类群包括非洲菊、洋甘菊2份种质,占总数的16.7%,花瓣类型均为平瓣;Ⅲ类群仅杭菊(紫)1份种质,占总数的8.3%;Ⅳ类群包括一年蓬、野菊(3)2份种质,占总数的16.7%,均为小菊、平瓣花。不同花色、花序大小、花瓣类型的种质存在交叉聚集现象。【结论】烟台地区菊花种质具有较好的遗传多样性,STR荧光标记可有效分析该类种质资源,基于STR分子手段构建了12份菊花种质资源的分子身份证。

基于SSR荧光标记法的桃同名异物品种鉴定技术与应用

为高效鉴别桃种质遗传差异及区分同名异物品种,建立了基于SSR荧光标记法的桃同名异物鉴定技术,利用10对SSR核心引物,通过SSR荧光标记毛细管电泳技术检测扩增条带确定基因型,并对基因型进行分析和赋值,构建分子身份证。利用该鉴定技术进行同名异物品种鉴定、苗木纯度分析和种质资源剔重,鉴定3对疑似同名异物桃品种、50份中油蟠9号桃苗木和102份新收集种质资源,结果表明,突围和春美、8D35和HBZZ10引物差异位点数目为0,分别判定为同名异物品种;50份中油蟠9号苗木差异位点数目为0,且与中油蟠9号相比差异位点数目为0,判定为同一品种,说明苗木纯度为100%;莎车白肉桃2号、莎车绿肉桃9号2份种质差异位点数目为0,莎车白肉桃4号、莎车白肉桃6号和莎车绿肉桃5号3份种质差异位点数目为0,说明上述5份种质保存2份即可。该技术的应用对知识产权保护和种质资源的高效保存具有重要意义。

应用SSR荧光标记法构建22个柚类品种的分子身份证

【目的】应用荧光SSR分子标记构建柚类种质分子身份证,用于品种资源鉴定。【方法】收集22份柚类材料,筛选SSR荧光标记引物,采用荧光毛细管电泳检测技术分析扩增条带分子质量和等位基因,获得相应的扩增带型,从而对每份柚材料进行标记。采用个位阿拉伯数字和小写英文字母对不同等位基因分子质量大小进行编码,再按照引物扩增带型数由大到小顺序将各位点赋值编码的数字串联排序,构建供试样品的分子身份证。【结果】筛选出4对多态性较好的引物,使用这4对引物共检测到49个扩增带型和41个SSR等位位点,平均每对引物的有关带型数12.25个、位点数10.25个。【结论】通过扩增带型分析,构建了22份柚类种质的分子身份证,包括12条信息独特的身份证。遗传聚类与分子身份证分析结果一致,为柚类品种鉴定和保护提供了重要依据。

分子标记物1p/19q荧光原位杂交图像中细胞自动计数和标记方法

细胞数值是临床中利用荧光原位杂交检测方式对分子标记物1p/19q共缺失状态评定工作中非常重要的参数。文章提出了一种新的细胞自动计数方法,利用1p/19q荧光原位杂交图像特点,提取红色通道图像,经二值化,去干扰,统计两点间距离等操作来实现细胞的自动计数和标记工作。该方法在临床收集的不同成像质量、背景干扰、细胞团簇等情况的图像中获得了90%以上的平均准确率。

黄瓜全雌性基因连锁的AFLP和SCAR分子标记

本研究以全雌品种‘戴多星’自交系和弱雌品种‘北京截头’自交系为双亲杂交获得F1,然后得到F2性型分离群体,利用分离群体分组分析法(BulkedSegregantAnalysis,BSA)构建全雌和弱雌两个基因池,筛选了64对AFLP选择性引物EcoRINN+MseINNN组合,发现EcoRITG+MseICAC引物组合在全雌基因池中扩增出一条分子量为234bp的特异带。经F2代单株验证,该特异条带能在全雌单株中稳定出现。以MAPMAKER(Version3.0)软件分析,该标记与全雌性位点的连锁距离在6.7cM。命名该连锁标记为TG/CAC234。将该特异条带回收、克隆、测序,设计特异SCAR引物,再对F2代单株基因组DNA进行扩增,仅在全雌单株中扩增出1条分子量为166bp的特异带,表明已成功地将与黄瓜全雌性连锁的AFLP标记转化为操作简便、表现稳定的SCAR标记,该标记命名为SA166。

