荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物耐药性的诊断价值

目的 评价荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物利福平、异烟肼、氟喹诺酮、二线注射类药物(卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素)耐药性的诊断价值。方法 收集2018年1月~2019年5月在浙江大学医学院附属杭州市胸科医院收治的培养阳性且具有荧光PCR熔解曲线和BACTEC MGIT 960药敏结果的205例资料。以BACTEC MGIT960药敏结果为金标准,评价荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物利福平、异烟肼、氟喹诺酮、二线注射类药物耐药性的诊断价值。结果 荧光PCR熔解曲线法敏感而BACTEC MGIT960药敏耐药的例数,在利福平、异烟肼、氟喹诺酮、二线注射类分别为1、9、1、1例。荧光PCR熔解曲线法耐药而BACTEC MGIT960药敏敏感的例数,在利福平、异烟肼、氟喹诺酮、二线注射类分别为2、1、2、0例。两种技术方法的总体符合率,在利福平、异烟肼、氟喹诺酮、二线注射类分别为98.54%、95.12%、98.54%、99.51%。荧光PCR熔解曲线法检测利福平耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别是96.96%、98.84%、94.12%、99.42%、0.946,对异烟肼耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别是80.43%、99.37%、97.37%、94.61%、0.851,对氟喹诺酮耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别是93.33%、98.94%、87.50%、99.47%、0.895,对二线注射类药物耐药性的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、Kappa值分别是85.71%、100.00%、100.00%、99.50%、0.921。结论 荧光PCR熔解曲线法对利福平、异烟肼、氟喹诺酮、二线注射类药物的耐药性有较好的辅助诊断价值,适合临床结核病患者的早期耐药性筛查。

荧光PCR熔解曲线法在检测临床标本结核分枝杆菌及其耐药性中的应用

目的评价荧光PCR熔解曲线法检测临床标本结核分枝杆菌及其对利福平和异烟肼敏感性的性能。方法收集重庆市公共卫生医疗救治中心2016年7月至2018年7月进行过荧光PCR熔解曲线法结核检测的病例,分别与结核菌培养和Genexpert比较检测结核菌的灵敏度,与比例法药敏比较药敏结果。结果在结核菌检测上,荧光PCR熔解曲线法阳性率与结核菌培养相近,低于Genexpert;与比例法药敏相比,检测利福平药敏的灵敏度为93.2%,特异度为80.2%,符合率为84.3%;检测异烟肼药敏的灵敏度为92.6%,特异度为86.3%,符合率为88.6%。结论荧光PCR熔解曲线法可以高灵敏地直接对临床样本快速检测结核菌及其耐药性。

荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星耐药性的诊断价值

目的评价荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星耐药性的诊断价值。方法回顾性分析2018年1月至2019年12月首都医科大学附属北京胸科医院收治的肺结核患者170例,对表型药物敏感性试验(DST)和荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物耐药性进行比较。以表型DST结果为金标准,分析荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物耐药性的诊断价值。评价指标包括:敏感度、特异度、符合率、Kappa值、曲线下面积(AUC)值。同时进一步比较喹诺酮类药物(左氧氟沙星和莫西沙星)的耐药性。结果荧光PCR熔解曲线法DST敏感而表型DST耐药的例数,在异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星分别为5、5、3例。荧光PCR熔解曲线法DST耐药而表型DST敏感的例数,在异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星分别为9、16、24例。两种方法的总体不一致率,在异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星分别为8.24%、12.35%、15.88%。荧光PCR熔解曲线法检测异烟肼耐药性的敏感性、特异性、符合率、Kappa值、AUC值分别是91.53%、91.89%、91.76%、0.821、0.917;对乙胺丁醇的敏感性、特异性、符合率、Kappa值、AUC值分别是77.27%、89.19%、87.65%、0.548、0.832;对左氧氟沙星的敏感性、特异性、符合率、Kappa值、AUC值分别是89.66%、82.98%、84.12%、0.564、0.863。莫西沙星对结核杆菌的耐药率为2.94%,明显低于左氧氟沙星的17.06%(P<0.01)。结论荧光PCR溶解曲线法对异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星的耐药性有较好的辅助诊断价值。

