阿瑞匹坦通过内质网应激逆转结直肠癌小鼠化疗耐药的机制研究

目的探讨阿瑞匹坦(Apr)通过内质网应激(ERS)逆转结直肠癌(CRC)小鼠模型5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药的分子机制。方法选取30只小鼠作为实验动物,随机分配其中5只为对照组(Control组),剩余25只采用背部皮下注射法构建HCT-116/5-FU CRC小鼠模型,并设为CRC组、5-FU组、Apr组、Apr+5-FU组和Apr+ERS抑制剂牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA)组,每组5只。记录小鼠体质量变化及肿瘤发生情况,并计算其脏器指数。采用蛋白印迹法(WB)检测各组蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核翻译起始因子2亚基α(eIF2α)、激活转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的蛋白表达水平。结果用药后5、10、15、20 d时,CRC组、5-FU组、Apr组、Apr+5-FU组、Apr+TUDCA组小鼠体质量的组间比较、时点比较及交互作用比较,差异无统计学意义(P>0.05)。末次给药2 d后,各组小鼠胸腺、肺脏、肝脏、脾脏、心脏、肾脏等脏器指数组间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与CRC组比较,Apr组、Apr+5-FU组小鼠PERK、p-eIF2α/eIF2α、ATF4、CHOP蛋白表达水平升高,肿瘤数量减少,肿瘤质量降低,肿瘤体积减小,差异有统计学意义(P<0.05),且Apr+5-FU组改善情况优于其他组,差异有统计学意义(P<0.05)。增加ERS抑制剂TUDCA干预后,抗肿瘤效应及ERS途径激活均受到抑制。结论Apr可增强CRC小鼠化疗敏感性并逆转其化疗耐药性,其可能通过介导ERS途径的下游分子发挥这一作用。

头孢克洛人体尿药浓度的毛细管电泳分析

目的 :建立适合国人尿液中头孢克洛分离分析的毛细管电泳方法。方法 :用重蒸馏水多倍稀释尿液后直接进样电泳分析。电泳分离条件为 :未涂层毛细管 48cm× 5 0μm ;运行缓冲液为 5 0 m mol/ L磷酸二氢钠 - 12 .5 mm ol/ L硼砂 (p H 8.0 8) ;操作电压 2 0 k V(+ )→ (- ) ;压力进样 8.2 74× 10 4Pa· s;柱上紫外 2 6 5 nm检测。 结果 :头孢克洛和内标物头孢拉定在 6 .5min内获得了理想的分离。尿药浓度在 2 .5～ 2 5 0 .0μg/ ml范围内线性关系良好 (r =0 .9991,n =5 ) ,绝对回收率大于95 .5 % ,日内及日间精密度均小于 8.0 %。 结论 :毛细管电泳应用于健康志愿者口服头孢克洛普通胶囊后尿药浓度的动态分析 ,方法准确可靠 。

龙胆苦苷在健康受试者尿中的药代动力学

目的研究中药龙胆苦苷(保肝、利胆中药活性成分)在健康受试者尿中的药代动力学。方法筛选12名健康受试者按双拉丁方设计,分别静脉滴注龙胆苦苷80、240、400 mg,用LC/MS/MS法测定各时段的尿药浓度,用WinNonlin软件计算尿药代动力学参数。结果3个剂量下原药的最大尿排速率分别为20.5、60.8、105.5 mg.h-1(tmax为0.75 h),尿排速率-时间曲线下面积分别为51.1、144.7、269.8 mg;25.5 h累积尿排量分别为61.3、172.7、319.1 mg,经统计均与剂量呈正比;t1/2分别为2.96、2.90、2.90 h,消除速率常数k分别为0.25、0.26、0.25 h-1;3个剂量的平均25.5 h累积尿排率为76.1%,其中0～7.5 h占总排泄量的96.2%。结论龙胆苦苷在人体内主要以原形经肾脏快速排泄,在80～400 mg内呈线性药代动力学特征。

LC-MS/MS法同时测定人尿液中5-氟尿嘧啶和吉美嘧啶浓度及其尿药排泄研究

目的:建立5-氟尿嘧啶和吉美嘧啶尿药浓度的LC-MS/MS同时测定方法,研究胃癌患者口服替吉奥胶囊后其活性代谢物5-氟尿嘧啶和增效剂吉美嘧啶的人体尿药排泄特征。方法:尿液样品酸化后用异丙醇-乙酸乙酯(15∶85)提取,采用HederaODS-2色谱柱分离,流动相为甲醇-0.01%的乙酸水溶液(35∶65);质谱采用电喷雾离子源和负离子多反应离子监测方式。6名胃癌患者单次口服替吉奥胶囊60mg后,测定尿药浓度,评价其尿药排泄特征。结果:5-氟尿嘧啶和吉美嘧啶的最低定量下限分别为0.15μg·mL-1和0.10μg·mL-1;高、中、低浓度的日间与日内精密度均小于15%。6名胃癌患者单次口服替吉奥胶囊后尿液中5-氟尿嘧啶和吉美嘧啶的平均累积排泄率分别为4.9%和18.1%。结论:建立的LC-MS/MS分析方法适用于尿药排泄研究。

