多重荧光定量聚合酶链反应法检测肉制品中的3种食源性致病菌

目的建立多重荧光定量聚合酶链反应法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大肠杆菌O157:H7的rfbE基因序列分别设计特异性引物及探针,通过优化反应体系,测定其灵敏度、特异性和重复性,建立了可同时检测上述3种食源性致病菌多重qPCR方法。结果该方法只扩增3种靶细菌,对其他供试菌不扩增;沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7的检出限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)拷贝数/μL,并且拥有良好的重复性和特异性。人工污染的猪肉样品经SLE培养基富集8 h后,分别可以检测到初始菌液浓度为1.56×10^(2)CFU/25 g的沙门氏菌,2.13×10^(2)CFU/25 g的单增李斯特菌,2.32×10^(2)CFU/25 g的大肠杆菌O157:H7。结论所建立的多重qPCR灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌,在提高食品安全和保护人类健康方面有重要意义。

实时荧光PCR法血清分型与全面生化反应对沙门氏菌的临床检验价值

目的:分析实时荧光PCR法血清分型与全面生化反应对沙门氏菌的临床检验价值。方法:选取医院2021年1月—2023年6月期间收治的疑似为沙门氏菌感染的患者100例,将患者粪便标本采用全面生化反应检验法,以传统微生物检验法为对照,比较两种检验方法的检出率;再分别采用传统玻片血清凝集分型法和实时荧光PCR法血清分型将鉴定出的沙门氏菌进行血清学分型,通过统计学分析方法比较两种分型方法的符合率。结果:全面生化反应检验诊断沙门氏菌的检出率(62.00%)较微生物检验法(54.00%)高,但差异无统计学意义(P>0.05);全面生化检验对沙门氏菌的诊断敏感度为95.08%、阴性预测值为92.11%,均高于微生物检验法的81.97%、76.09%,差异有统计学意义(P<0.05)。与传统玻片血清凝集分型检验相比,分子血清分型试剂盒检验对沙门氏菌血清学分型的检出符合率高(Kappa值=0.842)。全面生化反应检验、实时荧光PCR法血清分型的检验时间均短于微生物检验法、玻片血清凝集法(P<0.05)。结论:沙门氏菌临床检验中全面生化反应检验与实时荧光PCR法血清分型检验均有一定价值,若将两种方法联合应用可快速检出沙门氏菌,且能对细菌进行准确分型。

实时荧光定量PCR检测不同结核标本及其联合玻璃珠磨菌法检测的价值

目的研究实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)与玻璃珠磨菌法联合用于不同结核标本检测中的价值。方法以回顾性分析为法,收集并分析2021年1月至2022年6月在上海交通大学医学院附属仁济医院住院与门诊诊治的疑似结核病患者1200份不同临床标本的qRT-PCR测定结果,其中血液样本469份,胸腔积液标本322份,心包积液标本16份,尿液标本25份,气管(支气管)肺泡灌洗液标本8份,腹腔积液标本34份,脑脊液标本143份,脓液标本31份,痰液标本152份;同时,对41份痰液标本予以玻璃珠振荡磨菌前后qRT-PCR定量检测效果分析。结果1200份不同结核标本的总检测阳性率为15.83%(190/1200),其中检出率最高的为气管(支气管)肺泡灌洗液标本,占比为37.50%(3/8),且门诊患者阳性率最高,占比为40.00%(2/5);脓液标本检出率第二,占比为35.48%(11/31),且住院患者阳性率最高,占比为38.46%(10/26);痰液标本检出率第三,占比为30.26%(46/152)。41份痰液标本经玻璃珠磨菌处理5 min之后,qRT-PCR检测核酸浓度明显高于处理前,差异有统计学意义(P<0.05);其中,14份痰液标本提升了菌株数量级,且11份含菌量为10^(2)拷贝/mL痰液标本于振荡研磨处理之后,7份痰液标本提升至了10^(3)拷贝/mL菌量数量级,磨菌处理后阳性检出率明显高于磨菌处理前,差异有统计学意义(P<0.05)。结论气管(支气管)肺泡灌洗液标本、脓液标本、痰液标本检测中qRT-PCR的检出率较高,而qRT-PCR在其他结核标本检测中的检出率较低,qRT-PCR联合玻璃珠磨菌法检测可有效提升临床结核标本阳性检出率。

