基于DNA条形码分子技术的海龙及其混伪品鉴定研究

目的:基于DNA条形码分子技术对动物药海龙及其混伪品进行鉴别,建立一种统一的海龙鉴定技术手段。方法:对收集到的动物药海龙及其混伪品进行DNA提取、PCR扩增和双向测序检测,运用CodonCodeAligner进行序列拼接,采用MEGA7.0软件进行序列比对分析,比较种内、种间序列差异,构建动物药海龙及其混伪品的系统发育树。结果:所有海龙药材及其混伪品均可以使用中药材DNA条形码分子鉴定技术进行鉴别,共得到7个物种129条序列,各物种之间序列区分明显。结论:中药材DNA条形码鉴定技术能够准确有效地鉴别动物药海龙及其混伪品,可以作为海龙类中药的统一鉴定方法,为海龙的临床用药安全提供了新的分子技术手段。

A Molecular Approach to Identification of the Chinese Drug“pu Gong Ying”(Herba Taraxaci)and Six Adulterants byDNA Fingerprinting Using Random Primed PolymeraseChain Resaction(PCR)

DNA fingerprinting among members of the Chinese drug Pu Gong Ying(Taraxacum mongolicum Hand,-Mazz.)and six adulterants of Tu Gong Ying were demonstrated with random-primed polymerase chain reaction(PCR)including arbitrarily primed polymerase chain reaction(AP-PCR)and random amplified polymorphic DNA(RAPD).Distinctive,reproducible genomic fingerprints from DNA from 7 species belonged to Compositae were generated with two long(20 and 24 mer)and one short(10 mer)randomly chosen primers.The Pu Gong Ying can be differentiated from six species of Tu Gong Ying according to the banding pattems of their amplified DNA on agarose gels.The results showed that AP-PCR and RAPD methods can be used for identifying Chinese drugs.Moreover,the Similarity Indexes of the genomic DNA fingerprints showed that Pu Gong Ying and its adulterants are unrelated.Therefore,AP-PCR and RAPD methods can be used for identifying Chinese drugs.

栀子及其近缘茜草科植物、混伪品的rDNA-ITS2序列分析

目的：利用r DNA-内转录间隔区2（internal transcribed spacer 2,ITS2）序列对栀子及其近缘茜草科植物、混伪品进行快速鉴定。方法：对研究材料ITS2片段进行聚合酶链式反应（PCR）扩增并双向测序,所得序列经Codon Code Aligner拼接后,序列变异位点采用PAUP 4.0b10进行统计分析,利用MEGA 5.0软件进行数据分析,并构建邻接（NJ）树,再利用已建立的ITS2数据库及其网站预测ITS2二级结构。结果：对栀子及其近缘茜草科植物、混伪品ITS2序列长度为201～235 bp,系统发育树上显示不同来源的样本根据亲缘关系的远近各聚一支,表现出单系性;而同时又与混伪品明显分开。比较ITS2二级结构发现,栀子及其近缘茜草科植物、混伪品在4个螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋发出时的角度均有明显差异。结论：r DNAITS2可以方便快捷地鉴定栀子及其近缘茜草科植物、混伪品。