河北和山东冬枣果实品质评价及AFLP分子标记的研究

为探讨产区间冬枣的品质、遗传差异，将来源于河北和山东不同产地的冬枣按照完全随机区组设计栽种于河北、山东、北京的4个试验园，采取同样的栽培管理措施。通过对试验园冬枣果实的形态、品质等各项指标进行连年的分析测定和感官评价，并进行了DNA—AFLP分子标记研究。结果表明：河北、山东两省冬枣的单果质量、纵横径、果形指数、可食率、含水率、着色指数，果实Vc、总糖、可滴定酸和可溶性固形物含量等指标间没有明显差异，在同一试验园两省冬枣的感官评价差异也不明显；AFLP分析证明两省冬枣样品间遗传相似性很高（SM=0．9873～1．0000），被聚为一类，表明产自河北、山东的冬枣属于同一品种，造成冬枣果实品质差异的主要原因是立地条件和管理措施。冬枣品种内确实存在一定差异，这些差异属于单株变异，与产地来源无关。

水稻空间诱变的遗传变异及突变体的AFLP分子标记

搭载“神舟三号”航天飞船的水稻纯合种子在返回地面后SP3代种子出现颖壳、茎杆和叶片的主脉变异为金黄色的突变体,其他性状无明显变异,经遗传分析,颜色变异属一对隐性基因控制的性状变异。同时利用AFLP分子标记的方法,对航天诱变的水稻突变体进行基因组对比分析,通过聚丙烯酰胺电泳寻找突变体(黄金1号)多态性DNA片段,经过一系列引物筛选,找到了5条多态性DNA条带,对开展突变体基因功能研究和杂交水稻聚合育种有十分重要的意义。

RFLP、RAPD、AFLP分子标记及其在植物生物技术中的应用

分子标记的创新、发展与应用对植物分子生物学和植物生物技术起了积极的推动作用。本文就 Ｒ Ｆ Ｌ Ｐ、 Ｒ Ａ Ｐ Ｄ、 Ａ Ｆ Ｌ Ｐ 分子标记及其在植物生物技术中应用作一介绍。

中国明对虾AFLP分子标记遗传连锁图谱的构建

以中国明对虾抗WSSV(白斑综合症病毒,WhiteSpotSyndromeVirus)选育群体第四代为母本,野生中国明对虾为父本,采用单对杂交方式产生F1代,F1代个体姊妹交产生F2代共42个个体为做图群体。62对AFLP选择性引物组合共产生529个分离位点,符合1∶1孟德尔分离类型位点共253个,3∶1孟德尔分离类型位点共276个。利用拟测交理论分别构建中国明对虾雌虾、雄虾的遗传连锁图谱,利用F2自交模型构建共同的AFLP分子标记连锁图谱。三张连锁图上分别有31、25和44个连锁群,图谱分辨率为分别为2.4cM、2.4cM和2.1cM。标记间隔距离分别为12.20cM、11.45cM和11.12cM图谱覆盖率分别达到50.21%、51.93%和48.08%。能够基本满足进行QTL(数量性状位点,QuantitativeTraitLocus)定位的需要。将该图谱和其他对虾类遗传连锁图谱进行了比较分析,探讨了利用相关分子标记将已有图谱进行整合的可能。

利用AFLP技术筛选与银杏性别相关的分子标记

利用 amplified fragment length polymorphism(AFLP)技术 ,应用 4 8个引物组合 ,检测了雌雄银杏基因组DNA的多态性 ,筛选与银杏性别相关的分子标记 ,其中 3个引物组合各提供了 1个与雌性相关的分子标记 .经Southern点杂交证实有两个标记为银杏雌性基因组所特有 .这些分子标记的获得 ,为寻找性别特异的探针或PCR引物 。

AFLP分子标记构建中国对虾遗传连锁图谱的初步研究

利用AFLP分子标记结合“拟测交”策略，以中国对虾的单对杂交亲本及其F1代为作图群体，应用MAPMAKER EXP／3．0软件，分别构建了中国对虾雌、雄的遗传连锁图谱。在中国对虾的雄性连锁图谱中，74个标记组成了5个连锁群(遗传标记数量大于3)、7个三联体、13个连锁对，总图距为951．5eM，最大连锁群的长度为206．2eM，最短的为7．4eM，标记间的平均距离为12．8eM；雌性连锁图谱中，由66个标记组成的5个连锁群，4个三联体，13个连锁对，总图距为712．7eM，连锁群的长度介于7．7eM～128．2eM之间，标记间的平均距离为10．7eM。估算的中国对虾基因组总长度为2000eM，所构建的连锁图谱分别覆盖了基因组长度的47．5％和35．6％。中国对虾遗传连锁图谱的构建为分子标记辅助育种、比较基因组作图以及基因定位与克隆创造了条件，并对今后其他海洋生物遗传图谱的构建具有理论价值和实践意义。