实时荧光PCR熔解曲线法快速鉴定嗜肺军团菌

目的建立特异、快速、敏感的实时荧光PCR熔解曲线基因分型方法,并探讨该法在鉴定嗜肺军团菌中的应用价值。方法根据嗜肺军团菌16S rRNA基因保守序列设计引物和猝灭FRET探针建立实时荧光PCR熔解曲线方法,优化引物与探针浓度,用15株嗜肺军团菌、30株非嗜肺军团菌及7株其他病原菌标准菌株验证该方法的特异性、敏感性和重复性,用该法检测117例临床痰标本并进行基因测序。结果 15株不同血清型的嗜肺军团菌Tm值均为57℃;7株非嗜肺军团菌Tm值为43℃,1株Tm值为45℃;其余22株非嗜肺军团菌和7株其他病原菌均无明显Tm值。该方法最低检出限可达0.1 pg/μL。检测117例痰标本发现3株嗜肺军团菌,与PCR基因测序法检测结果一致。结论实时荧光PCR熔解曲线法可特异、快速和敏感地检测嗜肺军团菌,适用于临床痰标本的嗜肺军团菌检测。

SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线鉴定鸟分枝杆菌方法的建立及初步应用

目的基于SYBR GreenⅠ荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium,MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插入序列IS1311为检测靶标设计引物,在60℃的退火温度下,建立鉴定MA的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA,检测限为5.6×10-2 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列IS1311为基础建立的SYBR GreenⅠ荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。

荧光PCR熔解曲线法对痰样本结核分枝杆菌耐药性检测价值及耐药特征分析

随着抗结核药物广泛、长期以及不规范使用等因素影响,结核分枝杆菌耐药问题越来越复杂,耐药结核病尤其耐多药结核病(MDR-TB)的发病率日趋增高,耐药性的产生使其具有病程长、病情复杂、治愈率低、病死率高等危害。2020年全球上报耐多药/利福平耐药结核(MDR/RR-TB)13.2万例,准广泛耐药或广泛耐药结核病2.6万例,合计约15.8例,较2019年下降22%,据估算我国耐药结核病发病率居全球前三位[1]。2017年,《肺结核诊断标准》把结核分枝杆菌(MTB)分子生物学检查纳入结核病病原学诊断范围[2]。

荧光PCR熔解曲线技术在结核病耐药诊断中的应用价值

目的探讨荧光PCR熔解曲线法对痰样本的利福平和异烟肼相关耐药基因的检测效能。方法回顾性分析2019年7月—2020年7月沈阳市第十人民医院收取的254例痰样本检验结果,以BACTEC MGIT 960液体药敏(以下简称MGIT 960药敏)为参考标准,评价熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性的效能。结果与MGIT 960药敏结果比较,利福平耐药检测的敏感性、特异性和Kappa值分别为89.6%、95.6%和0.83;异烟肼耐药检测的敏感性、特异性和Kappa值分别为81.5%、98.9%和0.85。在初治患者中具有较好的一致性,优于复治患者。结论应用熔解曲线法检测患者痰样本的利福平和异烟肼相关耐药基因,与MGIT 960药敏法比较具有较好的敏感度、特异度和一致性,可快速检测出患者的耐药情况和耐多药结核病(MDR-TB)患者,为临床患者尤其是初治患者提供快速有效的化疗参考方案。

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的临床价值评估

目的:分析评价荧光PCR熔解曲线技术检测结核分枝杆菌异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药耐药性的临床应用价值.方法:收集2013年黑龙江省耐药监测结核分枝杆菌临床分离株215例,运用荧光PCR熔解曲线法检测其对异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药物的耐药性,以微孔板药敏试验结果为金标准,评估熔解曲线快速检测耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率.结果:荧光PCR熔解曲线法检测利福平的灵敏度90.9%(20/22)、特异度95.85%(185/193)、阳性预测值71.42%(20/28)、阴性预测值98.93(185/187)、符合率95.34%(205/215);检测异烟肼的灵敏度为83.33%(35/42)、特异度91.9%(159/173)、阳性预测值71.42%(35/49)、阴性预测值95.78%(159/166)、符合率90.23%(194/215);检测氧氟沙星的灵敏度为90%(9/10)、特异度100%(205/205)、阳性预测值100%(9/9)、阴性预测值99.51%(205/206)、符合率99.53%(214/215);检测莫西沙星的灵敏度为88.88%(8/9)、特异度100%(206/206)、阳性预测值100%(8/8)、阴性预测值99.51%(206/207)、符合率99.51%(214/215);检测阿米卡星的灵敏度100%(3/3)、特异度100%(212/212)、阳性预测值100%(3/3)、阴性预测值100%(212/212)、符合率100%(215/215);检测卡那霉素的灵敏度80%(4/5)、特异度100%(210/210)、阳性预测值100%(4/4)、阴性预测值99.52%(210/211)、符合率99.53%(214/215).结论:荧光PCR熔解曲线技术检测结核分枝杆菌对异烟肼、利福平、氟喹诺酮类、注射类二线药的耐药性有较好的灵敏性、特异性,检测时间短,可用于辅助耐药结核分枝杆菌快速诊断筛查.

