高邮鸭青色蛋壳性状荧光AFLP标记的建立

应用荧光扩增片段长度多态性(AFLP)标记技术对高邮鸭4个高度纯合的分离体分组混合家系蛋壳颜色性状进行了遗传多样性分析。在高邮鸭分离体分组混合家系AFLP指纹研究中,对AFLP技术中选择性扩增中的引物使用荧光标记代替同位紊标记,并对AFLP反应进行了优化。在AFLP分析中,共采用了64个EcoR I／Mse I引物组合,每个引物组合扩增出的条带数在40条以上。结果表明:从这64个引物组合中筛选到1个引物组合E-ACT／M-CTC,能同时将供试的4个分离体分组混合家系分开,从而可用于早期青壳性状的鉴定。

杏叶片DNA提取和荧光AFLP反应体系的建立

以杏嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的杏叶片总DNA,通过优化酶切、连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了高效稳定的杏荧光AFLP反应体系;筛选出多态性好的12对引物组合,均获得稳定、清晰的扩增图谱,可进行杏品种鉴定、种质资源的遗传多样性和亲缘关系分析等研究。

不同用途杏品种群的AFLP分析

利用荧光AFLP技术,对49个隶属于不同用途的杏种质资源的遗传多样性和群体遗传结构进行了研究,结果表明,8对EcoRⅠ/PstⅠ引物平均扩增多态带数量为183.9,平均多态带百分比为85.1%,揭示了杏资源丰富的遗传多样性。杏资源在个体间的Nei’s基因多样度(H=0.184)、Shannon信息指数(I=0.295)、观测等位基因数(Na=1.851)和有效等位基因数(Ne=1.294)都显著高于群体水平。在群体水平上,杂种杏品种类群的4个遗传变异参数都高于其他4个类群,遗传变异度最大。5个品种类群的遗传分化系数(Gst=0.267 9)显示,杏资源的遗传变异主要存在于群体内,占总变异的73.21%。仁用杏品种类群和观赏杏品种类群之间的遗传关系最近(遗传一致度IN=0.985 0,遗传距离D=0.015 1),鲜食加工兼用品种类群与其他4个类群的遗传关系比较结果显示,其与杂种杏品种类群间遗传关系最近(IN=0.946 3;D=0.056 5)。UPGMA聚类分析结果表明,以0.537为阈值将49份材料分为3个大类,第(1)类全部是鲜食加工兼用杏品种;第(2)类由全部仁用杏品种和全部观赏杏品种组成;第(3)类包括引进的3个品种和全部9个杂种杏。

上饶早梨道地性农家种遗传多样性与亲缘关系的荧光AFLP分子标记分析

为了探讨上饶县花厅镇和田墩镇这两个相邻乡镇上饶早梨道地性农家种的遗传多样性与亲缘关系，采用6对EcoRⅠ／MseⅠ引物组合对其20个样本进行荧光AFLP分子标记分析。结果表明，上饶早梨2个道地性农家种20个样本6对引物组合扩增的平均位点数为84．83，平均多态性位点数为23．83，平均多态性百分率为28．09％。上饶早梨2个道地性农家种20个样本6对引物组合扩增位点的平均观测等位基因数Na为1．2809，平均有效等位基因数Ne为1．2076，平均Nie’s基因多样度H为0．1149，平均香农信息指数Ⅰ为0．1661，遗传多样性水平较低。上饶早梨2个道地性农家种20个样品的遗传相似系数为0．7485～1．0000，平均值为0．8906，个体间相似度较高。通过UPGMA聚类分析，上饶早梨2个道地性农家种20个样本被分为两大类。第Ⅰ类包括“花厅六月雪”和“花厅黄皮消”，第Ⅱ类包括“田墩六月雪”，表明上饶县花厅镇和田墩镇这两个相邻乡镇上饶早梨的道地性农家种（“六月雪”）虽然具有相似的遗传物质基础，但也存在明显的种植地差异。根据6对EcoRⅠ／MseⅠ引物组合扩增位点的特异性，并依据其扩增模式图进行编码组合，构建了上饶早梨2个道地性农家种20个样本的DNA分子指纹图谱，可以用于上饶早梨各种植地农家种分子水平上的鉴定。