探讨荧光定量PCR法与免疫胶体金法用于骨质疏松症手术住院患者感染监控的诊断价值

目的本研究旨在探讨荧光定量聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法与免疫胶体金法检测用于骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控的临床效果。方法选取2020年3月—2023年4月曲靖市第一人民医院收治的180例骨质疏松症进行手术治疗疑似住院感染患者作为研究对象,所有患者均先后接受荧光定量PCR法与免疫胶体金法检测,以细菌培养结果作为金标准,比较两种方法的检出率,评估两种检查方法的诊断效能。结果荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为96.67%、89.19%、98.60%、94.29%、97.24%,免疫胶体金法分别为82.78%、43.24%、93.01%、61.54%、86.36%,荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于免疫胶体金法检验,差异有统计学意义(χ^(2)=18.827、17.458、5.567、10.124、11.533,P均<0.05)。结论荧光定量PCR法检验在骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控中具有良好的诊断效能。在骨科住院患者感染监控中予以微生物检验干预,有助于基于检验结果进行及早诊断和治疗,进而降低感染发生率和传播风险。

FQ-PCR检测乙型肝炎病毒DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项在乙肝诊断中的应用价值。方法选择2021年1月至2023年10月本院接收的82例疑似乙肝患者作为研究对象,均通过FQ-PCR实施HBV-DNA检测,同时予以时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项[乙肝病毒核心抗体(HBcAb)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)],并分析检测结果。结果82例患者中,HBV-DNA阳性率为70.73%(58/82)。82例患者中,组合A(HBcAb+HBeAg+HBsAg阳性)占比91.46%(75/82),组合B(HBeAb+HBsAg阳性)占比63.41%(52/82),组合C(HBcAb+HBeAb+HBsAg阳性)占比37.80%(31/82),组合D(HBcAb+HBeAb+HBsAb阳性)占比6.10%(5/82),组合E(HBeAg+HBsAg阳性)占比64.63%(53/82)。组合A、组合B、组合C、组合D、组合E中HBV-DNA阳性率分别为53.33%(40/75)、7.69%(4/52)、29.03%(9/31)、40.00%(2/5)、5.66%(3/53),组合A中HBV-DNA阳性率均高于其他各项组合,差异具有统计学意义(P<0.05)。FQ-PCR检测HBV-DNA联合时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项诊断乙肝的准确度、灵敏度高于单独FQ-PCR检测HBV-DNA及时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论在乙肝诊断中,FQ-PCR检测HBV-DNA与时间分辨免疫荧光法检测乙肝五项各具优势,积极联合应用有助于进一步提升诊断效能。

荧光定量聚合酶链反应法与免疫学化学发光法检测乙型肝炎病毒的比较

目的比较荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法与免疫学化学发光法(CLEIA)检测乙型肝炎病毒(HBV)的价值。方法选择2020年8月—2022年6月上饶市人民医院检验科341份应用FQ-PCR法测定HBV-DNA阳性血清标本作为研究对象,所有血清标本均采用FQ-PCR法及CLEIA检测。分析HBV-DNA阳性标本中乙肝5项[乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝核心抗体(HBcAb)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝e抗原(HBeAg)]阳性检出率在不同血清模式下HBV-DNA载量分布情况,对比HBV-DNA载量于HBeAg阳性与HBeAb阳性中的分布情况。结果HBsAg+、HBcAb+、HBeAg+及HBsAg+、HBcAb+、HBeAb+阳性检出率最高,分别为38.42%、43.70%;HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAg+阳性检出率为4.99%,HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAb+阳性检出率为4.69%。另外,HBcAb阳性标本共331份,约占所有HBV-DNA阳性标本数的97.07%。大三阳组(131例)患者HBV-DNA平均载量为5.65×10^(8)U/mL,其中低载量占全组比例为17.56%(23/131)、中载量占全组比例为17.56%(23/131)、高载量占全组比例为64.89%(85/131);小三阳组(149例)患者HBV-DNA平均载量为1.82×10^(6)U/mL,其中低载量占全组比例为81.88%(122/149)、中载量占全组比例为15.44%(23/149)、高载量占全组比例为2.68%(4/149)。HBeAg阳性患者于高载量HBV-DNA中占比为60.67%,HBeAb阳性患者于低载量HBV-DNA中占比为77.71%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论2种方法联合检测在判断HBV感染中具有较高的应用价值,可为诊断及治疗方案制定等提供可靠的参考依据。

