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题名应用抑制性消减杂交技术分离E1A药敏相关基因
被引量:1
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作者
马业伟
千新来
赵清正
周小山
李艳春
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机构
中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所
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出处
《癌症》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期146-149,共4页
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基金
国家自然科学基金项目(No.30171058)~~
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文摘
背景与目的:大量研究已经证明,腺病毒5型E1A基因能抑制肿瘤的生长和转移,逆转其恶性表型,特别是能提高肿瘤细胞对多种化疗药物的敏感性,对射线也具有明显的增敏作用。但E1A基因通过哪些基因发挥作用还不知道。本研究利用抑制性消减杂交(suppressionsubtractivehybridization,SSH)技术在药物敏感的肿瘤细胞中分离差异表达的E1A药敏相关基因。方法:以E1A蛋白处理的人头颈淋巴结转移肿瘤细胞LN686为实验组,以亲本LN686细胞为对照组,提取mRNA,构建消减cDNA文库。随机挑取克隆,采用斑点杂交技术鉴定差异基因片段的表达水平,分析所获cDNA核苷酸序列,并在GenBank中进行比较,半定量RT-PCR鉴定实验组和对照组中新基因的mRNA水平。结果:文库包含约7000个阳性克隆,随机挑取384个克隆进行PCR鉴定,其中362个有插入片段,通过斑点杂交技术,证实这些基因在实验组中表达水平较对照组显著提高。将这362个克隆进行测序并经过BLAST分析,表明10个为新基因,已在GenBank中登录。对其中7个新基因进行半定量RT-PCR检测,证明经E1A蛋白处理的LN686细胞中,新基因的表达水平明显高于亲本LN686细胞,相差3~8倍。结论:应用抑制性消减杂交技术筛选到10个新基因片段,为进一步克隆其全长基因、研究其功能打下基础。
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关键词
肿瘤
化学治疗
耐药性
抑制性消减杂交
E1A蛋白
药敏相关基因
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Keywords
Suppression subtractive hybridization (SSH)
E1A protein
Differential expression
Drug sensitive associated new genes
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分类号
R73-3
[医药卫生—肿瘤]
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