SYBR Green I荧光PCR熔解曲线鉴定鸟分枝杆菌方法的建立及初步应用

目的基于SYBR Green I荧光染料建立鉴定鸟分枝杆菌(Mycobacterium avium.MA)的荧光PCR熔解曲线法,为临床鉴定MA提供简单、准确性高的分子生物学检测方法。方法以MA的特异性插人序列ISI311为检测靶标设计引物,在60 C的退火温度下,建立鉴定MA的SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法,并对MA等21种分枝杆菌标准株和金黄色葡萄球菌等5种常见致病菌进行检测,评价方法的特异性、检测限;以hsp65、16S rDNA普通PCR扩增产物测序分析为“金标准”,鉴定200株分枝杆菌临床分离株,评估建立方法鉴定MA的准确性。结果SYBRGreenI荧光PCR熔解曲线方法在30个循环内能准确鉴定出21种分枝杆菌标准株和5种致病菌中的MA.检测限为5.6x 102 ng/μL。200株分枝杆菌临床分离株中,以PCR测序鉴定出16株MA和184株其他分枝杆菌,以SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法鉴定出15株MA和185株非MA;本研究建立的方法和测序方法对MA的鉴定率差异无统计学意义(P>0.05);两法符合率为99.5%(199/200),一致性较高(Kappa值>0.75,P<0.01);建立方法的敏感性为93.8%(15/16),特异性为100.0%(184/184),阳性预测值为100.0%(15/15),阴性预测值为99.5%(184/185)。结论以MA特异性重复序列ISI311为基础建立的SYBR Green I荧光PCR熔解曲线方法,具有较高的灵敏度和特异性,为MA的临床检测提供新的途径。

荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用

目的探讨气管镜刷检物实时荧光PCR熔解曲线耐药法检测对复治结核病耐药早期诊断的价值,同时根据支气管刷检深部痰液结核菌耐药检测结果,进一步分析指导可疑耐药结核病治疗,规范临床合理用药,为耐药结核病的诊断及治疗提供科学依据。方法纳入160例结核分枝杆菌(MTB)患者为本研究对象。每例患者采用同一标本进行绝对浓度法和熔解曲线法耐药基因检测,观察熔解曲线法对利福平、异烟肼的检测敏感度、特异度、准确度。结果同一标本应用两种方法检测时,绝对浓度法检出利福平21例耐药,139例敏感;检出异烟肼68例耐药,92例敏感。熔解曲线法检出利福平17例耐药,139例敏感,4例未检出结果;检出异烟肼61例耐药,99例敏感。熔解曲线法对利福平的检测准确度为96.15%、敏感度为87.50%、特异度为98.39%;对异烟腓的检测准确度为95.00%、敏感度为88.57%、特异度为96.80%。两种检验方法对利福平及异烟肼的耐药及敏感率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论荧光PCR熔解曲线法能够快速检测出MTB对药物的耐药基因检测,而且有良好的敏感度和特异度,有效节约时间、安全高效,是临床检验及诊治耐药结核的有效手段。

荧光PCR熔解曲线技术在地中海贫血产前诊断中的应用

目的探讨荧光PCR熔解曲线技术在地中海贫血产前诊断中的应用价值。方法采用GapPCR、PCR+导流杂交和荧光PCR熔解曲线技术检测143例产前标本的地中海贫血基因,结果不一致时采用DNA测序确认。结果 143例产前标本中检出重症地贫27例,包括20例重型α-地贫和7例重型β-地贫。荧光PCR熔解曲线技术在地中海贫血基因产前诊断中符合率100%。PCR+导流杂交技术检测α-和β-地中海贫血基因与其他2种方法各有1例结果不符,经DNA测序分析是由于PCR+导流杂交技术灵敏度高,因存在低比例的母体细胞污染所致。结论荧光PCR熔解曲线技术是一种高效、快速、准确的地中海贫血基因检测新技术,可用于地中海贫血产前诊断。地中海贫血产前诊断最好采用2种不同技术原理的方法独立检测,保证结果的准确可靠。STR技术检测母体细胞污染的低灵敏度需要警惕。