应用荧光PCR熔解曲线法分析结核分枝杆菌耐药反应的可行性探究

目的:分析荧光聚合酶链反应(PCR)熔解曲线法(MC)检测结核分枝杆菌(MTB)耐药反应的可行性。方法:选取本院2021年9月至2023年1月本院收治的结核病患者120例,收集患者痰标本进行菌株培养和鉴定,最终纳入102例(株)为本研究观察对象。每份样本均进行罗氏固体药敏试验和荧光PCR-MC检测MTB菌株耐药性。对于耐药性检测结果不一致标本,采用基因芯片法进行验证。结果:102株MTB,经罗氏固体药敏试验检出异烟肼耐药菌株18株(17.65%),检出利福平耐药菌株33株(32.35%);荧光PCR-MC法检测异烟肼耐药菌株16株(15.69%),检测利福平耐药菌株37例(36.27%)。以罗氏固体药敏试验检测结果作为金标准,荧光PCR-MC法检测异烟肼耐药性的Kappa值为0.718,敏感度为72.22%,特异度为92.16%,一致性分析基本一致;荧光PCR-MC法检测利福平耐药性的Kappa值为0.783,敏感度为90.91%,特异度为89.96%,一致性分析基本一致。荧光PCR-MC法检测结果显示,对异烟肼耐药的2例MTB菌株均为katG 315位密码子突变;对利福平耐药的7例中,1例ropB 511位密码子、1例ropB 526位密码子和5例ropB 531位密码子突变。基因芯片法耐药基因检测结果与荧光PCR-MC检测结果一致。结论:荧光PCR-MC检测MTB菌株耐药性(异烟肼和利福平)检测具有良好的效能。

荧光猝灭法对头孢羟氨苄和头孢拉定荷移反应研究

研究了头孢羟氨苄和头孢拉定对荧光素的荧光猝灭反应及相互作用机理。因形成荷移络合物,头孢羟氨苄和头孢拉定对荧光素的荧光强度有很强的猝灭作用。采用紫外-可见光谱、红外光谱结合量子化学计算分析了荷移反应过程,揭示了头孢菌素类药物的成键规律和反应机理。在此基础上建立了测定头孢羟氨苄和头孢拉定含量的荧光光谱法。络合物的激发波长和发射波长分别为483,517和519 nm,头孢羟氨苄和头孢拉定浓度分别在0.3-13.5 mg.L^-1和0.1-1.2 mg.L^-1范围内为线性关系,相关系数分别是r=0.9997和r=0.9993。应用该方法测定了头孢羟氨苄和头孢拉定药物制剂含量,回收率分别在99.63%-99.91%和99.71%-100.08%之间。测定结果与文献值基本吻合。

光化学-荧光分析法研究(Ⅷ)——波长扫描-反应速差分析法

提出了波长扫描-光化学反应速差荧光分析同时测定双组分的方法,以核黄素的光分解反应和甲萘醌的光还原反应为例考察了方法的可行性.结果表明,核黄素、甲萘醌浓度分别在(0～1.20)μg/mL和(0～2.70)μg/mL范围内呈良好的线性关系(γ为0.999和0.998).检出限分别为0.22ng/mL和2.6 ng/mL(n=11).平均回收率分别为101％、99％.