新一代分子标记技术──AFLP

ＡＦＬＰ（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）是近年来发展起来的最有效的新一代分子标记技术．本文对ＡＦＬＰ的发生发展、基本原理、反应程序，在植物分子生物学研究中的应用以及方法本身的优缺点进行了介绍和评述．

一张含有315个SSR和40个AFLP标记的大豆分子遗传图的整合

本研究是基于“锚定SSR标记”作图策略,利用2个F2群体,选用592对SSR引物,对宛煜嵩等利用重组自交系群体Jinf构建的含有227个SSR标记的图谱的基础上进行整合。整合后的大豆分子遗传图包含315个SSR标记和40个AFLP标记,总图距为1951.7cM,相邻标记间的平均图距为5.48cM。整合后的遗传连锁图归属20个连锁群对应于大豆20条染色体,连锁群长度范围从40.8cM到184.4cM,标记数范围从11到41个。整合后的图谱新增加了87个SSR标记,其中A2、C1、C2、D1b和G连锁群有较多的标记增加。整合后的大豆分子遗传图谱中的标记顺序比原图谱与“公共图谱”有更好的线性符合度。本文还进一步对两种类型的作图群体的配合和不同作图软件的选用等问题进行了比较和深入的讨论。

红花RAPD和AFLP分子标记技术多态性效率比较

目的探讨RAPD和AFLP这两种分子标记技术应用于红花不同品系多态性效率的比较。方法以河南无刺大红袍和若羌有刺白两个红花品系为材料，应用100条RAPD引物、64对AFLP引物，对两品系进行多态性筛选，初步确定反映品系间差异的引物。结果筛选到RAPD特异性引物共5条，分别为AA52726、AA52729、AA52739、AA52766、AA52785，在两品系间扩增到稳定的差异片段；筛选到AFLP特异性引物共7对，分别为AF26356、AF26372、AF26385、AF26311、AF26396、AF26327、AF26343，在两品系间扩增到稳定的差异片段。结果表明，平均每条RAPD引物可以扩增出红花基因组片段数目4～10条，多态性选出率为O．20％；平均每对AFLP引物可以扩增出红花基因组片段数目为50～80条，多态性选出率为O．31％。就每条（对）引物平均可以扩增出多态性条带的数目而言，RAPD引物为1～2条，AFLP引物组合则4～5条，AFLP的检测效率明显高于RAPD。结论在红花的分子标记研究中，AFLP较RAPD为更有效的分子标记。

利用SSR荧光标记构建山东地方梨种质资源分子身份证

【目的】利用SSR荧光标记构建45份山东地方梨种质资源的分子身份证。【方法】从SSR富集文库中开发并设计40对引物,从中筛选出10对多态性良好的引物,采用SSR荧光标记毛细管电泳技术检测扩增条带分子质量的方法对山东地方梨种质资源进行分析,获得相应的扩增条带。采用个位数字和小写英文字母对不同带型进行编码,按照10对引物扩增带型数由少到多顺序串联排序的方式构建供试样品的分子身份证。【结果】10对SSR引物共检测到111个SSR等位位点和189个带型,平均每对引物对品种扩增的等位位点11.1个,带型18.9个。采用个位数字和小写英文字母结合对不同带型进行编码,成功构建了45份山东地方梨种质资源的分子身份证,可以将材料完全区分开。【结论】构建了45份山东地方梨种质资源分子身份证,有利于山东地方梨种质资源的保护与利用。

甘薯抗黑斑病材料AFLP标记分子鉴定初步研究

以南薯88等12个抗感黑斑病品种为材料,通过甘薯黑斑病室内抗性鉴定,确定其抗感病程度。通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化,建立了甘薯黑斑病的AFLP分子标记体系。并用该体系找到了与甘薯抗黑斑病紧密相关的特异性DNA片段,对该片段克隆、测序后发现该DNA片段由320个碱基组成,为进一步分析该片段的特异性和灵敏性为甘薯抗黑斑病分子标记辅助育种奠定了基础。

家蚕AFLP分子标记分离规律的研究

为研究家蚕遗传的多样性,以家蚕品种湘晖×872杂交的91个F_2个体为材料,采用AFLP分子标记技术,对杂交后代的分离规律进行了研究。结果显示:采用的44对引物共扩增出5134条带,其中1002条带呈多态性;经x^2检测,有537条带符合3:1分离比。