微阵列芯片法与荧光PCR熔解曲线法在耳聋基因筛查中的比较分析

目的:观察微阵列芯片法与荧光PCR熔解曲线法应用于新生儿耳聋基因筛查的效果,分析两种新生儿耳聋基因筛查方法的临床诊断价值。方法:选取20例干血斑样本(结果已知),分别使用微阵列芯片法、荧光PCR熔解曲线法进行筛查,验证两种筛查方法的准确性、重复性以及检出限。结果:微阵列芯片法的准确率为100%,重复检测结果与临床已知结果相吻合,核酸浓度稀释到检测下限后的检测结果与已知结果的符合率为100%,满足临床基因筛查的需要。荧光PCR熔解曲线法的准确性验证结果为100%,重复性验证显示各通道Tm值的变异系数(CV)均≤5%,检出限样本的检测结果与已知结果吻合,符合临床筛查要求。结论:在新生儿耳聋基因筛查中,微阵列芯片法与荧光PCR熔解曲线法均能够满足临床筛查的需要,临床应用时可根据实际条件合理选取检测方法。

荧光PCR熔解曲线法在地中海贫血基因突变类型分析中的应用

用荧光PCR熔解曲线法,检测人基因组DNA中缺失型α地贫、非缺失型α地贫和β地贫的常见基因缺失和突变,了解受检者地中海贫血基因突变类型检测阳性率及科室分布情况,分析地贫基因分型结果在贫血诊断、正常妊娠监督产前筛查、遗传咨询中的应用。 方法 利用荧光PCR熔解曲线法对 2017年8月至2021年12月于贵阳市第二人民医院就诊的2401例需做地中海贫血基因检查的患者进行检测,分析地贫基因型的阳性率、基因突变类型及科室分布情况。 结果 2401例患者中缺失型α地贫基因检出319例,检出率13.29%;非缺失型α地贫基因检出34例,检出率1.42%;β地贫基因检出278例,检出率11.58%;缺失型α地贫基因中出现率最高的是 --SEA/αα基因型,非缺失型α地贫基因中出现率最高的是c.427T>C基因型,β地贫基因中出现率最高的是 c.52A>T基因型;其中,缺失型α地贫中有4例复合杂合缺失型(--SEA/-α3.7),有19例α缺失合并β突变;β地贫基因中有1例突变类型不在β地贫试剂盒检测覆盖范围内。 结论 用荧光PCR熔解曲线法检测人外周全血地贫基因,可以明确检测出常见地贫基因突变类型。通过对妊娠期产检孕妇进行地贫基因的遗传筛查,可以发现地贫致病基因携带者,找出有地贫发生高风险的家庭,在产前诊断、遗传咨询、预防疾病、优生优育、提高人口出生质量上有指导作用;除此之外,地贫基因检测还是控制重症地贫患者出生及疾病遗传的有效手段,为寻找贫血原因、制定治疗方案提供科学明确的依据。

荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用研究

探讨在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,观察分析应用价值。方法 本研究的时长段在2022年6月到2023年6月,统共1000例结核患者接受治疗,所有病患都拓展了抗结核药物的测验,且每一位患者的标本均予以荧光定量PCR探针熔解曲线法检测,药物敏感性测定结果为黄金基准,考察判辨荧光定量PCR探针熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的诊断效能。结果 针对1000例的标本中,经过液体药敏试验检测显示对利福平药物耐药例数250例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者;对异烟肼医药有耐药性的液体药敏试验500例,应用溶解曲线检测耐药性包含了470例;经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数170例,予以熔解曲线法显示耐药140例。经过液体药敏试验检测显示对乙胺丁醇药物耐药例数300例,役使溶解曲线观察耐药性包含了240例患者。熔解曲线法对利福平医药品、异烟肼医药品、乙胺丁醇医药品、链霉素医药品的灵敏度分别为84.00%、84.00%、47.06%、66.67%;特异度分别为96.00%、90.00%、84.34%、94.29%;准确度分别为93.00%、97.00%、91.00%、86.00%。结论 在结核分枝杆菌耐药基因检测中,对其予以荧光定量PCR探针熔解曲线法,可得到较高的应用价值,灵敏度、特异度、准确度较高,可筛查结核病患者对利福平、异烟肼、乙胺丁醇等药物的耐药性,为临床治疗疾病提供可靠的依据。