健康志愿者头孢克罗尿药浓度测定及3种制剂尿排量比较

目的:比较头孢克罗3种制剂的尿药浓度和尿排量.方法:8名健康志愿者分别单剂量po国产头孢克罗缓释片、头抱克罗普通胶囊和进口头孢克罗缓释片750mg,采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定尿中头孢克罗浓度,计算8h分段和累积尿排量及尿排百分率,用配对t检验比较3种制剂尿药浓度和尿排量.结果:国产缓释片与进口缓释片相比,相应各时间段尿药浓度无显著性差异,8h分段和累积尿排量无显著性差异;普通胶囊0～2h尿药浓度和尿排量较缓释片高,2～4、4～6、6～8h均低于缓释片,但3种制剂8h累积尿排量和尿排百分率无显著性差异.结论:缓释片维持有效尿药浓度时间比普通胶囊长.

HPLC法测定口服5-氨基水杨酸制剂后血浆和尿中的药物及其代谢物

目的 建立测定血浆和尿样中 5 氨基水杨酸 (5 ASA)及代谢物乙酰 5 氨基水杨酸 (Ac 5 ASA)浓度的HPLC方法 ,并进行 5 ASA缓释片Pentasa的人体药动学研究。方法 使用荧光检测器 ,以丙酰 4 氨基水杨酸为内标 ,用衍生化法使样品中的 5 ASA丙酰化 ,甲醇沉淀蛋白后上清液直接进样。色谱柱为PhenomenexLunaTMC18,流动相为 0 .1mol/L乙酸溶液∶乙腈∶三乙胺 (46 0∶40∶0 .4,V/V/V)的混合液。测定 6位健康志愿者口服10 0 0mgPentasa后血药浓度和尿药浓度。结果 血浆中 5 ASA及代谢物的线性范围为 0 .0 1～ 10 μg/ml,尿样中为 0 .2～ 2 0 0 μg/ml,血浆和尿中药物与代谢物的回收率在 95 .3 %～ 10 6 .2 %之间 ,日内日间相对标准差均在0 .5 2 %～ 9.2 2 %范围内。Pentasa口服后 5 ASA和Ac 5 ASA的血药浓度在 3～ 4h内达到峰值 ,分别为 1.5 5和3 .11μg/ml,AUC分别为 6 .90和 2 6 .32 μg/(ml·h) ,6 0h内尿中排泄了口服剂量 37.1%的药物。结论 方法简便 ,灵敏度和准确度高 ,可用于 5 ASA制剂的药物动力学研究。

猪静注隐丹参酮尿药排泄分析

６头猪单剂量（１０ｍｇ／ｋｇ）静注隐丹参酮后，收集自然排出的尿液，以反相高压液相色谱法检测隐丹参酮及其活性代谢物丹参酮ⅡＡ在尿中的浓度，分时间段计算排泄量及排泄总量，并计算排泄量占给药量的百分比。结果表明，在测定时间内，尿中隐丹参酮排泄量平均为０．２３７６％，丹参酮ⅡＡ排泄量平均为０．０９５２％。

分光光度法测定左旋氧氟沙星的尿药浓度

用分光光度法测定尿液中左旋氧氟沙星（ＬＶＦＸ）的排泄量。尿样在二甲基亚砜存在下与三氯化铁甲醇溶液反应显色，经甲醇稀释，在４１７ｎｍ波长处直接测定吸光度。方法平均回收率为（１００．５±２．４７）％，ｎ＝９，线性范围（１６．２２～２２７．１４）μｇ／ｍｌ（ｒ＝０．９９９７），ＲＳＤ＜６．０８％。受试者尿中的ＬＶＦＸ１２ｈ总排泄量为给药量的５７．０５％。该法精密度、重现性良好，操作简便，可应用于人尿中ＬＶＦＸ的测定。

PBA光纤化学传感器在线监测家兔口服呋喃妥因的尿药浓度

芘丁酸光纤化学传感器（ＰＢＡ—ＦＯＣＳ）用于在线测定家兔口服呋喃妥因后排出尿液中的药物浓度。方法的检出限为１．３μｇ／ｍＬ，线性范围１～１００μｇ／ｍＬ，精密度（ＲＳＤ）１．５～３．５％，回收率在９５．０～１００％之间。４只雄性家兔的尿药浓度—时间曲线显示达峰时间为３．５ｈ，６ｈ累积尿药排出百分率为２１％。实验结果显示传感器、测定池和仪器系统设计合理。可实时、在线测定生物体液中的药物浓度并达到实用水平。