盐酸吡格列酮与BSA反应机理的荧光猝灭法、同步荧光法比较研究

利用荧光猝灭法和同步荧光法进行了盐酸吡格列酮(PGH)与牛血清白蛋白(BSA)之间反应机理的比较研究。结果表明:两种方法在研究PGH-BSA体系的猝灭类型、结合常数、结合位置、作用力类型、协同性及能量转移距离等方面,得到了相同的结果,表明同步荧光光谱法可以用于药物与蛋白反应机理的研究。

荧光定量聚合酶链式反应法检测婴儿尿液人巨细胞病毒DNA对人巨细胞病毒感染的诊断意义

目的探讨荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)方法检测婴儿尿液人巨细胞病毒(HCMV)DNA水平对婴儿HCMV感染的诊断价值。方法采用FQ-PCR检测348例临床疑似HCMV感染婴儿尿液中HCMVDNA水平。同时采用化学发光免疫分析法(CLIA)检测婴儿血清HCMV-IgM抗体。在尿液HCMVDNA检测阳性患儿中比较血清HCMV-IgM抗体检测阳性与阴性患儿尿液中HCMVDNA拷贝数差异。结果FQ-PCR检测尿液HCMVDNA的阳性率为41.74%,CLIA检测婴儿血清HCMV-IgM抗体的阳性率为19.83%。2种方法对HCMV感染诊断的符合率为76.7%。前者诊断阳性率显著高于后者(χ2=69.44P<0.01)。在尿液HCMVDNA检测阳性患儿中,IgM抗体阳性组尿液HCMVDNA拷贝数显著高于阴性组(P<0.01)。结论FQ-PCR检测尿液HCMVDNA是早期诊断婴儿HCMV感染的敏感有效的方法。HCMV感染婴儿尿液中高HCMVDNA拷贝数与活动性HCMV感染密切相关;FQ-PCR方法检测尿液HCMVDNA水平对于判断是否为HCMV活动性感染具有一定意义。

光化学反应——FIA荧光分析法测定维生素B

提出并建立了一种用“光子”作试剂代替各种氧化剂的维生素B_1光化学反应——FIA荧光分析法,对反应体系的介质,注样速度,注样管长度以及注样方式进行了实验和讨论,维生素B_1浓度在0～2.0μg/ml范围内呈良好的线性关系,r=0.999,检出限为2.0ng/ml(S/N=3),对9份含维生素B_1为0.10μg/ml的试液进行平行测定,相对标准偏差为2.7％,对维生素B_1片剂分析,测得维生素B_1含量为标示量的94％,标准加入回收率为97％～100％,对维生素B_1注射液分析,测得维生素B_1含量为标示量的100％,标准加入回收率为95％～100％,在尿液基质中做标准加入回收实验,回收率为80％～83％。

多重聚合酶链反应-毛细管电泳-激光诱导荧光法检测三种食源性致病菌

建立了食品中常见致病菌大肠杆菌O157：H7的uidA基因、沙门菌的invA基因和志贺菌的ipaH基因的多重聚合酶链反应（PCR）产物的毛细管电泳快速检测方法。根据这3种致病菌的特异性基因序列设计多重PCR引物,优化PCR扩增反应体系,采用7.0g/L甲基纤维素为筛分介质,毛细管电泳-激光诱导荧光检测法同时检测了3种常见致病菌的PCR扩增产物。在优化的多重PCR反应和毛细管筛分电泳条件下,该方法可以同时检测沙门菌、志贺菌和大肠杆菌O157：H7基因的多重PCR扩增产物,22min内即可完成3种常见致病菌的毛细管电泳检测。迁移时间的相对标准偏差为1.47%-2.07%。与凝胶电泳法比较,该法简便快速,灵敏度高,可用于多种致病菌脱氧核糖核酸的检测,为食品安全提供了一种可靠的快速检测方法。

血清透明质酸时间分辨荧光免疫分析法的反应条件优化及其临床应用

目的优化血清透明质酸（HA）时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）的反应条件,并探讨其临床应用价值。方法采用TRFIA检测血清中HA的含量,确定参与HA-TRFIA的各反应成分的浓度。结果最佳反应条件为包被浓度10 mg/L、HA结合蛋白（HABP）1∶500稀释、铕标记HA（Eu^3＋-BSA-HA）1∶200稀释。敏感性为5.17μg/L,批内变异系数（CV）为2.21%-3.78%,批间CV为3.73%-5.40%,平均回收率为100.4%。该法HA测定值与放射免疫测定值显著相关,且与临床结果一致。结论本研究建立的血清HA-TRFIA是一种灵敏准确的分析方法,适合临床应用。