荧光PCR探针熔解曲线技术检测痰标本中结核分枝杆菌异烟肼耐药性的研究

目的评价荧光PCR探针熔解曲线(fluorescence polymerase chain reaction probe melting curve,Melt Pro)技术检测痰标本结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)异烟肼耐药性的应用价值。方法收集2021年5月至2022年5月在北京市疾病预防控制中心结核病门诊Gene Xpert MTB/RIF检测为MTB的(简称MTB阳性)患者痰标本,对每份标本同时进行涂片镜检、分枝杆菌分离培养、Melt Pro技术和线性探针技术(Geno Type MTBDRplus,简称Hain试验)异烟肼耐药检测。分析Melt Pro技术检测痰标本MTB异烟肼的耐药性,痰标本荷菌量对检测结果的影响;以培养阳性菌株异烟肼比例法药敏结果为参考标准,评价Melt Pro技术耐药检测效能。结果收集MTB阳性的合格痰标本157例,经分枝杆菌分离培养获得阳性菌株130株。Melt Pro技术痰标本MTB异烟肼耐药性检测成功率为84.1%(132/157)。不同痰涂片结果等级间,Melt Pro技术检测异烟肼耐药成功的比例差异存在有统计学意义(H=24.169,P=0.000),随痰涂片结果等级的升高,检测成功率由“阴性”标本的64.8%(35/54)升高到“3+”“4+”标本的100%(17/17,6/6);该比例也随Gene Xpert MTB/RIF检测MTB等级的升高而升高,由“极低”标本的54.8%(17/31),到“高”标本的96.4%(27/28),各等级间差异有统计学意义(H=27.763,P=0.000)。Melt Pro技术、Hain试验和药敏试验的异烟肼耐药检出率分别为22.0%(29/132),15.3%(19/124),和14.6%(19/130),三者差异无统计学意义(χ^(2)=2.997,P=0.223)。以培养阳性菌株比例法药敏试验结果为参考标准,Melt Pro技术检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:84.6%(11/13)、91.2%(93/102)、55%(11/20)、97.9%(93/95),Kappa值为0.614;Hain试验检测异烟肼耐药的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为:55.6%(10/18)、92.3%(84/91)、58.8%(10/17)、91.3%(84/92),Kappa值为0.490。结论Melt Pro技术可直接检测痰标本MTB耐药性,快速准确筛查患者耐药情况,缩短耐药筛查时间。

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性价值及耐药特征分析

目的 评价荧光PCR熔解曲线法(熔解曲线法)对结核分枝杆菌(MTB)耐药性检测价值。方法 采用熔解曲线法与传统液体药敏法同时检测156例临床分离培养MTB对抗结核药物利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(SM)和氟喹诺酮类药物耐药情况,并对2种检测方案结果进行比较。结果 与液体药敏检测相比,熔解曲线法对5种抗结核药物耐药性检测结果差异无统计学意义(P> 0.05),以液体药敏检测为金标准,熔解曲线法检测RFP、INH、EMB、SM以及氟喹诺酮类药物耐药性的灵敏度分别为100.00%、75.86%、61.54%、75.00%、90.00%,特异度分别为97.10%、95.28%、99.30%、96.21%、100.00%,Kappa值分别为0.885、0.721、0.707、0.724、0.944,表明2种检测方法一致性好。结论 荧光PCR熔解曲线法对抗结核药物RFP、INH、EMB、SM及氟喹诺酮类的耐药性与液体药敏法检测效果一致,灵敏度、特异度均较高,具有较好的临床应用价值。

荧光PCR熔解曲线法检测广东韶关地区G6PD缺乏症基因突变

目的 :采用荧光PCR熔解曲线法检测广东韶关地区G6PD缺乏基因突变,获得基因突变谱并进行方法学应用评价。方法 :采用荧光PCR熔解曲线法试剂盒对613例G6PD缺乏症表型筛查阳性样本,分两管检测中国人群常见的12种G6PD基因突变(95A>G、383T>C、392G>T、487G>A、517T>C、592C>T、871G>A、1004C>A、1024C>T、1360C>T、1376G>T、1388G>A)。结果 :613例标本中检出基因突变536例(男性365例,女171例,占87.44%),其中:1388G>A突变210例(占37.30%),1376G>T突变213例(占37.83%),95A>G突变55例(占9.77%),871G>A突变49例(占8.70%),1024C>T突变18例(占3.20%),1004C>A突变2例(占0.35%),1360C>T突变4例(占0.71%),383T>C突变1例(占0.18%),392G>T突变10例(占1.78%),517T>C突变1例(占0.18%),没有发现487G>A、592C>T突变类型。另外,女性双重杂合或纯合突变分布情况为:1388G>A纯合突变7例,1376G>T纯合突变4例,871G>A纯合突变1例,1388G>A/1376G>T杂合突变4例,1388G>A/871G>A杂合突变2例,1388G>A/95A>G杂合突变1例,1376G>T/1024C>T杂合突变1例,1376G>T/95A>G杂合突变1例,1376G>T/392G>T杂合突变2例。结论 :1388G>A,1376G>T,95A>G,871G>A,1024C>T,1004C>A,1360C>T,383T>C,392G>T,517T>C是韶关地区最常见的基因突变类型,与已报道的中国南方人群突变谱相近;荧光PCR熔解曲线法G6PD缺乏症基因结果准确,可广泛应用于临床基因检测。

