金莲花中荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷的含量测定

目的：测定金莲花（Flos Trollii Chinensis）中荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷（-2″-O-β-L-galactopyranosylo rientin）的含量。方法：HPLC法。结果：荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷含量为0．95％-4．07％（n=6），其中阿尔山金莲花的含量最高达3．40％±0．67％（n=3）。结论：用HPLC法对金莲花中的荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷进行了含量测定，方法可靠。结论：荭草素-2＂-O-β-L半乳糖苷是金莲花黄酮碳苷类组分中含量最高的药效组分之一，为金莲花黄酮类药效组分的深入研究提供了科学数据。

荭草素-2″ -O-β-L-半乳糖苷对照品的制备

目的制备一种用于金莲花及金莲花制剂含量测定的对照品。方法通过柱层析、重结晶方法进行分离、纯化制备荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷对照品,采用薄层色谱法、HPLC归一化法测定其纯度;利用理化性质、波谱特征鉴定其结构。结果从金莲花的乙醇提取液中分离得到纯度>98%的荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷。结论荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷可以作为金莲花及金莲花制剂含量测定用对照品。

RP-HPLC法同时测定金莲花中3种碳苷黄酮的含量

目的建立金莲花药材中3种碳苷黄酮含量同时测定的方法,以比较不同产地金莲花药材及不同部位中3种成分的含量。方法采用RP-HPLC法。色谱柱:Shim-pack C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈体积分数为0.35%的磷酸溶液(体积比为16∶84),流速:1.0 mL·min-1,检测波长:345 nm,柱温:25℃。结果荭草苷、牡荆苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷能够达到基线分离;荭草苷在9.94～99.40 mg·L-1、牡荆苷在2.49～24.90 mg·L-1、荭草素2″OβL半乳糖苷在10.64～106.40 mg·L-1内线性关系良好。结论本方法为金莲花药材的综合利用和资源开发提供了参考,有利于控制金莲花药材的质量。

金莲花70％乙醇提取液中黄酮碳苷类成分的研究(Ⅰ)

目的:对金莲花70％乙醇提取物中的黄酮碳苷类成分进行分离和鉴定,为制定金莲花的品质评价标准提供科学数据。方法:用聚酰胺、硅胶、SephadexLH-20色谱柱连续分离和纯化,利用波谱技术对化合物进行结构鉴定。结果:分离得到3个黄酮碳普类化合物,经鉴定分别为荭草素-2″O-β-L-半乳糖苷(2″O-β-L- Galactopyranosyl orientin)、荭草苷(Orientin)和牡荆苷(Vitexin)。结论:首次证明了金莲花中含有荭草素-2″O-β-L -半乳糖苷,并采用聚酰胺-硅胶-SephadexLH-20连续色谱法对该化合物进行了富集。本研究所采用的分离、纯化黄酮碳苷类成分的方法简便、经济、分离效果好。从金莲花中提取黄酮碳苷类成分用70％乙醇为溶剂效果较佳。佥莲花中的抗菌、抗病毒成分主要是黄酮碳苷类化合物,所以,本研究对科学阐释金莲花药效物质基础和有效组分具有重要意义。

金莲花多苷片中四种黄酮类化合物的含量测定

目的测定金莲花多苷片中四种黄酮类成分的含量。方法采用高效液相色谱法,以乙腈-0.2%磷酸溶液为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为室温,在360nm波长处,同时测定金莲花中四种黄酮类成分的含量。结果荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷、牡荆苷及槲皮素进样量分别在0.1976~1.9760μg、0.1010~1.0100μg、0.0604~0.6040μg、0.0608~0.6080μg范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.17%、98.09%、99.15%、98.54%,RSD分别为1.05%、0.90%、0.54%。0.73%。结论本方法简单准确,重复性良好,适用于金莲花多苷片的含量测定。

HPLC波长切换法同时测定中药复方凝胶剂中4种成分含量

目的建立HPLC波长切换法同时测定中药复方凝胶剂中没食子酸、没食子酸甲酯、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和荭草苷的含量的方法。方法采用Wondasil CHerb column(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱(0~12 min,16%B→19%B;12~12.5 min,19%B→18%B;12.5~20 min,18%B),流速为1.0 mL·min^(-1),柱温35℃,检测波长为273 nm(0~10.5 min)和350 nm(10.5~20 min)。结果4种成分均达到基线分离,没食子酸在2.047~5.628μg(r=0.9998),没食子酸甲酯在0.658~2.194μg(r=0.9993),荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷在0.984~3.280μg(r=0.9993),荭草苷在0.313~1.044μg(r=0.9993)范围内与峰面积的线性关系良好,平均回收率(n=9)在97.46%~99.92%范围内,RSD值在1.47%~2.87%之间。3批中药复方凝胶剂中没食子酸、没食子酸甲酯、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷和荭草苷的含量范围分别为94.14~114.54μg/g,30.87~32.81μg/g,39.89~44.53μg/g,21.51~21.70μg/g。结论该方法简便,稳定可靠,可用于测定中药复方凝胶剂中4种成分的含量,为中药复方凝胶剂的质量控制提供科学依据。