LC/MS/MS测定龙胆苦苷的尿药浓度

目的建立龙胆苦苷尿药浓度的液质联用测定方法(LCM/SM/S)。方法以咖啡因作内标,固相萃取法处理尿样。色谱柱:RESCEK C8柱(150mm×2.1mm,5μm),流动相为甲醇-10mm ol.L-1醋酸铵缓冲液(pH=6.5)-乙腈(50∶40∶10),流速为0.2m L.min-1。样品经电喷雾离子源(ESI)正离子化后,通过三级四极杆串联质谱仪,采用多反应离子监测方式测定龙胆苦苷(mz/374.1→195.2)和咖啡因(m z/195.2→138.2)浓度。结果尿液中龙胆苦苷在30～9000ng.mL-1浓度范围内线性关系良好r(=0.9980),方法回收率为91.10%～96.21%,提取回收率为100.52%～103.83%,日内、日间精密度均<10%。结论该方法灵敏、准确、快速、特异性强。

奥扎格雷钠口服溶液人体尿药浓度研究

目的建立测定人尿中奥扎格雷钠浓度的HPLC方法;通过测定12名健康受试者单次po200mg奥扎格雷钠口服溶液后体内的尿药浓度,考察奥扎格雷钠体内代谢过程。方法采用Diamonsil C18柱(4.6mm×150mm,5μm),磷酸盐缓冲液(pH=3.0)-乙腈(94:6)为流动相,流速为1.5mL.min-1,咖啡因为内标,紫外检测波长为276nm。结果奥扎格雷钠在0.01～10mg.L-1内线性关系良好,r=0.9962;健康受试者服药后12h内有(41.77±15.47)%的奥扎格雷钠从尿中排出。结论此方法灵敏、准确、稳定,可用于奥扎格雷钠体内代谢研究;奥扎格雷钠主要以原型从尿中排出。

顶空气相色谱法测定二氯乙酸二异丙胺尿药浓度

目的 :建立顶空气相色谱法测定尿中二氯乙酸二异丙胺浓度。方法 :AgilentDB - 5MS毛细管色谱柱 (30m× 0 .2 5mm) ,柱温 :4 0℃保持 2min ,以 5℃ /min升至 80℃保持 2min ,再以 2 0℃ /min升至 2 0 0℃保持 8min ;进样口温度 2 0 0℃ ,分流比 5∶1;氢火焰检测器 ,检测温度 30 0℃ ;载气为高纯N2 ,流速 1ml/min ,H2 35ml/min ,空气 35 0ml/min ;内标仲丁醇。结果 :标准曲线线性范围为 8～ 80 0 μg/ml,尿中二氯乙酸二异丙胺提取回收率为 88.75 %～ 98.0 6 % ,相对回收率为 97.36 %～ 10 3.2 5 % ,日内和日间RSD分别为 2 .95 %～ 6 .6 2 %和 2 .4 5 %～ 5 .6 1% ,最低检测浓度为 2 μg/ml。 结论 :该法操作简单 ,杂质干扰小 ,提取回收率高 ,适合于二氯乙酸二异丙胺尿药浓度的测定。

RP-HPLC法测定法罗培南血药浓度和尿药浓度

目的：建立测定法罗培南血药浓度和尿药浓度的RP-HPLC法。方法：采用Diamond C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm），血样与尿样测定流动相分别为0．02mol／L磷酸二氢钾缓冲液（pH=2．95）：乙腈=75：25和81：19，流速均为1．0mL／min，检测波长均为318nm。结果：血浆样品的线性范围为0．03125～2．5μg／mL（r=0．9999）、2．5～120μg／mL（r=0．9997），最低检测浓度为31．25ng／mL，绝对回收率为68．9％～77．8％；尿液样品的线性范围为0．5～20μg／mL（r=0．9999）、20～1600μg／mL（r=0．9997），最低检测浓度为0．5μg／mL，绝对回收率为96．5％～106．0％。日内及日间精密度均〈11．0％。结论：本方法简单、快速，灵敏度和准确度较高，能满足法罗培南钠注射液临床药动学研究的需要。