基于熔解曲线法对肺部感染分枝杆菌菌种的研究

目的分析荧光PCR熔解曲线法检测分枝杆菌的结果,了解肺部感染分枝杆菌的菌种分布情况及肺部感染非结核分枝杆菌的易感因素。方法选取肺部感染患者的合格痰进行分枝杆菌培养,将培养阳性的菌株应用荧光PCR熔解曲线技术进行菌种鉴定,分析分枝杆菌的分布特点及NTM的易感因素。结果330份临床分离株中鉴定出7种分枝杆菌,分别为结核分枝杆菌85.9%,胞内分枝杆菌4.1%,龟分枝杆菌脓肿亚种4.4%,鸟分枝杆菌1.5%,猿猴分枝杆菌1.2%,偶然分枝杆菌0.6%,戈登分枝杆菌0.6%,有1.8%的菌株无法确定菌种。排出肺结核的混合感染者,35例NTM感染者中26例有合并症。结论采用荧光PCR熔解曲线技术对肺部感染分枝杆菌的临床分离株进行菌种鉴定,为临床快速诊断分枝杆菌病提供实验依据,有利于肺部感染分枝杆菌患者的精准治疗。

海南省澄迈县人群G6PD缺乏症基因突变分析

目的分析海南省澄迈县人群葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PD)的发病率及基因突变类型。方法用Zinkham法对1 299例(男650例,女649例)标本进行G6PD缺乏筛查;用多色探针荧光PCR熔解曲线法对初筛的阳性标本进行中国人常见的16种G6PD基因突变类型检测,对未检出突变的标本进行外显子测序。结果澄迈县人群的G6PD缺乏症总发生率为5.54%(72/1 299),其中男性发生率为6.62%(43/650),女性发生率为4.47%(29/649)。72例阳性标本中有61例检测出有突变,共检出6种基因点突变,含24例1 376 G>T(33.33%),19例1 388 G>A(26.39%),4例95 A>G(5.56%),6例1 024 C>T(8.33%),4例392 G>T(5.56%),3例871 G>A(4.17%),1例1 376 G>T复合1 388 G>A突变(1.39%)。未检出突变的11例(15.28%)标本经外显子测序未发现新突变。结论澄迈县G6PD缺乏症发生率高,以1 376 G>T和1 388 G>A突变基因型为主。

两种分子生物学方法在结核分枝杆菌及其耐药基因检测中的比较分析

目的探讨Xpert MTB/RIF和荧光PCR熔解曲线两种方法检测痰液中的结核分枝杆菌和利福平耐药基因的情况,同时分析两种方法间的符合程度。方法收集痰液标本272例,其中肺结核患者组129例,其他呼吸道疾病患者组143例,对两组患者的痰液标本同时进行Xpert MTB/RIF和荧光PCR熔解曲线检测,分析结核分枝杆菌和利福平耐药基因的检出情况,并将其结果进行比较。结果129例肺结核组患者痰标本两种方法检测结核分枝杆菌阳性者共有123例,总阳性率为95.3%,其中Xpert MTB/RIF法检测阳性者121例,阳性率为93.8%;荧光PCR熔解曲线法检测阳性者121例,阳性率93.8%;两种方法检测均为阳性者119例,检测均为阴性者6例,总符合率为96.9%,二者比较无统计学差异(P>0.05)。两种方法检测结核分枝杆菌同时阳性标本中,利福平耐药12例,耐药率为10.1%,二者检测利福平耐药基因结果符合率高达100%。结论Xpert MTB/RIF法与荧光PCR熔解曲线法均可快速、有效、准确地检测结核分枝杆菌及利福平耐药基因,荧光PCR熔解曲线法可检测包括利福平在内的多种抗结核药的耐药基因,可作为耐多药结核早期筛查的方法,对结核病的防治有重要意义。