基于多种内参物的一测多评法测定金莲清热颗粒中6种成分含量

目的建立基于多种内参物的一测多评法测定金莲清热颗粒中芒果苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷、藜芦酸、牡荆苷和哈巴俄苷6个成分的含量。方法以Agilent Eclipse Plus C_(18)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相(梯度洗脱),流速为1mL/min,柱温为30℃,检测波长为270 nm。分别以荭草苷、牡荆苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷为内参物,采用一测多评法建立另外5个待测成分与内参物的相对校正因子,然后计算21批金莲清热颗粒样品中6个成分的含量,并与外标法测定结果进行比较。结果一测多评法测得21批金莲清热颗粒样品中芒果苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷、藜芦酸、牡荆苷和哈巴俄苷的含量范围分别为0.234~0.516、1.804~2.270、2.143~2.606、0.190~0.223、0.594~0.782、0.080~0.152 mg/g,外标法测定结果分别为0.235~0.523、1.798~2.265、2.137~2.599、0.190~0.224、0.597~0.786、0.077~0.151 mg/g,2种方法所测结果的差异百分比不大于4.00%。结论建立了基于多种内参物同时测定金莲清热颗粒中6种成分含量的一测多评法,该方法与外标法所得结果无明显差异,可用于金莲清热颗粒的质量控制。

金莲花中5个黄酮类化合物的大鼠体内代谢研究

目的:研究金莲花中5个黄酮类化合物的体内代谢产物。方法:将荭草素、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、牡荆素、2″-O-(2-甲基丁酰基)牡荆素、异槲皮素分别以静脉注射的方式给予大鼠,给药10 min后取血,利用高效液相色谱串联质谱法(HPLC-MS/MS)对血浆中的代谢产物进行分析。结果:大鼠体内共检测到20个代谢产物,其中5个来源于荭草素、2个来源于荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、3个来源于牡荆素、5个来源于2″-O-(2-甲基丁酰基)牡荆素、5个来源于异槲皮素。通过准分子离子峰及二级碎片推测20个代谢产物的结构及5个原型化合物的代谢规律。结论:5个黄酮类成分均可以通过氧化、甲基化、硫酸酯结合、葡萄糖醛酸结合等Ⅰ相及Ⅱ相代谢过程代谢为相应的产物。

金莲花口服液高效液相色谱指纹图谱建立及指标成分含量测定

目的 建立金莲花口服液的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱和多成分定量方法。方法 以荭草苷峰为参照,建立18批金莲花口服液的HPLC指纹图谱,确定共有峰,采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)评价相似度。采用HPLC法,测定荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷、牡荆苷、槲皮素的含量。结果 18批样品有22个共有峰,相似度均不低于0.988;指认2号峰为荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷,4号峰为荭草苷,8号峰为牡荆苷,17号峰为槲皮素。18批样品中,荭草素-2’’-O-β-L-半乳糖苷、荭草苷、牡荆苷、槲皮素的含量分别为(2.54±0.22)mg/mL、(3.12±0.37)mg/mL、(0.79±0.06)mg/mL、(0.28±0.04)mg/mL。结论 所建立的HPLC指纹图谱和多成分定量方法快速简便,可用于金莲花口服液的质量控制。

金莲花化学成分的HPLC-MS表征分析与鉴定

目的探讨金莲花Trollius chinensis成分的化学表征,为完善其质量标准和鉴定特征提供科学依据。方法采取HPLC-MS分析法。Hypersil ODS2(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.6%磷酸水,梯度洗脱,体积流量为1.2 mL/min,检测波长为345 nm,离子源为ESI()。结果中药金莲花化学组分的保留时间、分子离子峰(m/z)和碎片信息表征明显,重要化学成分为荭草苷(m/z 446.7[M-H])、牡荆苷(m/z 430.8[M-H])和荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷(m/z608.9[M-H])等。结论金莲花化学成分的HPLC-MS表征可以作为其鉴定特征。