荧光定量聚合酶链反应与分支链DNA信号扩增法检测血清HBV DNA的比较

目的 了解荧光定量聚合酶链反应 (PCR)法与分支链DNA信号扩增 (bDNA)法在检测血清中HBVDNA含量上的优缺点。方法 分别用这两种方法平行检测 44份乙型肝炎患者的血清标本 ,并与定性PCR检测结果比较。同时用荧光定量PCR法观察 15例乙肝患者干扰素治疗期间HBVDNA含量变化。结果 ①荧光定量PCR法和bDNA法比较 ,○a前者测出的HBVDNA含量均值为 ( 3 5 0× 10 5± 3 3 6)copies/μl ;后者为 ( 3 0 7× 10 5± 12 9)copies/μl ,两者比较差异无显著性 (P >0 0 5 )。○b前者的HBVDNA阳性率 79 5 % ;后者及常规PCR定性法均为 5 9 1%。荧光定量PCR法的阳性检出率显著高于bDNA法及常规定性PCR法 (P <0 0 5 )。② 15例中 5例获完全应答的乙型肝炎患者其血清HBVDNA含量在治疗 16周内均逐渐下降至完全转阴。结论 荧光定量PCR法与bDNA法在检测血清HBVDNA含量上 ,结果大多一致 ,且敏感性强 ,检验也较简便、价廉 ,并能较好评价和检测乙肝患者抗病毒疗效 ,宜于临床推广。

应用实时荧光聚合酶链反应技术与第二代杂交捕获法检测高危亚型人乳头瘤病毒

目的比较实时荧光聚合酶链反应(PCR)与第2代杂交捕获法(HC-Ⅱ)2种人乳头瘤病毒(HPV)检测方法。方法采用实时PCR与HC-Ⅱ分别检测223例宫颈脱落细胞标本中的高危亚型HPV,对结果不一致的标本进行测序分析。结果实时PCR和HC-Ⅱ2种方法检测高危亚型HPV的一致性较好,总符合率为77%,总一致性指数(Kappa指数)为0.538。其中,高度鳞状上皮细胞内病变(HSIL)组二者的符合率为82%,Kappa指数为0.410,一致性比其他组好。结论实时PCR与HC-Ⅱ检测结果一致性较好,尤其对于HSIL患者,可作为临床上HPV高危亚型检测的有效手段。

荧光反应速率法测定VB_1研究

基于K3 Fe(CN) 6在碱性溶液中氧化VB1的荧光动力学反应 ,利用自制的简单装置 ,以NaOH的加入为反应起点 ,监视荧光反应的进行 ,建立了荧光反应速率法测定VB1的方法 .方法线性范围为 0 .0 135～ 5 .40g/L ,线性相关系数为 0 .9996 ,检出下限为 4.80 μg/L ,相对标准偏差为 2 .8% (n =15 ) .方法应用于VB1药物分析 ,标准加入的回收率在 95 .1%～ 10 1.3%之间 .

机械力固相化学反应法合成稀土磷酸盐绿色荧光粉

以CeCl3·7H2O,La(NO3)3·6H2O,Tb(NO3)3·6H2O,(NH4)2HPO4和适量表面活性剂为原料,采用机械力固相化学反应法制备磷酸盐绿色荧光粉,用XRD和TG DTA分析技术,研究球磨过程和煅烧过程中的物相变化,用扫描电镜和粒度分析对材料的形貌、粒径进行表征。用荧光光谱分析样品的发光性能。研究结果表明,随着球磨时间的增加,有助于产物的晶化,但其结晶程度较低,煅烧后则形成晶型完整的稀土正磷酸盐荧光粉,所得样品为亚微米级的球型绿色荧光粉,在272nm紫外线激发下发绿色荧光,发射主峰在548nm。