离子对RP-HPLC法测定甲磺酸帕珠沙星尿药浓度

目的：建立反相离子对高效液相色谱法以测定尿液中帕珠沙星浓度。方法：色谱条件：Kromasil C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相：3mmol／L十二烷基硫酸钠（含0.5％三乙胺，用H3PO4调pH至4．0）-乙腈（62：38，V/V）；流速：1.0mL/min；紫外检测波长：242nm。结果：尿液标准曲线线性范围为1-300mg／L（r=0．9998），高、中、低三种浓度的批内和批间精密度均小于10．0％，提取回收率为94．0％-95．3％。12名健康志愿者分别进行单剂量静脉滴注注射用甲磺酸帕珠沙星后，帕珠沙星在24小时内尿液中的累积尿药排泄率为（90.3±2.6）％。结论：本方法准确可靠，操作简便，适用于临床药代动力学及常规尿药浓度监测。

非诺洛芬钙尿药浓度的HPLC测定

非诺洛芬钙尿样经酸解后用正己烷提取，采用ＨＰＬＣ法以酮洛芬为内标，检测尿药浓度，平均回收率为９８．１％。

液相色谱-串联质谱法测定健康人口服复方氨酚右敏溶液后的尿药浓度

目的建立高效液相色谱-串联质谱联用法同时测定人尿中对乙酰氨基酚和右氯苯那敏(解热镇痛药)浓度及其排泄。方法12名健康志愿者按3×3拉丁方顺序进行,单剂口服给药后,按设计时间点收集尿样;尿样加入曲马多为内标,甲醇沉淀蛋白后进样,用多重反应监测,定量检测对乙酰氨基酚和右氯苯那敏的浓度。结果对乙酰氨基酚和右氯苯那敏线性范围分别为0.05～20.00μg·mL-1和0.05～20.00ng·L-1;96h内对乙酰氨基酚和右氯苯那敏低、中、高剂量组的原形药物的平均累积排泄率分别为(3.87±0.75)%、(3.86±1.33)%、(3.56±1.45)%和(8.06±3.79)%、(7.62±3.39)%、(8.10±3.42)%。结论本方法适于同时测定人尿中对乙酰氨基酚和右氯苯那敏浓度,且2者在人体内主要以非原形药排泄。

HPLC-MS法测定氯吡格雷酸人体尿药浓度及氯吡格雷酸经尿排泄研究

目的:建立测定氯吡格雷酸人体尿药浓度的高效液相色谱-质谱联用方法,并通过监测硫酸氢氯吡格雷片经健康受试者口服后其主要Ⅰ相代谢物氯吡格雷酸尿药浓度的经时变化过程,考察氯吡格雷酸经尿排泄特征。方法:色谱采用Lichrospher C18柱(150 mm×2.1 mm,5μm),以甲醇-10 mmol.L-1醋酸铵水溶液(含0.1%甲酸)(42∶58)为流动相。质谱采用电喷雾离子源四级杆质谱,以选择性离子监测方式进行正离子检测。6名健康受试者单次口服硫酸氢氯吡格雷片75 mg后,定时收集尿样。采用甲醇直接稀释法处理尿样后,评价氯吡格雷酸经尿排泄特征。结果:氯吡格雷酸在4.780～9 559μg.L-1质量浓度范围内线性关系良好,平均回收率大于93.4%。受试者服药后0～2小时间,氯吡格雷酸经尿排泄速率最大;36小时内有(1.1±0.5)%的氯吡格雷以氯吡格雷酸形式从尿中排出。结论:该测定方法符合生物样品分析要求;氯吡格雷在体内以氯吡格雷酸形式经尿排泄迅速,24小时内基本排泄完全。

对噻嗪类利尿降压药的重新评价

对噻嗪类利尿降压药的重新评价孙明⒇噻嗪类利尿降压药单独或与β受体阻滞剂联合用于治疗高血压有效，近年来已被许多大规模临床试验如美国ＳＨＥＰ试验（老年单纯收缩期高血压治疗试验１９９１），瑞典ＳＴＯＰ－ＨＹＰＥＲＴＥＮＳＩＯＮ试验（老年高血压治疗试验１９９...

高效液相法测定加替沙星尿药浓度

目的 建立反相高效液相色谱法以测定大鼠尿液中加替沙星浓度。方法 尿液样品用二氯甲烷提取 ,以环丙沙星为内标 ,色谱柱 :LichrosorbC1 8,流动相 :甲醇 - 0 .0 1mol/L ,磷酸二氢钾缓冲液 - 0 .5mol/L ,四丁基氢氧化铵溶液 (1 5∶75∶1 .4) ,磷酸调 pH至 2 .6 ;流速为 1 .0ml/min ;检测波长 2 98nm。 结果 本法在 3 .1 0～ 1 55 .2 μg/ml范围内线性良好 ,r=0 .9995 ,日内RSD为 5 .1 %～ 9.7% ,日间RSD为 5 .7%～ 1 0 .2 % (n =5) ;尿液最低检测浓度为 50ng/ml。 结论 本法测试快速、准确。