不同采收期金莲花中3种碳苷黄酮成分动态变化

目的:通过研究不同采收期金莲花3种碳苷黄酮成分的动态变化,确立金莲花的最佳采收期,为金莲花取得最大药用价值提供科学依据。方法:采用高效液相色谱法,以乙腈-0.35%磷酸溶液(14∶86)为流动相,在345 nm波长处同时测定不同采收期金莲花中荭草苷、牡荆苷、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷3种碳苷黄酮成分的含量。结果:金莲花中3种碳苷黄酮成分的含量不同时期存在差异,均以开花后3～6 d为最高。结论:开花后3～6 d为金莲花的最佳采收时期,方法简便、精密度高、重复性好,为金莲花取得最大药用价值提供科学依据。

金莲花中5种主要成分含量的高效液相色谱法同时测定

目的建立HPLC法同时测定金莲花中色氨酸、对羟基苯甲苹果酸、荭草素-2”-O-β—L-半乳糖苷、荭草素、牡荆素的含量。方法以Phenomenex GeminiC。8色谱柱（4．6mm×250mm，5Ixm），乙腈-0．1％磷酸水溶液梯度洗脱，流速1ml·min^-1，柱温35℃C，检测波长230Bin。结果5种成分均达到基线分离，线性关系良好（r≥0．9987），平均加样回收率为95．05％-103．5％，RSD〈3％。结论该方法灵敏、准确、可靠、重复性好，可用于金莲花药材的质量评价。

高效液相色谱法同时测定金莲花胶囊中4种成分的含量

目的：建立HPLC法同时测定金莲花胶囊中对羟基苯甲苹果酸、荭草素-2″-O-β-L-半乳糖苷、荭草素、牡荆素4种成分的含量。方法：色谱柱为Gemini C18柱 （4.6 mm × 250 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱，流速为1.0 mL.min-1，检测波长为230 nm。结果：4个化合物在一定范围内线性关系良好（r ＞0.999），平均回收率为99.2%-101.1%，RSD ＜3.1% （n=6）。结论：该方法简便、准确、重复性好，可为该制剂的质量控制提供理论依据。

金莲花药材的质量标准研究

目的研究并建立金莲花药材的质量标准。方法采用性状描述、显微鉴别、有效成分定性和定量分析等方法控制金莲花药材的质量。结果金莲花药材粉末的显微鉴别特征性强,薄层色谱的斑点清晰,定量分析采用HPLC方法同时测定了荭草素和荭草素-2"-O-β-L-半乳糖苷,平均加样回收率分别为98.42%(RSD=0.82%)、100.87%(RSD=0.86%),10批药材中二者的平均含量分别为1.31%、0.48%,并制定了二者总含量的限度。结论所用方法简便、可靠、稳定、准确,能全面控制金莲花药材的质量。

阿尔泰金莲花有效成分抗炎作用的研究

目的:研究阿尔泰金莲花总黄酮及其成分荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷(OGA)的抗炎作用。方法:以环氧合酶1/2(COX 1/2)及5-脂氧酶(5-LO)抑制剂筛选试剂盒检测阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对COX 1/2和5-LO的抑制作用;脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞建立炎症细胞模型,采用MTS法检测阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对RAW264.7细胞活力的影响,Griess试剂检测一氧化氮(NO)的分泌量,用2’,7’-氯荧光黄双乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧(ROS)释放情况,ELISA法测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和前列腺素E;(PGE;)的分泌量,RT-qPCR法测定炎症因子Tnf-α、Il-1β和Il-6的mRNA表达。结果:阿尔泰金莲花总黄酮对COX-1、COX-2酶的半数抑制浓度分别106.66μg/mL,6.94μg/mL;荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对COX-1、COX-2的半数抑制浓度分别为140.34μg/mL,5.01μg/mL,阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷对5-LO无明显影响;阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷在1.95μg/mL~125μg/mL条件下对RAW264.7细胞不产生毒性作用。与正常对照组比较,模型对照组细胞中NO、ROS、TNF-α、IL-6、MCP-1和PGE;含量显著升高(P<0.01),Tnf-α、Il-1β和Il-6 mRNA表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,阿尔泰金莲花总黄酮和荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷呈剂量依赖性地降低细胞中NO、ROS、TNF-α、IL-6、MCP-1和PGE;的分泌(P<0.05或P<0.01),下调Tnf-α、Il-1β和Il-6的mRNA表达(P<0.05或P<0.01)。结论:阿尔泰金莲花总黄酮具有良好的抗炎作用,荭草素2″-O-β-L-半乳糖苷是其发挥抗炎作用的物质基础之一,其作用机制可能是通过抑制COX-2活性,减少RAW 264.7细胞NO、PGE;、MCP-1及炎性因子的分泌,下调Tnf-α、Il-6、Il-1βmRNA的表达有关。